Способ определения повреждения паренхимы печени

(51)4 0 01 В, 33/5 БРЕТ ЬСТВУ дарствен- Н,И,Пив,в,С.Мит т уе гезрг 1 а апйс 11 опа 1О, 23, 11 опзе оГСз ге 1 а. -гезегуе, -7 р(57) Из цине, а и тяжес ений пр еваниях ин с гепа вляетсяДля изме идазной ече в среде сахарозы,лучают гомог ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ С О ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНР ОПИСНИ ВТОРСКОМЮ СВИ(71) Второй Московский госный медицинский институт ирогова(56) К.Огарка, АдараСЬе Лчег ппСосЬопй1 оп 1 о ЬераС 1 с 1 цпАз 1 ап, Мей.198с. 499-528,(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОВРЕЖДЕНИЯПАРЕНХИМЫ ПЕЧЕНИ ретение относится к меди- именно к способам диагностии гепатоцеллюлярных поврежострых и хронических забопечени, и может применятьической и экспериментальологии. Целью изобретения повышение точности способа, ения ТМФД- и цитохром-с-окактивности забирают кусочек в гомогенизаторе Даунса поЭДТА и трисбуфера (рН 7,6-7,8), Отношение ткани печени и среды составляет 1:2 масса/объем. Полярографичес кий анализ проводят со стандартным платиновым электродом Кларка закрытого типа. В полярографическую кювету объемом 1,1 мл с трис-НС 1-буферомо(1=37 С) вносят полученный гомогена в расчете 1-2 мг белка на данный объем кюветы, записывают скорость потребления кислорода. Аналогичные записи проводят при последовательном добавлении в кювету раствора аскорбата натрия - конечная концентрация 2 мМ, ТМФД и цитохрома-с (конечная концентрация 1 мкМ и 5 мкМ, соответственно). В полярографической кюве - те рассчитывают цитохром-с и ТМФД- оксидадную активности на 1 мг белка за вычетом аскорбат - зависимого потребления кислорода. Вычисляют ско - рость потребления тканью печени кислорода в присутствии ТМФД и цито- хрома-с и в присутствии только Т 1 ЮД. Рассчитывают отношение этих двух показателей, которое в норме равно 1,9 ед. Если отношение превышает зна чение 1,9 ед то это свидетельст-вует о той или иной степени повреждения печени, (ТМФД-тетраметилпарафенилендиамин).Изобретение относится к медицине, а именно к способам диагностикитяжести гепатоцеллюлярных повреждений при острых и хронических заболеваниях печени, и может найти применение в клинической и экспериментальной гепатологии,Целью изобретения является повышение точности способа за счет количественной оценки повреждения тканина основе определения скорости потребления ею кислорода в присутствии тетраметилпарафенилендиамина(ТМФД) в пробах с добавлением цитохрома-с и без него, с дальнейшим вычислением отношения первого показателя к второму, по величине которого определяют повреждение органа.Способ осуществляют следующим образом.Для измерения ТМФД- и цитохром-с-оксидазной активности гомогената печени забирают кусочек органа ив гомогенизаторе Даунса приготовляют гомогенат в среде, состоящей из0,25 М сахарозы, 21 О М ЭДТА,0,01 М трис-НС 1-буфера (рН 7,6-7,8).Отношение ткани печени и среды составляло 1:2 масса/объем. Полярографический анализ проводят со стандартным платиновым электродом. Кларка закрытого типа. В полярографическую кювету объемом 1,1 мл с трис-НС 1-буфером (1=37 С) вносят полученный гомогенат в расчете 1-2 мгбелка на данный объем кюветы. Послечего записывают скорость потребления кислорода. Аналогичные записипроводят при последовательном добавлении в полярографическую кюветураствора аскорбата натрия - конечная концентрация 2 мМ ТМФД и цитохрома-с (конечная концентрация1 мкМ и 5 мкМ соответственно). В полярографической кювете рассчитывали цирохром"с- и ТМФД-оксидазнуюактивности на 1 мг белка за вычетомаскорбат-зависимого потребления кислорода. В результате анализа вычисляют скорость потребления тканью печени кислорода в присутствии ТМФДи цитохрома-с и в присутствии только одного ТМФД. Далее рассчитываютотношение этих двух показателей,которое в норме равно 1,9 ед., чтосоответствует 1,9 1 О жизнеспособных гепатоцитов, выделенных на 1 гткани (практически 100 . жизнеспособных клеток). Если отношение превы 5 10 5 20 25 30 35 40 45 50 55 шает значение 1,9 ед., то это свидетельствует о той или иной степени повреждения печени,Примеры осуществления способа,П р и м е р 1, В гомогенате печени крыс, затравленных гепатоторопнымядом СС 1 в дозе 0,25 мл/100 г весатела, измеряли ТМФД- и цитохром-соксидазные активности и их отношение(коэффициент),как это описано вышеПри исследовании через 12 ч послезатравки ядом коэффициент составляет 7,2+0,05 ед., а количество жизнеспособных клеток печени в 1 гпечени - 0,69 10 , т.е. 36 , К24 ч коэффициент достигает 10,9ф 0,4 ед. Соответственно этому снижается процент жизнеспособных гепатоцитов до 25(,0,47 1 О (жизнеспотсобных клеток в 1 г печени).П р и м е р 2. С целью созданиямодели механической желтухи у крысперевязывали общий желчный проток.Печень подвергали исследованию через7 дней после операции, как это описано в примере У 1 . У этих животныхкоэффициент составлял 9,82+0,03 ед.при этом жизнеспособные гепатоцитысоставляли 24(0,461 О ).П р и м е р 3. Больная Велиханова Р.К 41 г диагноз: желчно-каменная болезнь. Течение заболеваниянеосложнвнное, жалоб в анамнезе неотмечалось, функциональные печеночные пробы без отклонений от нормы,диагноз установлен на основании рентгенологического обследования, больная оперирована в плановом порядке,Это дало основание принять коэффициент цитохром-с- и ТМФД-оксидазнойактивности у данной больной за относительную норму. Кусочек ткани печени весом до 1,5-2 г забирали путемкраевой клиновидной резекции печениво время оперативного вмешательства,Коэффициент определяли, как это описано в примере 1, Величина коэффициента составляла 2,5 ед., что соответствовало 95 жизнеспособных клеток.Предлагаемый способ является высокочувствительным методом количественной оценки степени гепатоцеллюлярных повреждений, его использованиепозволяет ускорить получение информации о степени вовлечения органа (печени) в патологический процесс: даетвозможность с объективных позицийрешать вопрос о выборе методов кон287007 Составитель И,ЕмельяненкоРедактор Н.Слободяник Техред Л.Олейник Корректор М.Демчик Заказ 7708/г 5 Тираж 776 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Подписно е Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 сервативной терапии и хирургического лечения заболеваний пчени и желчных путей, острой печеночной недостаточности, оценить эффективность проводимого лечения, прогнозировать дальнейшее течение заболевания. Данный способ технически легко и быстро (в течение 20 мин) выполним, не требуется использования дорогостоящей аппаратуры, благодаря чему его целесообразно широко испольэовать в условиях клиники и эксперимента,Формула изобретенияСпособ определения повреждения паренхимы печени путем биохимического исследования гомогената ткани органа, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа за счет количественной оценки повреждения ткани, определяют скорость потребления ею кислорода в присутствии тетраметилпарафенилендиамина в пробах с добавлением цито.хрома-с и без него, далее рассчиты вают величину отношения пер -вого показателя к второму ипри увеличении этого зна - чения относительно нормы оп ределяют повреждение паренхи - 15 мы печени.