Способ определения иммунных комплексов

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН 31 А 1 19) 111)1 К 390 ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ- .,а л фъ1ЦДОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯАВТОРСКОМУ С 8 ИДЕТЕЛЬСТВУ Знаметитут СССР(71) Ордена Трудового Красногони научно-исследовательский инэкспериментальной медицины АМН. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУННИХКОМПЛЕКСОВ, включающий сорбированиеи связывание их с протеином А стафилококка, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью повьппения точностиопределения, перед сорбированием изисследуемой крови удаляют мономерныеиммуноглобулины,.а сорбирование исвязывание осуществляют на стекле,при этом протеин А стафилококка добавляют на нейтральном носителе иположительной реакции агглютинацииопределяют наличие иммунного комплек20 25 ЗО 35 40 П р и м е р 2. Сыворотка крови больного системной красной волчанкой по описанной метддике исследовали на наличие иммунных комплексов 1. обретение относится к биологии и может найти применения в клинической иммунологии, в особенности при диагностике иммулокомплексных болезннеи, 5Целью изобретения является повыше ние точности определения.Способ поясняется следующими примерами.П р и м е р 1. Приготовление протеина Л на носителе. Носителем для протеина А могут служить частицы дерматола, латекса, эритроциты барана. Нагрузку протеина А на носитель производят иэ расчета 62 мкг белка протеина А на 1 г дерматола, последний используют в виде взвеси в 1 мл боратного буфера рН 8,4. Сыворотку крови больного хроническим неспецифическим заболеванием легких разводят дистиллированной водой 1:Р. При подкислении субстрата до рН 4,р-р,0 моно- мерные иммуноглобулины остаются в надосадке. Отделение их от фракции, в которой предполагается наличие иммунных комплексов, производят центрифугированием в течение 30 мин при 2000 об/мин, 4 С и однократном отмывании осадков дистиллированной водой при рН 7,0. После этого осадок рас" творяют в исходном объеме физиологического раствора и готовят ряд последовательных разведений, начиная с 1:2 до 1:256.Реакцию агглютинации ставят при комнатной температуре на стекле. К одной капле О,ОР мл каждого разведения добавляется оцна капля (О,ОРмл) взвеси носителя с протеином А. Стекло покачивают на руках р мин, после чего производят учет реакции под микроскопом (объектив 8 окуляр 10 х), 0 наличии иммунного комплекса в субстрате свидетельствует агглютинация частиц носителя с протеином А, Чувствительность метода - 2 мкг белка .комплекса в 2 мл субстрата. В результате проведенных испытаний в сыворотке крови больного хроническим неспецифическим заболеванием легких получена реакция агглютинации частиц носителя с протеином А, что свидетельствует о наличии в испытуемом субстрате иммунных комплексов. с помощью протеина А на носителе, в этом образце сыворотки также получены положительные результаты - констатировано наличие агглютированных частиц протеина А на носителе. В параллельных опытах эти же образцы сывороток были исследованы методом фиксации комплемента, взятого в качестве прототипа. При анализе сывороток этим методом на наличие иммунных комплексов получены отрицатель-, ные результаты.Таким образом, в ббоих примерах обнаружили иммунные комплексы при помощи предлагаемого способа, при этом используемый для сравнения способ-прототип дал отрицательные результатыИспользование предлагаемого способа позволяет расширить возможности диагностики заболеваний, связанных с образованием иммунных комплексов, не сорбирующих комплемент.При таких заболеваниях, как хронические неспецифические заболевания легких, холера, брюшной тиф, колиэнтерит, решающую роль играет иммуноглобулин класса А, не обладающий способностью сорбировать комплемент. Заболевания вирусной этиологии также сопровождаются выработкой иммуноглобулина класса А.Поэтому достаточно информативным методом для изучения патогенеза заболеваний, связанных с наличием иммунньгх комплексов в сыворотке крови, является только метод, позволяющий определить иммунные комплексы, со-. держащие антитела разных классов, независимо от их величины и способности сорбировать комплемент.Предлагаемьй способ можно использовать для определения иммунных комп" лексов общепринятую реакцию агглюти-.нации. Ранее в иммунологии эта реакция использовалась только в целях определения антигена или антител.Изобретение позволяет впервые использовать реакцию агглютинации для индикации иммунных комплексов, Кроме того, обеспечивается доступность применения способа в клинических лабораториях с целью диагностики, так как он не требует сложного оборудования и основан на использовании отечественньгх реактивов. При этом есть воэ1243731 Составитель Г.КрюковаТехред М.Чоргентал Редактор М.Келемеш Корректор М.Максимишикец Заказ 3735/5 Тираж 660 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5Подписное Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 можность исключить применение дляопределения иммунных комплексов радиоактивного препарата протеина А,связанное с техническими трудностямиполучения препарата и небезопасностьюего использования.