Способ удаления липопротеидов из сыворотки крови

+)у ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ЕТЕЛЬСТВ ВТОРСН ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(71) Всесоюзный научно-исследовательский и конструкторский институт медицинской лабораторной техники(56) Методические указания по осуществлению контроля качества работыклинико-диагностических лабораторий.Материалы о состоянии и перспективах развития лабораторной клиникодиагностической службы в стране.Приказ МЗ СССР Р 380, 1975, с, 125,Уайт А. и др. Основы биохимии.Перев. с англ. Под. ред, акад,.Ю.А, Овчинникова, М,: Мир, 1981, т,2.Семенов Н.Б. Биохимические компоненты и константы жидких сред и тканей человека. М.: Медицина, 1971.Титов В.Н, и др. Предложения поунификации методов определения холестерина в альфа-липопротеидах и их диагностическая значимость. В кн.:Унификация лабораторных методов исследования, Под ред. проф, В.В,Меньшикова, М., 1980, с, 3,и 4 С 01 И 33/50//В 01 П 21/26(54)(57) СПОСОБ УДАЛЕНИЯ ЛИПОПРОТЕИДОВ ИЗ СЫВОРОТКИ КРОВИ, предусматривающий центрифугирование сывороткии отбрасывание сконцентрированныхна ее поверхности липопротеидов, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения. полноты удаления липопротеидов, центрифугирование осу-аществляют в присутствии адсорбирующего липопротеиды устройства в видепоплавка, выполненного из поролона,который удаляют после центрифугирования,1206704 45 50 55 Изобретение относится к медицине,точнее к медицинским лабораторным методам исследования и, в частности,может быть использовано при приготовлении контрольных сывороток и определении холестерина в альфа-липопротеидах в клинико-диагностическихлабораториях и лабораториях научноисследовательских учреждений медикобиологического. профиля,Цель изобретения - повышение,полноты удаления липопротеидов.Способ заключается в использовании для удаления липопротеидов изсыворотки крови в процессе центрифугирования адсорбирующего липопротеиды устройства в виде поплавка, выполненного из поролона, который после центрифугирования удаляют.Адсорбирующий липопротеиды поплавок состоит из двух соединенных вместе элементов: адсорбента и собственно поплавка,В качестве адсорбента используетсяпористый материал, способный впитывать сыворотку вместе с липопротеидами во время центрифугирования и удерживать сыворотку при его удалениипосле центрифугирования, напримерпоролон толщиной 6-8 мм и диаметром,равным внутреннему диаметру центрифужного стакана.В качестве поплавка используетсяматериал низкой плотности, способный удерживать адсорбент на поверхности центрифугируемой сыворотки,например пенопласт или пробковое де- .рево толщиной 6-8:мм и диаметромна 1-2 мм меньше внутреннего диаметра центрифужного стакана. Необходимость использования поплавка обусловлена тем, что адсорбент, пропитываясь сывороткой, во время центрифугирования тонет,. Адсорбент к поплавку может быть прикреплен любым способом, например приклеен клеем типа "Момент".П р и м е р. Исходная сыворотка разливается в любые центрифужные стаканы, На поверхность сыворотки помещается соответствующий диаметру стакана адсорбирующий липопротеиды поплавок. Сыворотку центрифугируют. В процессе центрифугирования липопротеиды, как наиболее легкие элементы, собираются на поверхности сыворотки и вместе с ее верхней частью переходят в поры поролона. После центрифугирования поплавок вместе слипопротеидами и частью сывороткиснимается с поверхности сыворотки,Оставшаяся в центрифужных стака нах сыворотка со сниженным содержанием липопротеидов используется дляприготовления замороженной контрольной сыворотки или контрольной сыворотки на основе этиленгликоля, а 1 О также для определения в ней холестерина альфа-липопротеидов. Посколькуконтрольная сыворотка на основе эти"ленгликоля является жидкой и ее можноцентрифугировать, снижение концентра ции липопротеидов можно производитькак в исходной сыворотке, так и вуже приготовленной контрольной сыворотке, содержащей этиленгликоль.120Адсорбирующий липопротеид поплавокпосле промывания проточной водой ивысушивания может быть использованповторно.Толщина слоя липопротеидов, образующегося на поверхности центрифуги-руемой сыворотки, обычно составляетдесятые доли миллиметров и не превышает 1-2 мм даже в случае сыворотокс очень высоким содержанием липопротеидов. Поэтому при толщине слоя 30поролона 6-8 мм липопротеиды центриУфугируемой сыворотки полностью переходят в поролон. Экспериментальноустановлено, что после центрифугирования специально обогащенной лиЗ 5 попротеидами сыворотки с начальнойоптической плотностью, измереннойна спектрофотометре Сфпри 650 нмв кювете с длиной хода луча 10 мм,равной 1,800 единиц, ее оптическая 40 плотность снижается до 0,100 и нижеединиц оптической плотности. В естественном состоянии сыворотки крови соптической плотностью 1,800 единицпрактически не встречаются. Можно использовать и более толстый слой поролона, но при этом вместе с липопротеидами будет теряться большой объем сыворотки. При меньшей толщине слоя поролона края его во время центрифугирования могут не плотно прилегать к стенкам центрифужного стакана и часть липопротеидов по краям поверхности сывороткф может оставаться не удаленной. Для получения сыворотки, в.которой липопротеиды визуально не определяются и которая может быть использована для приготовления контрольной206704 Составитель И. ПриваловаТехред Л.Иикеш Корректор Л. Патай Редактор А, Шишкина Заказ 8704/46 Тираж 778ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Иосква, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Подписное Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 3 11 сыворотки, исходная сыворотка должна центрифугироваться при 4500 у в течение 40-50 мин. Для оценки эффективности удаления липопротеидов по известному способу измерялась оптичес" кая плотность сыворотки на спектрофотометре Сф.при 650 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм до и,после центрифугирования. Центрифугирование производилось при 5000 об/мин в течение 50 мин. До центрифугирования оптическая плотность сыворотки равнялась 0,540 единиц. После центрифугирования сыворотки непосредственно в кювете спектрофотометра, когда верхний слой, содержащий липопротеиды, оставался при измерении не нарушенным, оптическая плотность составляла 0,09 единиц. При отборе среднего слоя в объеме 2,5 мл из 3 мл центрифугированной сыворотки ее оптическая плотность равнялась 0,280 единиц. Даже в случае отбора среднего слоя в. объеме 3 мл из 12 мл центрифугированной сыворотки ее оптическая плотность была выше контроля (0,09 единиц) и составляла 0,150 единиц. Преимущества предлагаемого способа заключаются в том, что для приготовлюия контрольных сывороток могут быть использованы любые исходные сыворотки, что значительно ускоряетпроцесс сбора исходных сывороток иприготовление контрольных сывороток.Кроме того, достигается более полноеудаление фракций липопротеидов низкой плотности при подготовке сыворот"ки для исследований .холестерина вальфа-липопротеидах. Причем при удалении липопротеидов в сыворотку не 10 вносятся никакие посторонние вещества, средства, используемые для удаления липопротеидов с поверхностицентрифугируемой сыворотки, общеГдоступны. При этом процесс приготов ления контрольных сывороток практически не требует дополнительных трудозатрат. Исключение составляют только очень небольшие трудозатраты поприготовлению пластинок поролона и 20 пенопласта. Центрифугирование не входит в дополнительные трудозатраты,так как оно всегда применяется дляудаления нерастворимых элементов иэ.сыворотки крови. Теперь удаление 25 липопротеидов и нерастворимых элементов производится при одном центрифугировании, при этом нерастворимыеэлементы осаждаются на дно центрифужного стакана, а липопротеиды кон- ЗО центрируются в пластинке поролона,То и другое после центрифугированияудаляется.