Способ идентификации самоопыленных линий кукурузы по компонентному составу зеина

(59 4 А 01 Н 1/06 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИК АВТОРСКОМУ СВИДЕГЕЛЬСТВУ полио т подбов кукут спир- ектров полим 6-7 М де в ство СССР6, опубликение ациютрофореельно УДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЦТЮ(54)(57) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ САМООПЫЛЕННЫХ ЛИНИЙ КУКУРУЗЫ ПО КОМПОНЕНТНОМУ СОСТАВУ ЗЕРНА, включающийразмол зерна, экстракцию из него б ка, электрофорез экстракта в акриламидном геле в трубках, л и ч а ю щ и й с я тем, чт целью повышения точности при ре пар для получения гибридо рузы, экстракцию белков веду товым раствором мочевины, эл форез экстракта осуществляют акриламидном геле, содержаще мочевину в уксуснокислой сре трубках длиной 8-10 см, в те 80-00 мин, причем идентифик компонентов проводят по элек тической подвижности относит компонента С 40.194333 ТаблицаКонцентрация мочевины, моль Показатели 3,0 4,0 0 0,25 0,5 1,0 2,0 Характер раствора после упаривания при60-65 С Проз- Проэрач- Проз- Проз- Прозрач- ный рачный рачный рачный ный Опалес- Кристалцирую- лизация щий мочеви- ны 8 Увеличение числа ком- Стабильно воспроизводипонентов до 12-15 мое число компонентов21 Число компо" нентов зеинаИзобретение относится к областисельского хозяйства, а именно к се,лекции растений.Цель изобретения - повышение точности при подборе пар для получениягибридов кукурузы,Самоопыленные линии кукурузы Казахского НИИ земледелия НО 14 (6-епоколение), НО 16 (1 О-е поколение),НО 34 (6-е поколение), НО 139 (10-епоколение), НО 145 (8-е поколение)использовались в опыте, 10 зеренкаждой линии индивидуально освобождают от зародыша, эндосперм растирают в ступке, взвешивают и заливают10-кратным количеством 2 М растворамочевины в 703 этаноле, экстракциюпроводят в центрифужных пробиркахпри постоянном перемешивании в течение 30 мин при комнатной температуре. Затем пробирки помещают в водяную баню при 60-65 С на 1 ч. Содержимое пробирок центрифугируют при5000 я 15 мин. Супернатант переносятв бюкс и выпаривают до появления наверхнем обрезе бюкса пояска из кристаллической мочевины, В бюкс добавляют 50 мг сахароэы и при помешивании ее растворяют. Экстракт зеинананосят на гель в количестве 0,040,06 мл в двух повторностях,Как видноиз данныхтабл. 1,стабильный спектр по числу компонентов зеина достигается приизвлечении зеинового комплекса из зерен 2-ЗМ раствором моче вины в 703-ном этаноле,Оптимальнойявляется концентрация мочевины 2 М,Электрофореэ зеина осуществляютпо известной методике н стандартномприборе "Реанал" (ВНР). Отличие состоит в том, что в гель вносят 6-7 Ммочевину, используют столбики гелядлиной 8-10 см, электродный буфер,представляет собою 0,018 М уксуснуюкислоту, а время эпектрофореза 80100 мин.6 Выявление компонентов зеина проводят в 77.-ной трихлоруксусной кислоте. Через 1-2 ч компоненты проявляются. пятью обособленными группами сотносительными электрофоретическими 5 подвижностями (ОЭП) : 0-27 (группаА), 28-35 (группа В), 36-40 (группа С), 4 1-59 (группа 0), 60-100(группа Е),Расчет ОЭП проводят по наиболее 2 О подвижному, постоянно присутствующему во всех линиях зеиновому компоненту группы С.Предварительные и определенныезначения режима экстракции.и элект рофоретического деления зеина на составляющие его компоненты приведеныв табл. 1-3. В табл, 1 показано влияние концентрации мочевины в 707-номэтаноле на полноту извлечения ком понентов зеина из эндосперма зерна(линия НО 139). В табл, 2 показано влияние концентрации мочевины.в полиакриламидном геле на четкость выявления компонентов эеина после электрофореза (линия НО 139)..Четко Четкость компо- Диффузия Диффузия нентов компонентов 1-2 компнентов Ф2 свидетельствуютонцентрации мочевиДанные табл оптимальной В табл. 3 показаноны столбика полиакрилана проявление полного(линия НО 139).Т а б л и ияние длимидного геляектра зеина лы полиакрил ном гале, рави М Степень полнотыспектра роявляются компоненты всех зонпектра мпоненты ны Е выо ят из разделение компонентов внутри группО зеинового спектра, а свыше 100 мин . наиболее подвижные компоненты группы Е выходят иэ геля. и идно из данных табл. 3, огарантирующей воспроизомпонентного состава зеиектра, является длина столсм.офорез проводят в течение н. Оптимальное время ри времени электрофореза мин наблюдается нечеткое к в вани еина хИ ф ктров ли зеинолиний. 47 48 520 1 42 46 51С 38 40 Д 0 13 О 13 0 Д 42 (47) 48 5 0 145 дой самоопыленной линии Самоопыленные линии по числу компонентов в пе, ОЭП компонентов в пе, наличием вариабель тов (эаключенных в ско понентов, характерных форетических спектров у отдельных зерен внут Выявленные различия зволяют сделать два ос чения. Зеиновые формулыи дают во м идентиф вариабель различают можность поэтим формуцировать линии, Налич аждой групых компоненомпонентов в зеиновом спектре внути линии свидетельствует о неполнойтепени их гомозиготности. ки), т.е. кдля электроина толь 34 являются гоые линии различ и НО 16, НОными. Остал пени гетеро тному составу з 55 Линимозигот ной сте линии.линий и аклюготны по компона. сущи н тимальноводствонового сбика в 9Элект0-100 ми0 мин, Пменее 80 Е 73 85 8А 25 27 ВА 20 21 2 Е (70) 73 А 25 25 2 Е (63) 85 4 25 26 27 В 3 9 100 26 27 В 30 32 3 100 0 32 36 С 39 40 25 27 В 31 34 380) 87 90 100В 30 33 35 (38)9 и электрофоретичес по 10 зернам состе формулы самоопыленных