Штамм -тест-объект для определения продукции триптофана

(19) 111) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЙ ТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛ ВУ ГОСУДАРСТ 8 ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИ(71) белорусский ордена Трудового Красиго Знамени государственный университетим. В, И. Ленина(54)ШТАММ РЗЕ 00 ОМОМАЗ ЗРЕСЗЕЗ МЗ +ТЕСТ - ОБЪЕКТ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРО -ДУКЦИИ 1 ТРИПТОФАНА.о- (57) Штамм Раецйоп)опаа Зрес 1 еа ЩЗ(коллекция Центрального музея промышленных микроорганизмов Института"ВНИИГенетика", коллекционный номерЦМПМ В - 3037) - тест. объект для определения продукции 1 триптофана.Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается новогоштамма, являющегося тест-объектом дляопределения продукции ЬтриптофанаЦелью изобретения является получение 5нового штамма Рзецйопюпаз Брес 1 ез МЗ,высоко специфичного и чувствительногопо отношению к Ь.триптофану, с помощьюкоторого можно выявлять продукцию последнего, начиная с 0,5 мкг/мл, на простых 1 Опо составу жидких и агаризованных минеральных средзх (не содержащих дополнительно какихлибо ростовых факторов), среди различных групп микроорганизмов, втом числе ассимилируюших низшие спирты 15(этанол и метанол) в качестве источниковуглерода и энергии.Предлагаемый штамм Рзеийопюпаз Брес 1 езМЗ получен с помощью, мутагенеза Х-метил:Х-нитро.Х нитроэогуанидином и является 20ауксотрофным триптофанзависимым мутантом(имеет мутацию в тгрВлокусе) штамма ди.кого типа Рзепйопюпаз Брес 1 ез М, выделенного из сточных вод Минского завода медпрепаратов, 25Идентификацию тгрВ-мутации у бактерийРзеийопюпаз зрес 1 ез МЗ осуществляли поотсутствию способности роста на антранило.вой кислоте и индоле, добавленных в среду вместо Ь-триптофана, а также биохимически по утрате активности Ь-субъециницыфермента триптофансинтазы (КФ. 4.2.1.20),Рост клеток штамма Рзецйопюпаз зрес 1 езМЗ на минеральных средах без Ь-триптофана полностью отсутствует. Минимзльная концентрация Ь-триптофана, обеспечивающая рост:бактерий в жидких и агаризованных мине.ральных средах; соответствует 0,5 мкг/мл.Штамм Раецдотопаз Брес 1 ез МЗ хранится .в Центральном музее промышленных микроор.ганизмов ВНИИГенетика (Москва), Я В - 3037,Штамм Рзецйошопаз Брес 1 ез МЗ имеетследующие характеристики,Морфологические особенности штамма.Клетки прямые, палочковидной формы сокругленными концами, 0,6 х 2 - 3 /Ц, под.вижные с 2-4 монополярными жгутиками,грамотрицательные, спор не образуют,Культуральные признаки.Колонии на агаризованных питательныхсредах (мясопецтонном агаре, Кинг В агаре) гладкие, плоские, круглые, край ровный, серовато белые. Через 24 ч при 28 Собразуют колонии размером 2 - 3 мм, Ростпо уколу в МПА умеренный, в основномна поверхности среды. В жидких питательных средах образует интенсивную муть.Хорошо растет иа минеральных средахпростого состава, дополненных Ь.триптофаном, и не нуждается в добзвлении ростовыхфакторов и аминокислот.Физиолого-биохимические признаки,По отношению к кислороду - облигатный аэроб. Оптимальная температура роста28 - 30 С, рН среды в пределах 6,8 - 7,3.Азот утилизирует в виде солей аммония,мочевины, нитратов,Пигменты,Образует желто-зеленый водорастворимыйфлюоресцирующий пигмент на Кинг В агаре.Внутриклеточного пигмента не образует.Реакция на оксидазу и каталазу положи.тельная, Реакция Фогес-Проскауэра отрица.тельная. Индол не образует. Тест на анаэробную аргинин.дегидролазу положительный, Реакция на анаэробную денитрификацию отрицательная. Лецитинаэная активность отсутст.вует.Не гидролизует крахмал, желатин, Твин.80.В качестве источников углерода использует глюкозу, глицерин, сахарозу, галактозу, мальтозу, фруктозу, этанол, метанол, ти.розин, фенилаланин, орнитин, глицин, лейцин,глютаминовую кислоту, аспарагиновую кисло.ту. Не утилизирует арабинозу, маннозу, ксило-зу, лактозу, маннит, раффинозу, дульцит, сорбит, целлобиозу, инозит, серии, лизин, триптофан, антраниловую . кислоту, ацетамид.Штамм идентифицирован как Рзещ 1 опюпаззрес 1 ез согласно определителю Вегяеу. П р и м е р 1. Определение продукции Ь.триптофана с помощью тест-объекта Рзецдопюпаз зрес 1 ез МЗ производят следующим образом.:Делают посев культуры Рзецйопюпаз зрес 1 ез МЗ с косяка в МПБ (мясо-пептон/ный бульон), либо в другую питательную среду, обеспечивающую рост бактерий, и культивируют в течение ночи при 28 С, Затем бактериальные клетки отмывают дваж. ды физиологическим раствором с помощью центрифугирования (10 мин, 5000 я) и ресуспендируют до первоначзльного объема в этом же растворе, 0,1 мл суспензии клеток Мносят в пробирку с 4 мл расплавленного и охлажденного до 45.С минимального по. лужидкого агара (0,7%), приготовленного на основе минеральной среды М 9, содержащего в качестве источника углерода глюкозу ( в концентрации 0,2%) и наслаивают вторым слоем на поверхность агаризованной среды (1,5%) того же состава. После застывания верхнего слоя с культурой тест-объекта уколом делают посевы отдельных клонов испытуемых на продукцию Ь-триптофана культур микрооргзнизмов, утилизируюших в качестве источника углерода и энергииСоставитель Н. АфанасьеваТехред А, Бабинец Корректор С. Шекмар Редактор Т. Колб Тираж 524 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений иоткрытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб;, д. 4/5Заказ 7121/24 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 3 11914 глюкозу (по 20 - 30 клонов на чашку Петри). Пробы выращивают в течение 24 - 48 ч при 28-30 С, Вокрут колоний, клет. ки которых продуцирует Е.триптофан, наблюдаются четкие, интенсивные эоны роста тест-культуры Раев)опюпав арес 1 еа МЗ, раз. меры котррых зависят от количества синтезируемого 1.триптофана,П р и м е р 2. Посевной материал тест. культуры Ряецйопюпаа аресеа МЗ и последующие процедуры производят как в примере 1, за исключением того, что в качестве источника углерода и энергии в используемые минеральные среды добавляют вместо глюкозы этанол (в концентрации 1%) и делают посевы испытуемых на продукцию Ьтриптофа 1 и культур, микроорганизмов, утилиэирующих этанол.П р и м е р 3, Посевной материал тест- культуры Рвецйовопаа арес 1 еа МЗ и после. 64 4дующие процедуры производят как в примере 1, за исключением того, что в качестве источника углерода и энергии в используемые минеральные среды добавляют метанол (в концентрации 1%) и делают посевы испытуемых на продукцию Ь-трнптофана культур микроорганизмов, утилизирующих мета.нол. Пробы выращивают в течение 48 - 72 ч,Штамм Раецдотопав Зрес 1 еа МЗ яюйется мутантом по гену, что обеспечивает его потребность и высокую специфичность по отношению к 1 триптофану. С помощью штамма Раеидовопаа арес 1 ез МЗ можно выявлять и изучать продукцию 1:триптофана, начиная с 0,5 мкг/мл, на простых по соета. ву минеральных средах среди различных . групп микроорганизмов, в том числе ассимилирующих низшие спирты (этанол и метанол) в качестве источников углерода и энергии