Способ диагностики анаэробной стоматогенной инфекции

СОЮЗ СОЕЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИН Р А 61 К 39 ГОСУД АРС ПО ДЕЛА НИ БРЕТЕНИЯ ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(54) (57) СПОСОБ ДИАГНОС ЭРОБНОЙ СТОМАТОГЕННО ЦИИ путем выявления антите крови больных, отличающийс целью повышения точности ди титела в сыворотке больных помощью реакции агглютинаци низированными эритроцитами, рованными Вас 1 ег 1 ае Рер 1 оз 1 г при титре выше 1:60 диагности ную стоматогенную инфекцию Ф. Лихо ков и Н кий институт им,роническая очаго та. М., МедгиЕННЫИ КОМИТЕТ СССРЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИИИзобретение относится к медицине, в частности, к стоматологии и клинической иммунологии.Известен способ диагностики анаэробной стоматогенной инфекции путем выявления антител в сыворотке крови больных 11 .Однако известный способ недостаточно точен.Цель изобретения - повышение точности диагностики.Указанная цель достигается тем, что согласно способу диагностики анаэробной стоматогенной инфекции путем выявления антител в сыворотке крови больных, антитела в сыворотке больных выявляют с помощью реакции агглютинации с формалинизированными эритроцитами, сенсибилизированными Вас 1 егае Рер 1 озтгер 1 ососспз и при титре выше 1:60 диагностируют анаэробную стоматогенную инфекцию.Способ осуществляется следующим образом,Для диагностики анаэробной стоматогенной инфекцич у больных, обратившихся по поводу лечения периодонтита, периоетита, пародонтоза, берут 0,5 - 5 мл крови, готовят сыворотку, которую инактивируют при 56 С в течение 30 мин и разводят в лунках полистироловых пластин в нескольких рядах физиологическим раствором (рН 7,2) 1:10 - 1:640 в объеме 0,1 - 0,5 мл. К каждому разведению сыворотки добавляют 0,05- О, мл 1 - 3-ного эритроцитарного диагностикума, который готовят заранее и хранят в виде 20-ной взвеси до 1,5 г. при 4-5 С. Сенсибилизацию формализированных эритроцитов осуществляют экстрактом, полученным из анаэробных микроорганизмов (на пример, Вастег 1 ае Рер 1 озгер 1 ососсцз) по методу Лансфильд путем экстракции соляной кислотой в течение 15 мин при 90-95 С. Фиксацию молекул экстракта на поверхности эритроцитов осуществляют с помощью бифункциональных химически автивных соединений (например, глютаральдегида).Для оценки специфичности и чувствительности способа используютследующие контроли,Контроли сывороток: а) сыворотки кроликов, иммунизированных указанными выше антигенами анаэробных микроорганизмов (те же экстракты, которые применялись для сенсибилизации формалинизированных эритроцитов); б) сыворотки крови здоровых людей без признаков стоматогенной инфекции (доноры).Контроли антигенов: а) с указанными выше сыворотками ставят реакцию пассивной гемаглютинации с несенсибилизированными формалинизированными эритроцитами; б) с этими же сыворотками ставят РГ 1 ГА с формалинизированными эритроцитами, сенсибилизированные гетерологическимисывороткой здоровых людей (доноров и формалинизированными эритроцитами, сенсибилизированными антигенами анаэробных микроорганизмов, титры составили в средЗ 0 нем 1:10 - 1;20, С сывороткой крови больных периоститом, периодонтитом, пародонтозом и использовании несенсибилизированных фармалинизированных эритроцитов положительную, РПГА (феномен зонтика) наблюдали в разведении сыворотки в среднем 1:51:30 в случаях использования формалинизированных эритроцитов, сенсибилизированных анти- генами аэробных стрептококков положительные реакции выявлялись в титрах до 1:60, 40 Сравнительный анализ результатов постановки РПГА в опытных и контрольных группах позволил считать диагностическим титром агглютинацию эритроцитов, сенсибилизированных антигенами патогенных ана эробов, в разведении сывороток более 1:60.Пример 1. Больная В обратилась по поводу лечения хронического периодонтита 12 зуба и дистрофически-воспалительной формы, пародонтоза 11 степени в стадии обостроения Взято 2 мл крови, готовят сыворотку, которую анактивируют при 56 С в течение 30 мин, В трех рядах лунок полистироловых пластинок сыворотку крови разводят физиологическим раствором при рН 7,2 в объеме 0,2 мл 1:1 О - 1:640. К каждому разведе нию добавляют 0,1 мл 3),-ных формалинизированных эритроцитов, обработанных глютаральдегидом, сенсибилизированных солянокислым экстрактом анаэробных микро 5 10 15 20 25 антигенами (например, анаэробным стрептококком).Пластинки осторожно встряхивают и оставляют при комнатной температуре на 3-4 ч, после чего производят учет результатов. Реакцию оценивают по четырех крестовой системе (, , , +, -) За титр антител принимают максимальное разведение испытуемой сыворотки, дающей четкую агглютинацию на .Для подтверждения иммунологических тестов у больных проводят микробиологические исследования, направленные на диагностику анаэробной стоматогенной инфекции путем выделения чистых культур.Указанными способами обследовано 69 больных периоститами, периодонтитами, пародонтозом. У 76,2-обследованных обнаружены как антитела к анаэробам, так и чистые культуры этих микроорганизмов. Причем, высокие -титры антител (1:60 - 1:320) наиболее часто выявлены к антигену анаэ-. робного стрептококка.При постановке РПГА с иммунной кроличьей сывороткой и формалинизированными эритроцитами, сенсибилизированнымн антигенами анаэробных микроорганизмов, титры составили в среднем 1:640 - 1:2400; с1148621 5 10 15 20 ВНИИПИ Заказ 1774/3Филиал ППП Патент, г,организмов, К разведения:с сыворотки первого ряда добавляют формалинизированные эритроциты, сенсибилизированные антигеном анаэробного стрептококка, к разведениям сыворотки второго ряда сенсибилизированные -Вас 1. Ггао 111 в, третьего - Вас 1. Ме 1 ап 1 поцеп 1 сцз. В первом ряду положительная РПГА наблюдалась в титрах 1: 320, во втором - 1:40, в третьем 1:20.При микробиологическом исследовании содержимого корневого канала 12 зуба больной В, идентифицирован анаэробный стрептококк типа Вас 1. Рер 1 оз 1 гер(ос и аэробный стрептококк типа В. Ягер 1 ос из патологического зубо-десневого кармана выделен бактероид типа Вас 1 Ггас 1111 з и анаэробный стрептококк типа Вас 1 Рер 1 озгер 1.1 яспользование рациональной терапии, в частности; антимикробных препаратов, к которым специфич;.ки чувствительна анаэробная флора, выделеннач у данной больной, привела к быстрой ликвидации воспалительных явлений, прекратилось гноетечение из зубо-десневого кармана.12 зуб вылечен в три посещения.Пример 2. Больной Р. обратился по поводу лечения обострившегося хронического периодонтита 61 зуба.Для исследования берут 2 мл крови, полу чают сыворотку, Через 3-4 ч по описанному выше способу положительная РПГА с сывороткой крови и формалинизированными эритроцитами, сенсибилизированными анти- генами анаэробных микроорганизмов, отмечена к антигену анаэробного стрептококка в титре 1:20, антигену Вас 1. Ггар 1 ез 1:10, антигену Вас 1 Яе 1 ап 1 под 1:20, что отрицает наличие анаэробной стоматогенной инфекции. У данного больного при микробиологическом исследовании анаэробных микроорганизмов не выявлено.На практике рекомендуется проводить РПГА с сывороткой больных в разведении с 1:20 до 1:6400 с использованием формалинизированных эритроцитов, сенсибилизированных антигенами анаэробного стрептококка (типа Вас 1 Рер 1 оМгер 1 ососсцв) Результаты постановки РИГА с формалинизированными эритроцитами, несенсибилизированными и сенсибилизированными антигенами аэробного стрептококка, анти генами бактероидов типа Вас 1 Ргар 11 в и Вас 1 Ме 1 ап 1 повеп 1 сцэ; а также приведенные в примерах микробиологические исследования служат лишь для подтвреждения специфичности и чувствительности основной реакции.Анализ амбулаторных историй болезни 42 больных с клиническим и микробиологическим диагнозом хронический обостривший 25 зо 35 40 45 50 55 ся периодонтит с явлениями периостита, выз ванный анаэробным стрептококком (типа Рер 1 ов(гер 1) показал, что бактериологические исследования с целью уточнения диагноза продолжались 7 сут, а этиотропное лечение больных было начато на 8-е сут от обращения за медицинской помощью. К этому времени у 11 больных (25,) под в.пиянием общепринятых методой лечения наступило выздоровление. У 31 больного (75 ф явления воспаления нарастали и были ликвидированы только после назначения целенаправленного этиотропного лечения (на 12 - 13-е сут от обращения больных за медицинской помощью).При использовании предлагаемого способа диагностики стоматогенной анаэробной инфекции сроки диагностики и лечения больных резко сокращены. Анализ 28 амбулаторных историй болезни на случай стоматогенной анаэробной инфекции, подтвержденные предлагаемым способом, показал; что результаты лабораторного исследования были получены уже в день обращения за.медицинской помощью, что позволило на следующий день начать целенаправленное этиотропное лечение, и 25 бо.пьных (89) выздоровело в течение 5-7 сут от начала лечения. Таким образом, при использовании предложенного способа диагностики стоматоген.ной анаэробной инфекции сократилось время лечения (с 12 до 5-7 сут) у 64%больных. Кроме того, положительный эффект предлагаемого изобретения состоит в значительном удешевлении и упрощении метода исследования.Новизна предлагаемого способа диагностики стоматоген ной анаэробной инфекции по сравнению с известным (микробиологический метод) состоит в вь/явлении, антител в титре более 1:60 к антигенам анаэробных стрептококков путем проведения реакции между сывороткой крови больных и фикоированными эритроцитами, сенсибилизированными антигенами наиболее распространенных штаммов анаэробных стрептококков (например, Югера, ппсгов. 1 п 1 еггп.), использование которых в 67%случаев обеспечивает диагностику анаэробной инфекции при периодонтите, периостите и пародонтозе.Таким образом, изобретение дает значительный экономический и социальный эффект, оно позволяет быстро и точно в течение 3-4 ч диагностировать анаэробную стоматогенную инфекцию, проводить более эффективное .печение и профилактику стоматологических заболеваний, снизить нетрудоспособность и ускориТь реабилитациюеПри данном способе диагностики нет необходимости в дорогостоящей аппаратуре и питательных средах. Тираж 722 ПодписноеУжгород, ул. Проектная, 4