Способ определения азафена

(19) (11) 4(З 1) А б К 31/00 Е. ИЗОБРЕТЕ ОП АВТОРСКОМ ЛЬСТВУ УДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИ(72) В.Ю.Оверлингас,А.А.Хабаров, И.Ф.Оверлингиене и С.А,Полетыкин (71) Курский государственный медицинский институт(56) 1. "Таблетки аэафена" (фармако пейная статья) ФС-1059-76.2. Синнисин В.И. Всасывание и рас пределение по органам нового антидепресанта азафена. - "Фармакология и токсикология", 1973, Ф 4 с.409-412 (прототип).(54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЗАФЕН путем измерения интенсивности флюо ресценции раствора, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности способа, пр бу растворяют в уксусном ангидриде и обрабатывают концентрированной с ной кислотой в соотношении 1:0,2- 0,4, облучают возбуждаюцим светом с длиной волны 360 нм, а интенсивность флюоресценции измеряют придлине волны 470 нм.Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способамопределения лекарственного препаратаазафена,Известен способ количественного 5определения азафена, заключающийсяв растворении азафена в р-.истиллированной воде с последующим измерением оптической плотности полученногораствора при длине волны 344 нм Я , 1 ОНедостатками этого способа являются невысокая чувствительность определения - 2 мкг/мл и низкая избирательность.Известен также способ определения 15азафена путем измерения относительной интенсивности флюоресценциираствора 2.Недостатком известного способа является то,что чувствительность 200,1 мкг/мл не всегда достаточна приопределеиии азафена в биологическихисследованиях и невысокая избирательность, так как собственной флюоресценцией обладает большое число 25органических соединений.Целью изобретения является повышение чувствительности способа.Поставленная цель достигаетсятем, что согласно способу определения азафена путем измерения интенсивности флюоресценции раствора, пробурастворяют в уксусном ангидриде иобрабатывают концентрированной сер 4ной кислотой в соотношении 1:0,20,4, облучают возбуждаюцим светом с 35длиной волны 360 нм, а интенсивность флюоресценции измеряют при длине волны 470 нм.Способ осуществляют следующимобразом.40Анализируемую пробу растворяютв уксусном ангидриде и обрабатываютконцентрированной серной кислотойв соотношении 1:0,2-0,4 г, послечего доводят объем раствора до 10 мл "5уксусным ингидридом, облучают возбуждающим светом с длиной волны360 нм и измеряют относительную интенсивность флюоресценции полученного раствора при длине воггны 470 нм. 50,Интенсивность флюоресценции неизменяется в течение 24 ч.П р и м е р 1. Качественное определение азафена.К крупинке мелкоизмельченных 55таблеток или порошка азафена прибавляю 1 мл уксусного ангидрида, встряхивают, затем к полученному раствору прибавляют 0,2 мл концентрирован-" ной серной кислоты, в результате чего, появляется при облучении ультрафиолетовым светом с длиной волны 365 нм интенсивно флюоресцирующее голубым светом соединение, что говорит о наличии азафена в пробе.П р и и е р 2. Количественное определение азафена.0,01 г (точная навеска) порошка азафена переносят в мерную колбу на 100 мл, прибавляют 10 мл муравьиной кислоты, встряхивают 10 мин, доводят объем уксусйым ангидридом до метки.1 мл полученного раствора переносят в мерную колбу на 100 мл и доводят объем уксусным ангидридом до метки.К 1 ил полученного раствора прибавляют 0,2 мл концентрированной серной кислоты, встряхивают и добавляют 8,8 мл уксусного ангидрида. Раствор тщательно перемешивают и измеряют относительную интенсивность флюоресценции.П р и и е р 3, Определение азафена в моче.К 1 мл мочи прибавляют 1 мл дистиллированный воды, перемешивают. На хроматографическую пластинку 81 цГо 1 наносят 0,05 мл смеси небольшими порциями, высушивая пятно после нанесения каждой порции. Хроматографическую пластинку помещают в насьгщенную парами хроматографическую камеру со смесью растворителей спирт этиловый:раствор аммиака 257-ныл в соотношении 9:1.Пятна азафена с НЕ = 0,75 количественно переносят в центрифужную пробирку, прибавляют 1 мл уксусного ангидрида, 0,2 мл концентрированной серной кислоты, встряхивают и добавляют 8,8 мл уксусного ангидрида. Раствор центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин, после чего прозрачный раствор сливают в кювету и измеряют относительную интенсивность флюоресценции.В качестве стандартного раствора берут раствор с одной из следуюцих концентраций: 0,001, 0,005, 0,01, 0,05, О, 1, О, 5, 1,0 мкг/мл.Полученные результаты определения азафена в моче (искусственая смесь с = 10 мкг/мл) приведены в табл. 2.Параллельно проводят опыт со стандартным раствором азафена игде С Т абл ица 1 1 Метрологические Найдено, 7 Номер определения характеристики Х = 98,32 Х 98,1 о = 0,93= 10,937 97,3 97,3 а = 98,32+ 0,933 99,2 98,5 а = 97,.26+ 1,197. 98 2 Т аблица 2 Найдено, 7. Метрологическиехарактеристики Номер определения Х = 97,26 7о= 1,04 96,0 98 4 Е =.+ 1 197. Заказ 1253/6 Типаж 722 Подписное филиал ППП "Патент"г.Ужгород,.ул.Проектная, 4 3контрольный опыт. В качестве стандартных берут растворы азафена с концентрацией: 0,001, 0,005, 0,01, 0,05, 0,1, 0,5 и 1,0 мкг/мп,Контрольный опыт проводят с чистым уксусным ангидридом и концентрированной серной кислотой.Концентрацию измеряемого раствора рассчитывают по формуле концентрация исследуемогораствора азафена,концентрация стандартногораствора азафена,показатель электрофлюориметра для испытуемогораствора,показатель алектрофлюориметра для контрольного опы-.та,4Н, - показатель алектрофлюори=метра для стандартногораствора.Результаты определения азафенав порошке приведены в табл, 1,Использование предлагаемого способа в практике позволяет повыситьчувствительность способа в 70 раз всравнении с известным.Кроме того, способ прост в исполнении, не требует дорогостоящихреактивов, что в целом определяетцелесообразность использования предлагаемого способа в практике аналитических лабораторий предприятий,выпускающих данное лекарственное вещество, клинических лабораторий ме- .дицинских учреждений, фармакологических лабораторий и контрольно-аналитических лабораторий аптекоуправлений,