Способ получения биоспецифичных фосфолипидсодержащих сорбентов

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКРЕСПУБЛИК 3650 В 01 РгЪн ОПИС ВТОРСНОМУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ССС ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТ(54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОСПЕЦИФИЧНЫХ ФОСФОЛИ 1 ПЩСОДЕРЖАГЯХ СОРБЕНТОВ на основе гелей агарозы; яключающий конденсацию карбоксипроизводных Аосдюлипидов с аминоапкилсе-,Аарозой в присутствии водорастворимого карбодиимида в растворе полярного органического растворителя, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, сцелью улучшения адсорбционных характеристик путем повышения содержанияЬосАолипидов на сорбенте, в качестве растворителя используют диметилсульАоксид.1 1057095 2 5 Изобретение относится к способам получения биоспецеАических сорбентов на основе гелей агарозц, содержащих иммобилизованные осолипидные лигандц, и может быть использовано при хроматографии веществ, отли" чающихся высоким средством по отношению к липидам, таким как липид-переносящие белки, ферменты липидного йарозой в присутствии водораетворимого карбодиимнда в растворе полярйого органического растворителя, в качестве последнего используют диметилсульАоксид.Способ осуществляют следующим образом.Промытый хлористым натрием и водой гель аминоалкилсеюарозы (АН-се метаболизма, липид"зависимые фермен."ты, мембранные белки, сывороточныелилопротеиды .и апопротеины.Известен способ получения полимернцх гидрогелей с привитыми на их поверхность функциональными группами кислого и основного характера, что обеспечивает возможность дальнейшего присоединения к ним биологически активных веществ Ц .Недостатком данного способа является трудность получения сорбентов с воспроизводимыми свойствами вслед-ствие различных механизмов связывания иммобилизированных компонентов.Наиболее близким к предлагаемомуао технической сущности и достигаемо"му результату является способ получения биоспециджчных Аосолипид-со держащих сорбвйтов на основе гелей агарозц, включающий конденсацию карбоксипроиэводных Аосдюпипидов с аминоалкилседирозой в присутствии водо" растворимого карбодиимида в растворе полярного органического растворителя Я,Согласно данному способу реакцию конденсации проводят в интервале рН5,5-6,5, используя в качестве растворителя 40-50 Я-ные растворы тетрагид"рофурана, перемешивая в течение 2448 ч, АН-сефарозу с карбокси 4 осдюлипидами в присутствии аминоалкильнцхпроизводных карбодиимида,Недостатком данного способа является низкая эффективность реакцииконденсации дюсдклипидов на сорбентеи, как следствие этого, их невысокоесодержание на геле АН-сеарозы (1,2"2,5 мкмоль на 1 мп геля),Цель .изобретения - улучшение адсорбционных характеристик путем повышения содержания иммобилизованныхфосйолипидов на сорбенте,Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения биоспециАических АосАоаипидсодержащих сорбентов на основе гелей агарозы, включающему конденсацию карбоксипроизвод 1 ях Аосолипидов с аминоалкилгефарозы) перемешивают в течение 2448 ч при комнатной температуре с раствором карбоксипроизводных 4 осЬолипидов, таких как 1-ацил-азелаил"Яп-глицеро-ФосАохолии или 2-ациламино-окси-кар бокси-О-эритропро"паноло-дюсохолин, в диметилсуль 4 оксиде (ф 50 Х-ный водный раствор) в присутствии водорастворимж карбодюимидов, поддерживая в первые часыреакции рН в пределах 5,5-65. Соот"ношение реагентов подбирают иэ расчета содержания в конечном продукте5-14 мк моль Жосолипндов иа 1 ма геля. Чатем полученный адсорбент про 25 мывают тетрагидройураном, метанолом,физраствором и в заключение водой.В конечном итоге получают сорбентна основе геля агароэы с высоким содержанием (5-14 мк моль на 1 ма) иммобилизованного лиганда, ковалентносвязанного с основой,Л р и м е р 1, 3 г АН-сейарозц4 В выдерживают втечение 30 мин в0,5 И растворе ИаС.1 промывают настеклянном фильтре тем же растворомЙаС 1 и водой до отсутствия реакциииа С 1 , Отмытый гель (10 мл) переме.шивают 24-48 ч 1 при комнатной температуре с 400.мкмоль 1-ацил-азелаил 40-Бп-глицеро-дюсдюхолин в 20 масмеси днметилсульдюксид: вода (1: 1)в присутствии 2 ммоль гидрохлорида1"этил-(3-диметиламинопропил) карбодиимида, поддерживая в первые ча 45сы реакции рй в пределах 5-5-6 5.Э 3 .Полученный адсорбент промывают 100 млтетрагидройурана, 100 ма метанола,200 ма 1 И раствора МаС 1 и водой. Со-держание Аосдатиднлхолина, ковалентно связанного с гелем, определяютпо юсАору, Получено 9,5 ип геля ссодержанием 12-14 мкмоль дюсМтиднлхоаииа на 1 мп,П р и м е р 2. 1,56 г АН"сеарозы 4 6 выдерживают в течение 30 минв 0,5 М растворе МаС 1, промцваит настеклянном 4 ильтре тем же растворомНаС 1 н водой до отсутствия реакцииС 1, Отмытый гель перемешивают 241057095 348 ч при комнатной температуре с 250 мкмоль 2-ациламино-окси-карбоксил-эритро-пропаноло-осдюхо-лкн и 1 ммоль гидрохлорида 1-этил-(3-диметиламинопропил)карбодиимида в 10 мп смеси диметилсульдюксид; вода (1:1). В первые часы реакции понижение рй компенсируют добавле" нием Ю раствора Май до рН 6,0-6,5, Полученный сорбент промывают 50 мл О тетрагидродурана, 50 мл метанола, 100 мп 1 М раствора ИаС 1 и водой. Содержание сйннгомиелина, ковалентно связанного с гелем, определяют по содержанию дюсдюра, Получено 4,5 мп сорбента с содержанием 5 мкмоль сдингомиелина намп. 4Технико-экономическая эффективность предлагаемого способа заключается в том, что содержание иммобилизованных дюсАолипидных лигандов на сорбентах, полученных по нему, возрастает в 5-6 раз по сравнению с содержанием лигандов на сорбентах, полученных известным способом. Это увеличивает адсорбцию емкость гелей, повышает их селективность н уменьвает неспецидичную адсорбцию примесных белков. Кроме того, протекание амидной конденсации в водном диметилсульАоксиде с высоким выходом обеспечивает более %)Фективное испольэоващте исходных карбоксипроизводных юосболипидов.Составитель Р. Пензии Редактор А, Иотипь Те)д еН ИДртудещи Корректор Г Реюетник Заказ 9436/9 Тираж 537 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035 Москва ЖРаушская наб. д. 4(5 Филиал ПЛП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4