Образец для электронно-микроскопической ультрамикротомии

СОЮЗ СОВЕТСКИХ СОЦИАЛИСТИЧЕСНИ РЕСПУБЛИК а С 028 ОМИТЕТ СССРЙ И ОТКРЫТИЙ (63.) 866450 РОТОМИИпоавт.св. Ь 8664509 о т л и-,(21) 3428977 Л 8-21 ч а ю ш и й с я темв чтоф е целью пОим (22) 27,04,82, шения его информативности, конус выпол- (46) 07,08,83. Бюд. Ю 29нен усеченным, а цилиндр - оптически проз- (72) 8, Г, С 1 щоркин рачным в вщамой части сшжтра. (7 Х) Горьковский государственный уни, Образец по ц. 3., о т л и ч а вверситет им, Н, И, Лобачевского щ и й с я тем, что отношение. диаметров (53) 543,053(088,8) оснований усеченного конуса составляет (56) 3, Авторское свидетельство СССР1,25-2,0, Ну 866450, кд, 6 01 М 3./28, 3.980 3, Образец по п. 3., о т д и ч а в( прототиц)щ и и с я тем, что, цилиндр выполнен в виде тонкостенной трубки, внутренний диа- (54)(57) 1 ОБРАЗЕЦ ДЛЯ ЭЛЕКТРОН- метр которой не менее диаметра меюьше- НО-МИКРОСКОПИЧЕСКОЙ УЛЬТРАМИК- го основения конуса.Ф 1033Изобретение относится к технике подготовки материала для исследования вэлектронном микроскопе, а точнее к образцам для.прицельной электронно-микроскопической ультрамикротомии, 5По основному авт. св, % 866450,известен образец для электронно-микроскопической ультрамикротомии, состоящий изцилиндра, выполненного из твердого ма-.териала с низким коэффициентом линейного ррасширения и низкой текучестью, например из керамики, соединенного своей торцовой поверхностью с конусом, выполненным из заполимеризованной заливочной среды,.в терминальной (нижней) части ко торого расположен.исслецуемый объект размером 0,1-0,2 мм 1Однако известный образец предназначен для выполнения рандомизированнойэлектронно-микроскопической ультрамикро- О томии с объекта, например кусочка ткани, когпа выбор определенного участка образца не требуется, и для исследователя не имеет значения с какой клетки будет изготовлен ультратонкий срез,Следовательно, этот образец нельзя испольэовать для прицельной электронномикроскопической ультрамикротомии, таккак цилицпр оптически непрозрачен, ипредварительное изучение (выбор) объекта невозможно. Кроме того, в терминаль 30ной части конуса образца нельзя располагать множество объектов, различающихся.межпу собой по тем или иным морфологическим критериям, которые можно былобы подвергнуть анализу в световом микро-З 5скопе, с целью выбора для ультремикротомии определенного типа клеток, например,мегакариоцитов костного мозга, так каквсе типы клеток этого препарата должныбыть расположены в одной плоскости (рас-фпластаны на горизонтальной поверхности)для их просмотра в световом микроскопе,цепь изобретения - повышение информативности образцаУказанная цель достигается тем, что 45в образце, содержащем цилиндр, выполненный иэ твердого материала с низким коэффициентом линейного расширения и низкойтекучестью и снабженный конусом, выполненным из заполимеризованной эаливочной среды, которая жестко соецинена сцюпщцром, а также исследуемый объект,расположенный в нижней конической части образца, конус выполнен усеченным, а цилиндр - оптически прозрачным в видимой 55 части сйектра.Отношение диаметров оснований усеченного конуса составляет 1,25 2,0,903 3Цилиндр выполнен в виде тонкостенной трубки, внутренний диаметр которой не менее диаметра меньшего основания конуса.В результате такого выполнения элементов образца образуется плоская поверхность в терминальной части конуса, на которой могут быть распластаны биообъекты, например гетерогенные клетки пунктата костного мозга или сложные по составу гистоструктуры, что создает благоприятные условия для их просмотра и выбора с помощью светового микроскопа на этапе попготовки образца к прицельной ультрамикротомии. Соотношение диаметров большего основания (базапьной части) и меньшего основания (терминальной части) усеченного конуса целесообразно выбирать в пределах 1,25 2,0, Это соотношение является наиболее оптимальным и имеет значение для процедуры изготовления образцов (извлечения готовыхобразцов из ячеек матрицы). Увеличение диаметра терминальной части усеченного конуса (приближение усеченного конуса по форме к цилиндру) приведет к затруднению этой процедуры и по данной причине является нецелесообразным. Уменьшение диаметра терминальной части конуса также неоправдано, так как это приведет к снижению полезной площапи терминальной поверхности и, следовательно, на ней может быть размещено значительно меньшее количество гетерогенных объектов, что соответственно ухудшает условия выбора искомых структур вследствие их малочисленности на условной единице площади терминальной поверхности конуса. Этот фактор приобретает особое значение при выборе для прицельной ультрамикротомии крайне малочисленных интересующих исследователя объектов, располагающихся среди множества прочих. Цюпщцр может быть выполнен в виде полого цилиндра с тонкими стенками (оптически прозрачного в продольном направлении в видимой части спектра, что необходимо для прохождения света от конценсатора светового микроскопа и освещения снизу терминальной поверхности усеченного конуса с находящимися на ней биообъектами), например из керамики, причем внутренний диаметр полого цилиндра должен быть не менее диаметра терминальной части усеченного конуса, так как в случае уменьшения диаметра просвета цилиндра освещенность поверхности усеченного конуса, на которой находятся объекты, будет неполной (затененной по ф креям), что снижает возможность полноценного просмотра объектов наСоставитель В. ГаврюшинРедактор Н, Сташишина Техред И,Мегелева Корректор О, Билак Заказ 5612/45 Тираж 873 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж 35, Раушская наб., д, 4/5филиал ППП "Патент, г. Ужгороц, ул. Проектная, 4 3 033 всей поверхности усеченного конуса, а .увеличение диаметра неоправдано, так как избыток света по периферии площади конуса с объектамп не будет использован.На чертеже показан образец для при 5 цельной электронно-микроскопической улвграмикротомии.Образец состоит из заполимеризованного заливочного материала 1 в вще усеченного конуса, прочно соединенного своей 1 О более широкой частьюс торцом полого циЬлиндра 2, выполненного иэ твердого материала, например из керамики (керамической трубки), а на термической части усеченного конуса расположены исследуемые 5 объекты 3, предназначенные для выбора под контролем светового микроскопа.С образцом работают следующим образом.Образец помепают на предметный сто-.О лик светового микроскопа так, чтобы исследуемые объекты 3 находились сверху, а снизу от конденсатора микроскопа направляют свет, который, проходя через польФ цилиндр 2 образца, освещает объек. ты, распластанные на терминальной часФ ти конуса 1, Под визуальным контролем спомощью метчика отмечают содержащийискомые объекты участок на поверхности образца, на котором будет заточена "пирамида и произведена прицельная ультрамикУ30 ротомия, После приготовления пирамидки". (операция по срезанию вокруг выбранного участка образца, например определенной выбранной клетки, заполимеризованной заливочной среды со всеми прочими объ- З 5 ектами, которым не было отдано предпоч-тение в процессе отбора участка с темиили иными структурами на поверхностиусеченного конуса) образец плотно зажи 40 903 4мают в патроне объектадержателя ультра микротома, причем зажатию подвергают только цилищр 2, обладакижй низким коэффициентом линейного расширения и низкой текучестью. Так как силы деформации не действуют на эаливочный материал, находящийся на торце образца, в последнем устраняется эффект текучести, в сиду чего получают ультратонкие срезы стабильной толщины в соответствии с заданными параметрами О стабильности толщины приготовленных срезов свидетельствует однозначная интерференционная картина отраженного света в серии ультратонких срезов.Таким образом, конструктивные особенности образца обеспечивают возможность размещения множества гетерогенных объектов на терминальной части усеченного конуса, освещения распластанных объектов снизу от конденсатора светового микроскопа через светооптически прозрачный (полый) цилиндр и, следовательно, выбор интересующих исследователя структур из множества гетерогенных объектов для последующей прицельной удьтрамикротомии, При этом образец обледает всеми достоинствами, свойственными двухфрагментным образцам, главным иэ которых является отсутствие твердотельной текучести образца при зажатии его в патроне объектодержателя ультрамикротома и, следовательно, высокое качество изготавливаемых срезов.Кроме того, при изготовлении предлагаемых образцов достигают значительной экономии дорогостоящего заливочного материала поскольку основная часть образца выполнена не из заливочной среды, а иэ пустотелого керамического цюппщра,