Способ подготовки образца дляэлектронно микроскопическихисследований ризосферы корнейвысших растений

О П Й(.-"А Н И Е ИЗОБРЕТЕНИЯ 1 и) 79407 ьеюо Советеких Социалистических Республик) М.Кл. 12 М 1 нением заявкис при Государственный комитет(45) Дата опубликования описания 07.01.81 СС,СР ио делам изобретени и открытий(71) Заявител нститут б мии и физиологии микроорганизмо АН СССР(54) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ОБРАЗЦА ДЛЯ ЭЛЕКТРОННОМИКРОСКОПИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ РИЗОСФЕРЫ КОРНЕЙ ВЫСШИХ РАСТЕНИЙым в чные флоо за 1 О 15 пособов является то, последующей подгоется сохранность риобеспечение расположеей высших лючается в культиаходящихся в его мов методом гид Изобретение предназначено для подготовки образцов для электронномикроскопических исследований и может быть использовано в научно-исследовательской практике при изучении взаимоотношений микроорганизмов, почвы и растений,В настоящее время известны разлиспособы изучения прикорневой микроры растений и среди них важное местнимает микроскопирование 1,Известен также способ подготовки растительных образцов для электронномикроскопических исследований заключающийсяв следующем: ткани растения разрезают накусочки, фиксируют в сосуде, дегидратируют, помещают в заливочный материал, спомощью микротома изготавливают ультратонкие срезы и исследуют на электронноммикроскопе 2.Недостатком этих счто при извлечении итовке образца нарушазосферы корня.Целью изобретения являетсясохранности пространственногония элементов ризосферы корирастений.Сущность способа заквировании растения и нризосфере микроорганиз ропоники с использованием в качестве наполнителя гранулированного агара,Цель достигается тем, что корень живого растения помещают в сосуд, представляющий собой цилиндр с дном, оттянут форме пастеровской пипетки и имеющим отверстие на конце.В нижнюю часть сосуда непосредственно перед его сужением помещают тонкий слой мел копористого материала (например, марля, пенопласт), на который помещают сверху гранулированный агар, заполняющий сосуд до его середины.С помощью перистальтического насоса производят пропускание питательной среды через слой гранулированного агара для снабжения помещенного в сосуде корня, необходимого для роста растения веществами. По прошествии времени, требующегося для аклиматизации растения, вводят суспензию микроорганизмов, Новые порции питательной. среды вводят с интервалом в 1 - 3 дня в течение всего периода инкубации микроорганизмов в ризосфере, длительность которого зависит от условий опыта и может продолжаться до 30 суток и более. Фиксирование для электронной микроскопии проводят путем последовательного пропускания через сосуд с корнем фиксаторов, как это было описано выше, Затем сосуд794075 Формула изобретения Составитель М. Мирзаев Техред Л, КуклинаЗаказ 36/14 Изд. Юо 164 Тираж 530 Подписное НПО Поиск Государственного комитета СССР по делам изобретений н открытий 113035, Москва, Ж.35, Раушская наб., д, 4/5 Типография, пр. Сапунова, 2 3разогревают до температуры 45 - 50 С и вводят в него расплавленный агар, который заполняет пространство между гранулами, При дальнейшем охлаждении происходит затвердение всего содержимого сосуда в 5 виде агарового блока, из которого затем вырезают маленькие блочки, содержащие фрагменты корня с окружающими его микроорганизмами. Регидратацию, заливку и дальнейшую обработку для электронной 10 микроскопии производят обычным путем.П р и м е р. Проросток А 1 пцз д 1 ц 11 поза помещают в химическую пробирку с дном, оттянутым в виде пастеровской пипетки и заполненную до середины гранулами агара, 15 находящимися на марлевом тампоне, помещенном на дно сосуда непосредственно перед его сужением, Питание растения осуществляют путем заполнения средой Крона слоя агаровых гранул с помещенным в не го корнем растения при одновременном вытеснении воды, заполнявшей этот слой ранее, с помощью насоса, присоединенного к оттянутому дну сосуда, По истечении суток после помещения растения в сосуд, в слой гранул вводят суспензию растертых клубеньков А 1 пцз д 1 цИпоза, После выдерживания ее в слое в течение трех часов производят очередную поливку для удаления компонентов суспензии не адсорбированных на поверхности гранул и корня, Последующие порции питательной среды вводят через каждые 24 ч до окончания опыта, который продолжается до 15 суток. Фиксирование корня с окружающей его ризосферой 35 производят путем последовательного пропускания через сосуд компонентов глютаросмиевой фиксации, после чего сосуд разогревают до температуры 45 С и заполняют слой гранул 2,0-ным агаром в расплав ленном виде. После охлаждения сосуда и изъятия агарового блока из последнего вырезают маленькие блочки с фрагментами корня и ризосферы, дегидрируют их в серии спиртов, заливают в аралдит, делают ультратонкие срезы, которые затем окрашивают и исследуют на электронном микроскопе.Предлагаемый способ позволяет получить картину ризосферы большого масштаба, что дает возможность изучать состояние микроорганизмов на значительно большем расстоянии от корня растения, а также исключает возможность каких-либо искажений в пространственном расположении элементов прикорневой зоны,Способ подготовки образца для электронномикроскопических исследований ризосферы корней высших растений, включающий культивирование растений в присутствии суспензии микроорганизмов с последующим фиксированием, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью сохранения пространственного расположения элементов ризосферы корней, растения культивируют в сосуде с гранулированным агаром, пропуская через него питательную среду, в после фиксирования вводят расплавленный агар в разогретый сосуд с последующим охлаждением сосуда. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1. Возняковская Ю. М, Микрофлора растений и урожай, М. - Л., Колос, 1967.2. Ьа 1 опй М е 1 Яп 1 зре 1 А. Сапайа 11 Яцгпа 1 о 1 М 1 сгоЬ 1 о 1 оду, 1977, 23, Мв 11, р. 1531 (прототип),