Способ определения биомассы живых клеток

ОПИС й Союз Советских Социалистических Республик(51)М. Кл. С 12 В 1/00 Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытий(71) Заявитель Киевский институт автоматики им. ХХЧ съезда КПСС(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОМАССЫ ЖИВЫХКЛЕТОК 1Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для определения биомассы в жидких средах.Известны способы определения био- З массы микроорганизмов, предусматривающие прямой подсчет клеток под микроскопом (в счетных камерах, на Фиксированных окрашенных мазках, на мембранных Фильтрах), выделение и 10 учет высевом на плотные (чашечный метод Коха) и в жидкие (метод предельных разведений) питательные среды 1.Недостатки этих методов в . учет как живых, так и мертвых клеток в 15 культуральной среде, длительность способовНаиболее близким техническим решением к предлагаемому по достигаемому эффекту является способ определения 20 биомассы живых клеток в культуральной среде путем внесения в нее красителя с последующим подсчетом окрашенных клеток под микроскопом 12 .Недостатком способа является то, 25 что он занимает много времени.Цель изобретения - ускорение и упрощение способа.Поставленная цель достигается тем, тс после внесения красителя клетки 30 осаждают из культуральной среды, аподсчет живых клеток осуществляют поколичеству адсорбируемого ими красителя. Для этого пробу определенногоколичества культуральной среды (определенного веса для культуральной среды, содержащей пену, или определенного объема для культуральной среды,не содержащей пену) окрашивают заданным количеством прижизненного красителя, заведомо большим, чем необходимо для окраски живых клеток,перемешивают и осаждают клетки, не разрушаяих, известными методами, а затем поинтенсивности окраски жидкости прижизненным красителем определяют количество живых клеток. Интенсивность окраски может быть определена с помощью фотоэлектрического колориметра или другими методами,Интенсивность окраски прижизненным 1 срасителем жидкости пробы культуральйой среды однозначно зависит только от количества живых клеток, так как прижизненный краситель расходуется только для окраски живых клеток. Чем меньше интенсивность окраски жидкости, тем больше в пробе живых клеток, и чем больше интенсивность окраски5 25 жидкости, тем меньше живых клеток в пробе.П р и м е р. Проводят определение биомассы живых клеток Сап 01 да йгор 1- са 11 ь культивированных на гидролизйых средах.Отбирают пробу культуральной среды весом 20 г. В нее добавляют 5 мл.1- ного водного раствора метиленового синего. Эту смесь перемешивают в течение 5 с и при перемешивании приливают 5 мл жидкости флемминга. Через 10 с перемешивание прекращают, Среда в течение 30 с отстаивается - клетки выпадают в осадок. По.интенсивности окраски жидкости определяют биомассу живых клеток при помоз 1 и специально отградуированного для этой цели фотоколориметра.Использование предлагаемого способа определения биомассы живых клеток обеспечивает по сравнению с существующими повышение оперативности определения биомассы живых клеток, что дает воэможность использования автоматических приборов, например фотокалориметров. (Это значительно повысит качество управления процессом культивирования микроорганизмов.)Так как предлагаемый способ технологично прост, на его основе возможно создать автоматический прибор. формула изобретения Способ определения биомассы живых клеток в культуральной среде путем внесения в нее красителя с последующим подсчетом окрашенных клеток, о т л и ч а ю щ н й с я тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, после внесения красителя клетки осаждают иэ культуральной среды, а подсчет живых клеток осуществляют по количеству адсорбируемого имн красителя. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1Практикум по микробиологии. Под ред, Н. С. Егорова. Учебное пособие. М., МГУ, 1976, с. 57. 2. Методы экспериментальной микологии Под ред. В. И, Билай. К.,"Наукова думка", 1973. с. 56.Составитель В. ЗайцеваРедакто Т. Веселова Тех ед М.Рейвес Ко кто В. Б тягаЗаказ 8278 25 Тираж 52 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва ЖРаушская наб.д. 4 5 Филиал ППП "Патент". г, Ужгород,.ул, Проектная. 4