Способ определения содержания липидов в гистологических срезах надпочечников

"( цкйте, .37ОПИС ЕИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Советских Социалистических Республик(22) Заявлено 190774 (21) 2038715/28-13с присоединением заявки Мо(51)М Кг А 61 В 10/00 С( 01 В 1/28 Государственный комитет СССР по девам изобретений н . открытийДата опубликования описания 0506.79(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ЛИПИДЙВ В ГИСТОЛОГИЧЕСКИХ СРЕЗАХ НАДПОЧЕЧНИКОВ Изобретение относится к медици" не, а точнее к радиационной медицине, изучающей состояния надпочечников при воздействии на организм различных факторов внешней среды и раз- рабатывающей соответствующие меры защиты.Известен способ определения содержания липидов в гистологических срезах надпочечников путем окрашивания их красителем 1).Содержание липидов в окрашенных средах оценивается на глаз, путем сравнения микрофотографий. Такой способ не дает точного определения количества липидов.Целью изобретения является повышение точности определения.Для этого параллельно ставят контрольные опыты, устанавливают время освещения негативов в опыте в контроле и по разнице времени освещения определяют процентное содержание липидов. 25Способ осуществляют следующим образом.Надпочечникн подопытных и контроль. ных животных (например по пяти животных иэ каждой группы) фиксируют в 15-ном растворе формалина. Через 2сутки после фиксации на заморажи- вающем микротоме изготавливают срезы надпочечников толщиной 7 мк. Полученные препараты промывают дистиллиро. ванной водой и переносят для окраски в 0,1-ный спиртовый раствор черного судапа. Через 30 мин препараты вынимают из красителя, промывают дистиллированной водой, переносят на предметное стекло и заключают под .покровное стекло 16-ным раствором поливинилового спирта.В зависимости от содержания липи- дов препараты окРашиваются в различные оттенки черного цвета.Далее с одинаковых анатомичвских участков препаратов делают негативйые изображения микрофотографий с увели чением 1 х 300, С негативов на одйо" типную фотографическую бумагу с использованием одинаковых фотореактивов печатают позитивные изображения одинаковой средней плотности, Для этого выбирают и устанавливают оптимальное время освещения негативов. При этом время экспозиции изме ряется секундомером.Процентное содержание липидов вы числяется только при сопоставлении величины экспозиций позитивных изобр.5896 чормула изобретения 3 66 жений одинаковой средней плотности срезов надпочечников, полученных от пОдопытных и кОнтрольных животных.В основу расчета принято следующее: чем больше липидов содержится в надпочечнике, тем интенсивнее по плотно ист и больше по протяженности5 окрасившиеся участки среза и тем светлее будет изготовленный из него негатив микрофотографии. Для печатания на Фотографическую бумагу с негативов при различном содержании липидов потребуется различная пд времени экспозиция. Она находится в обратнопропорциональной зависимости от количества содержащихся в срезе окрашенных липидов.15Величина экспозиций негативов окрашейных срезов надпочечников контрольных животных принимается за 100-ное содержание липидов. Все дальнейшие расчеты содержания пипи- ф дод ведутся на основании этого условия. Далее рассчитывают процентное содержание липидов в опыте и контроле путем сопоставления величины экспозиций при фотографическом печата нии с негативов, полученных от различных подопытных и контрольных животных. Для окончательного расчета берут, среднеарифметические показатеи экспозиций от всех пяти животных 30 на каждый срок исследования. Например, среднеарифметическая величина экспозиций в опыте равна 10 сек, а в контроле - 4 сек, что составит отношение 10:42,5 или в процентном исчислении 100:2,5 щ 40. Следовательно, в данном случае в опыте липидов содержишься 40 по отношенйю к контро. лю. Аналогичные расчеты проводят по всем срокам исследований, что дает возможность определять процентное40 содержание липидов в динамике. Полу-, ченные данные проведенных опытбв с 4введением продуктов ядерного деления показали, что содержание липидов в надпочечниках подопытных животных в зависимости от дозы облучения колебалось от 12,5 до 97,5 по отношению к контрольным животным.Предлагаемый способ повышает точность и объективность определения содержания количества липидов в надпочечниках животных, так как дает возможность определить их процентное содержание, Положительный эФФект способа проявляется в повышении уровня научных исследований, направленных на разработку средств защиты организма от вредных воздействий внешней среды.Этот способ не требует дорогостоящего оборудования и осуществляется параллельно с изготовлением обычных микрофотографий, необходимых при гистологических исследованиях надпочечников. Способ определения содержания липидов в гистологических срезах надпочеч-. ников путем окрашивания их красителем, изготовления негативов микрофотографий, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности определения, параллельно ставят контрольные опыты, устанавливаютвреуя освещения негативов в опыте и контроле и по разнице времениосвещения определяют процентное содержание липндов.Источники информации, принятые вовнимание при экспертизе1. Чучукало А, И. Изменение содержания липоидов, холестерина и аскорбиновой кислоты в коре надпочечников, - Медицинская радиоло-. гия, 1960, т. 5, и. 3, с, 37-41.Составитель В . Головин Р акто О. Иванова Тех ед М, Бабурка Кор екто ". Муска Заказ 3026/4 Тираж 671 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий15 5 .Ра дул щбФилиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4