Способ снижения резистентности одноклеточных организмов

(6) Дополнительное к аят, свил вуЩ Заявлено 05.08.75 (21) 2160730/28-1 2присоединением заявки ЖЖ) Приоритет43) Опублнковано 28.10,75) Дата опубликования А 61 К 29/00 осудорственный комнтетавета Мнннстров СССРоо делам нзооретеннйн открытнй) Заяви Московский ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени государственный университет им, М. В, ЛомоносоваСПОСОБ СНИЖЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТ ОДНОКЛЕТОЧНЫХ ОРГАНИЗМОВтносится кенение при отов.б снижениях организмовам путем вганизмов наи модифициру едицинеоре лекар езистентнок лекарстыращивания питательной ющего фако способа является адапекарственным препаратся исключе- екарственным явлы к Целью изобретения иие адаптации культур препаратам.Это достигается тем йа опсорет 1 выращив 0,005 - 0,01 вес. % ами 0,005 вес. % аскорбинов 25 С. ультуру СпФприсутствии оты и 0,00 -лоты при 22 -что к ают в нокисл ой кис го, в качестве аминокислотыили д-фенил- Д-алании.Берут культуру жгутиковогоСгпиЫа опсоре и сеют на ю срелу, содержа;пую (мг/л):ален н н00, г: - ,. н 25, тиаюкозу 10000, хл".:;:".тый аммоКроме товводят валиПримерпростейшегосинтетическуметионин 200мин 1,0, гл Изобретение о может найти прим ствениых препарат Известен спосо сти одноклеточ ны венным препарат культуры микроор среде в присутстви тора 11. Недостатком эт тация культуры к там.ний 5000, натрий фосфорнокислый лвузамегценный 1500, калий фосфорнокислый одно- замещенный 80, калий хлористый 420, никотинамид 10, пантотенат кальция 1,0, пиридоксин 1,0, парааминобензойную кислоту 3 1,0, биотин 0,01, раствор микроэлементов1 О мл. (рН средвт 7,6 - 7,8). Состав раствора микроэлементов (г/л); сернокислый магний 20, сернокислое железо 0,5, сернокислый цинк 0,5, сернокислый марганец 0,5, серное кислая медь 0,5. В качестве посевного материала используют 44-часовую культуру С г 1 Ьда опсоре Б, Посевной материал в дозе 5 млн. клеток на 1 мл среды вносят в пробирки, содержащие 5 мл той же среды. В момент посева культуры добавляют ми ни м альп ую литическую дозу оливомицина (62,5 мкг/мл) и 0,005% валина. Пробирки располагают наклонно при 24 - 25 С. Пробы лля анализа отбирают через 48, 96, 144, 92, 240, 288.часов. инкубацнн,В контроле (культура и антибиотик) в течение первых 48 час культивирования наблюдается стимуляция деления клеток, сменяющаяся частичным нх лнзисом и регенерацией культуры после 96 час инкубзции.При добавлении к культуре простейшегб с оливомицетниом аминокислоты валина в концентрации 0,01% в течение первых 48 час инкубации происходит размножение клеток, сменяющееся интенсивным лизисом без последующего восстановления культуры; Оптимальной концентрацией валина, пол. ;ностью ингибирующей размножение клеток в присутствии оливомицина, является 0,005%, Количество клеток остается иа уровне посевной дозы в течение всего периода инкубации, Наименее эффективной концентрацией валина оказалась 0,05%, так как при этом наблюдается восстановление культуры к 192 час инкубации и прпбликение числа клеток к контролю,Ингибирующий эффект комбинации оливомиципа и взлипа увеличивается, если к культуре одноклеточного организма добавить аскорбиновую кислоту, изменяюшук окислительно-восстановительный потенциал. Оптимальная концентрация 0,005%,Пример 2: 144-час кул ьтуру С г ИЫ й з опсоре 16 в дозе 5 млн. клеток из 1 мл. среды сеют и пробирки, содержащие 5 мл среды по примеру 1, В момент посева культуры добзвля;от минимальную литическую дозу трипафлавинз (3,9 мкг/мл) и 0,005% Валина. Най;:." зют знало.;ые закономерности роста,. лизиса клеток, описанные в примере 1. г 1 изнс клеток усиливается при добавлении 0,005% аскорбиновой кислоты,Предлагаемый способ благодаря стсутствио привыкания культуры к лекарственным препаратам позволяет повыс.;:. эффективность отбора лекарственных пре.;-рзтов.Формула изобретения1. Способ снижения резистентности одноклеточных организмов к воздействию лекарсгвенных препаратов путем выра цивания"в культуры на питательной среде в присутствии модифицирующего фактора, отличающийся тем, что, с целью исклюения адзп.танин,культуры к лекарственным препарг.там, культуру Сг 111 ийа опсоре;1 выращивают в присутствии 0,005 - 0,0 зес. % аминокислоты и 0,001 - 0,005 вес. % аскорбиновой кислоты при 22 - 25 С,2. Способ по п. 1, отличающийся тем,что в качестве аминокислоты вводят валинили д-фенил - Р-алании.11 сточникн информации, пр:4:;, - :т=-. зс з, -мание при экспертизе:1. 3, бепега Мсгоооду, ч, 54, 2, ;968,417, Составитель С. Малютина Редактор Д. Пинчук Техред О. Луговая Корректор А. Власенко Заказ 5941/8 Тираж 703 Подписное ЫНИИПИ Государственного комитета Совета Мнннстрон СССР по делам изобретений н открытий3035, Москва, Ж 35, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4