Способ определения вирусных и бактериальных препаратов на поверхности субстрата

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 1111 548623 Союз Советских Социалистических Республиколнительное к авт. свС 12 К 100 51 6,75 (21) 2145807/15 Заявлен с присоединением заявки Ло Государственный комит Совета Министров ССС но делаюл изобретений 23) Приорит, Бюллетень Ле ликов крытнн ата опубликования описания 28,03.7(71) Заявитель чно-исследовательскии институт химизац сельского хозяйства ибирски 4) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИРУСНЫХ И БАКТЕРИАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ НА ПОВЕРХНОСТИ СУБСТРАТАИзобретение относится к способам определения остаточных количеств действующего начала отечественных корпускулярных биологических препаратов, применяемых для защиты растений, типа Вирин-ЭКС, Вирин-ЭНШ, Вирин-ГКБ, энтеробактерия, дендробациллин, инсектин и другие.Практическое применение в защите растений от вредителей вирусные и бактериальные препараты получили в последние 5 - 10 лет. Однако способы контроля за остатками этих препаратов в настоящее время не отвечают предъявляемым требованиям.Известны способы определения остаточных количеств вирусных препаратов, основанные на постановке биопроб на восприимчивых личинках со смывами с растительных образцов илп органических остатков и почвы, обработанных биопрепаратами, или же исследовании смывов с субстрата бактериологическим путем 1, 21,Однако известные способы не обеспечивают точности определения остаточных количеств биопрепаратов, так как в обоих случаях не достигается полного снятия с поверхности субстрата биопрепарата в силу явления адгезии и широко распространенных у насекомых латентных форм вирусных заболеваний, а в случае изучения бактериальных препаратов при использовании известных побов невозможно контролировать состояние основного их компонента - кристаллического эндотоксина, так как на питательных средах прорастают лишь споры.5 Известен также способ определения остаточных количеств биопрепаратов, включающий снятие отпечатков с исследуемой поверхности субстрата, обработанной биопрепаратом путем нанесения на поверхность субстрата липкой 10 ленты, с последующим окрашиванием ее красителями и микроскопированием 31.Однако известный способ также не обеспечивает полного снятия компонентов препарата с исследуемой поверхности, Кроме того, изве стные липкие ленты обладают собственной интенсивной люминесценцией в сине-ультрафиолетовой чдсти спектра, что исключает применение специфичных методов выявления действующего начала биопрепаратов.20 Цель изобретения - повышение точностиопределения остаточных количеств бактериальных и вирусных препаратов на поверхности ст бстратаЭто достигается тем, что снятие отпечатков 25 с поверхности субстрата, обработанной биопрепаратом, проводят путем нанесения на субстрат 2 - 3% -ного раствора органического стекла в ацетоне, снятую пленку с отпечатком помещают повторно в указанный раствор для ЗЭ последующего окрдшивания и мпкроскопиро548623 Составитель А. Алексенюк Техред Л. Гладкова Корректор Т. Добровольская Редактор М. Дмитриева Заказ 533/14 Изд.235 Тираж 589 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж.35, Раушская наб., д. 4,5Типография, пр, Сапунова, 2 вания. При этом снятые отпечатки подвергают окрашиванию иммунофлуоресцентными красителями для просмотра их в люминесцентном микроскопе.При специфическом свечении четко очерчиваются контуры микроорганизма, а тело его остается темным.Способ осуществляют следующим образом.На листовую поверхность растительного или иного субстрата, ранее обработанную биопрепаратами, с помощью стеклянной палочки или пипетки наносят 2 о/о-ный раствор органического стекла в ацетоне, который при комнатной температуре и ниже быстро застывает, превращаясь в эластичную пленку толщиной от 0,01 до 0,1 мм. Затем пленку с субстрата чистой стороной переносят на предметное стекло, покрытое тонким слоем 27 о-ного раствора органического стекла в ацетоне, который застывает и фиксирует пленку с отпечатками.Полученный с субстрата препарат окрашивают непрямым иммунофлуоресцентным методом и просматривают в люминесцентном микроскопе с объективом масляной иммерсии в падающем сине-фиолетовом свете.Подсчет клеток на единицу снятого отпечатка с исследуемой поверхности субстрата проводится по формуле:я=- "о где М - количество включений в исследуемом образце,Л - среднее число включений в одном полезрения,5 - площадь препарата,5 о - ,площадь поля зрения микроскопа. В связи с тем что пленка из органическогостекла обеспечивает хорошее снятие микроорганизмов с исследуемой поверхности субстрата, а метод иммунофлуоресценции четко и спе 5 цифично выявляет действующие компонентыпрепаратов, предлагаемый способ более чем в2 раза улучшает качество контроля и в 4 -5 раз повышает производительность труда.10Формула изобретения1, Способ определения вирусных и бактериальных препаратов на поверхности субстрата,включающий снятие отпечатков с исследуемойповерхности субстрата, обработанной биопре 15 паратом, последующее окрашивание и микроскопирование, отличающийся тем, что, сцелью повышения точности определения, наповерхность субстрата после обработки ее биопрепаратом наносят 2 - 3 раствор органиче 20 ского стекла в ацетоне, снятую пленку с отпечатком помещают повторно в указанный раствор для последующего окрашивания и микроскопирования.2. Способ по п. 1, отличающийся тем,25 что снятые отпечатки подвергают окрашиванию иммунофлуоресцентными красителямидля просмотра их в люминесцентном микроскопе,Источники информации принятые во внима 30 ние при экспертизе:1. Вирусы насекомых, М, 1974, с, 127.2, Африкян Э. К,. Энтомопатогенные бактерии и их значение, Ереван, 1973, с. 15 - 28.3. Ра 1 оп А, М 1 опез 5. М. ТЬе оЬзегча 11 оп35 о 1 гп 1 сгоогдап 1 згп оп зцг 1 асез Ьу 1 пседеп 1 11 цогезсепсе ппсгозсору. - ,1. Арр 1. Вас 1 ег 1 о 1.,1973, т 3,3, с. 441 - 443.