Способ определения адгезионных свойств клеток эпителиальных мембран

-л -ПЯТЕНТ 110 Яй бнблнотена МЬА А НОПИС Е ИЗОБРЕТЕН ИЯ Союз Советскин Социалистических РеспубликК АВТОРСКОМУ СВИДВТЕЛЬСе ВУ 1) Дополнительное к авт, свид-ву/ОО присоединением заявкиГосударственный комитет Совета Министров СССР по делам изобретений н открытий5) Дата опу иковання описания 28.02,77(72) Авторы изобретен Меликянц и А,Г, Маленков аучно - исследовательский институт по биологическим испытаниям химических соединений) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АДГЕЗИОННЫХ СВОЙСТВ КЛЕТОК ЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ МЕМБРАН ежклеточста тонкой тх элементов елиального пл дельныхного ко руктур та эпи кишки. В опыт берут весом 150-2007 Вскрывают брю сегмент тонкой ки брызжейки, промых крыс лых пор 1 резают т его от с одной мм. На полость,освобождаю шную шки, ают наде тром ам стороны на каню Изобретение относится к области медицины,в частности к способам определенияадгезионных свойств биологических мембран,Известен способ апределения адгезии клеток в биологическом материале путем разрушения межклеточных контактов и отрываклеток с поверхности образца струей жидкости определенной силы 1 11.Однако известный способ не позволяетизучать изменения отдельных структурных 10элементов межклеточного контакта,Цель изобретения - возможность изучения изменения отдельных структурных элементов межклеточного контакта.Достигается это тем, что по предлагаемому способу эпителиальной тканью разделяют две солевые среды, затем черезткань пропускают поток жидкости под гидростатическим или осмотическим давлениеми регистрируют изменение величины и формы 2потенциала, создаваемого потоком жидкос -ти при прохождении через ткань,Способ определения адгезионных свойствклеток эпителиальных мембран осуществляют следующим образом. 25 Образцом эпнтелиального пласта разделя - ют два солевых раствора, Затем с помощью осмотического или гидростатического давления создают поток жидкости, направленный из раствора, омывающего мукозную сторону эпителия, в раствор на серозной стороне. При этом на образце ткани возникает потенциал, который измеряют электрометром. Заись показаний электрометра ведут, например, на самопишущем потенциометре. Вели - чина и форма потенциала отражает величину механической связи и вязко-эластичные свой ства отдельных структурных элементов контакта и межклеточной среды.Пример 1.Оценка величины механической связи от538023 та,Составитель В. ОстапчукРедактор Н. Петрова Техред О, Луговая КорректорВ, Зорина Заказ 5670/15 Тираж 555Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5филиал ППП "Патент". г. Ужгород, ул. Проектная, 4 противоположную сторону вырезанного препарата накладывак,тлигатуру так, что образуется мешочек, подвешенный на канюле.Этот мешочек заполняют солевым раствором и помещают во внешний объем того же раст- вора Затем во внешнем объеме (со сторонв серозы) повышают осмотическое давление добавлением вещества, не проникающего через эпителий тонкой кишки (например, сахарозы), Осмотическое давление вызывает 10 поток жидкости из раствора, омывающего мукозную стороцу, в раствор на серозной стороне .Под влиянием потока жидкости концентрации катионов и анионов по обеим сторо нам эпителиального пласта изменяются неодинаковым образом, в результате чего возникает трансэпителиальный потенциал. При давлении до Р -0,050-0,060 осмо моль потенциал быстро достигает своего стационарного значения, При Р) Р потенциал сначала быстро возрастает, достигает максимума, а затем падает за время Г к новому, стационарному значению, При этом, 25 по мере увеличения давления максимальное значение потенциала увеличивается в линейной пропорции, а стационарное значение - в нелинейной. Нелинейный рост стационарного значения начинается при давлениях З 0 Р =0,250-0,300 осмомоль,Придавлении Р имеет место расхождение клеточных мембран соседних клеток в области из структур межклеточного контакта - зоны простого соединения, 35При давлении Р расходятся клеточные мембраны в области другой структуры конгакта - зоны плотного соединения. Пол-;.енные результаты согласуются пол ностью с данными электронной и световой микроскопии и позволяют сделать следующий вывод: величина механической связи плотного соединения вОф 2 50-Оэ 300 45 Оэ 050-Оф 060в 5 раз больше механической связи простого соединения,Пример 2.Оценка вязко-эластичных свойств межкл точного контакта эпителия тонкой кишки крыс,Условия опыта и методика измерения теже, что и в примере 1. Регистрируют величину и форму потенциала, возникающего в ответ на приложенное к серозной поверхностиэпителия осмотическое давление 0,200 осмомоль. Затем в солевые растворы, омывающие эпителий, добавляют ЭДТА и инкубируют препарат в течение 30 мин,После этого опять регистрируют величину и форму потенциала, При этом время установления стационарного состояния Гуменьшдется в 5-6 раз по сравнению с нормой, Время Г характеризует вязко-эластичные свойства зоны простого соединения.Следовательно, ЭДТА изменяет вязко-эластичные свойства межклеточного контакта, удаляя кальций из межклеточного пространства,Приведенные примеры показывают возможность прогнозирования биологической активности химических соединений по их действиюна адгезионные свойства мембран клетокживотных в области межклеточного контакформула изобретения Способ определения адгезионных свойств клеток эпителиальных мембран путем механического воздействия на эпителиальную ткань, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью возможности изучения изменения отдельных структурных элементов межклеточного контакта, эпителиальной тканью разделяют две солевые среды, затем через ткань пропускают поток жидкости под гидроста. тическим или осмотическим давлением и регистрируют изменение величины и формы потенциала, создаваемого потоком жидкости при прохождении через ткань.Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:1. Авторское свидетельство М 261643,МКИ А 61 К 27/02, 13,01.70 (прототип),