Способ определения лизина в растительных образцах

о и и с-дзФ и и ИЗОБРЕТЕН ИЯ Союз СоветскихСоциалистицескихРеспублик Х11) 5294 16 К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 61) Дополнительное к авт. свид-в(23) Приоритет -Гасударственный комитет Совета Министров СССР па делам изобретений и открытийи 1) 3 ел 4) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯОБРАЗЦ Способ осуществляют следующим образом.Навеску размолотого растительного образца брабатывают 20% - ным раствором уксусной кисоты в этаноле и 30%. -ным раствором азотистокисого натрия в воде в весовом соотношении 1-2. Суспензию продолжают перемешивать, а выделяющийся газ собирают и промывают насыщенным одным раствором двухромовокислого калия в бъемном соотношении газа к раствору 1:10 для ржания лизиснованный на очистки молекулярного азота от примеси окиси азота. Измеряют объем очищенного азота, выделившегося за период 30 - 90 мин с момента введения раствора азотистокислого натрия и, умножив на коэф фициент пропорциональности /6,6/, получают содержание лизина в образце.П р и м е р. 0,25 г размолотого зерна пшеницы смешивают с 3,0 мл 20%-ного раствора уксусной кислоты в этаноле, и в полученную суспензию вводят 1 мл 30%-ного раствора азотистокислого натрия в воде. Суспензию продолжают перемешивать в течение 90 мин, а выделяющийся при этом газ собирают и промывают насьпценным водным раствором двухромовокислого калия в соотношении не менее 10 мл раствора на 1 мл газа. Измеряют объем чистого азота, выделившегося соответственехнол огни 20 В. П. Тучков и Г. 3. Файбушев Изобретение относится к способам определения содержания аминокислот в растительном материале в области селекции растений и может быть использовано в сельском хозяйстве.Известен способ определения содена в белках из семян растений, ореакции выделенной эпсилонаминогруппы лизина белков с нингидриновым реактивом.Однако такой способ сложен в технологии выполнения (содержит свыше 10 операций), и требует расхода большого набора реактивов (8 различных реактивов). Кроме того, для его осуществления необходим целый комплекс оборудования (пробирки, мешалки, водяные бани, центрифуга,фотоколориметр).,Целью изобретения является уменьшение стоимости анализа за счет упрощения т и сокращения затрат материалов.Это достигается тем что содержание лизина)определяют на основе реакции эпсилон - аминогруппы лизина с азотистой кислотой. В результате этой реакции за определенное время выделяется газообразный азот в количестве, пропорциональном содержанию лизина. По объему этого азота вычисляют количество лизина. ЗИНА В РАСТИТЕЛЬНЫХ529416 но за 30 и 90 мин с момента введения раствора азотистокислого натрия. Содержание лизина в образце рассчитывают по формуле: Х=6,6 (А,-А,) мг, где 6,6 - коэффициент пропорциональности в мг/мл;Аи А - объемы азота (в мл), полученные соответственно за 30 и 90 мин анализа,Коэффициент пропорциональности получен экспериментально на основании анализа зерна Пшеница 3,96 0,60 6,6 Пшеница 4,62 0,70 6,6 Пшеница 3,50 0,52 6,7 Люцерна (сено) 10,30 1,58 6,5 Полученный эмпирический коэффициент пропорциональности хорошо согласуется с расчетным (6,52) на основании уравнения реакции: Я-КН НКО -ч 3-ОН+Н О+И2 Одна грамм-молекула лизина образует за счетэпсилон - аминогруппы при реакции с азотистойкислотой одну грамм - молекулу азота, т.е. каждые146 г лизина образуют 22,4 л азота,. или на 1 млвыделенного азота приходится 6,52 мг лизина,Составитель Н. Муромцев Техред М. ЛевицкаяКорректор С Болдижар Редактор Д. Пинчук Тираж 1029 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб д.4/5(эпсилон - аминбгруппа лизина) . пшеницы и сена люцерны с различным содержаниемлизина. За истинное содержание лизина в них принятоЬ количество, определенное на автоматическом аминокислотном анализаторе. Результаты опыта приведены в таблице . Формула изобретенияСпособ определения лизина в растительных образцах, включающий обработку размолотого образца растворами реактивов, о тли ч а ю щ ий с я тем, что, с целью упрощения технологии и снижения стоимости анализа, образец обрабатывают 20% - ным раствором уксусной кислоты в этаноле и 30% ным водным раствором азотистокислого натрия в весовом соотношении 1:2, а выделяющийся газ промывают насьпценным 10% - ным водным раствором двухромовокислого калия в объемном соотношении 1;10, измеряют объем газообразного азота, выделившегося за период 30 - 90 мин с момента введения раствора азотистокислого натрия и проводят подсчеты по известным формулам,