Способ превращения бревикарина в бревиколлин

(23) ПриоритетОпубликовано 05,05.75 та Министров ССС ллетень(53) УДК 615 32(088 8 до делам изобретени н открытийания 08.08.7 ата опубликования о бин, Л. А. Головлева, И. В. Терен дырина, Г, Е, Шмотина, М, Ю. Ни И. И, Червин ут биохимии и физиологии микро) Заявитель ганизмов АН ССС исти(54) СПОСОБ П РЕВРАЩЕН ИЯ БР Е В Н ЕВИКОЛЛИН робиологичек получению Изобретение относится к мик ской промышленности, а именно медицинских препаратов,Известен способ получения брев листьев осоки парвской,Целью изобретения является сп щения бревикарина в бревиколл Для достижения этой цели на ные культуры грибов из рода Р КЫгорцз. Трансформацию осущес мощью культуры Реп 1 с 1111 цтп Ясг) 11 па е 1 бо 1 ойеча зр поч ИБФ КЫгорцз огугае Юеп 1 е 1 Рпп ИБцентре морщинистые, бледно-розоватые, с краем зернистым и гладким, слабо зональным, синевато-зеленым, зеленым, матово-зеленым или хризолитовым и бесцветным ореолом погру женного мицелия; обратная сторона кремовая,с возрастом переходящая в бледно-терракотовую, с лимонно-желтой, серо-желтой и белесоватой прикраевой и краевой зоной, радиально- складчатая. Эксудат бесцветнын или кремо вый, ограничен илн отсутствует. Запах приятный, грибной (напоминает запах сырых грузден),Конидиеносцы прямые, простые с расширенным апикальным концом (4 - 5 ц), силь но бородавчатые, возникают от субстрата иликак боковые ветви от воздушных гриф, 27 - 500 (600) к 2,1 - 3 р. Кисточки комнактныс, преимущественно бивертицнллятные на фоне моновертициллятных и асимметричных (с од ной боковой веточкой); веточки, прижатые илиотходящие, по одной в кисточке, бородавчатые 26,4 - 32 (40) К 2,4 - 3 (3,2) ц, метулы параллельные или слегка расходящиеся, вздутые на апикальном конце (4 ц), бородавчатые (3 - 4 - 25 6 - 8) 7,7 - 16,1 ( - 20,3) К 2,1 - 2,8 ( - 3) р,стеригмы в компактной кисточке (6 - 8), бутылковидные с конидиерождающей трубкой до 2 р, бородавчатые 7,7 - 10,5 (19) К 2,1 - 3 (3,5) р; конидии эллиптические, но встреча ются и круглые или почти такие, бородавчаиколлина из особ превраин.идены активен 1 с 1111 цгп и твляют с поаЬ 1 п 11 ЬсЬпоМ г 382 или ФМ Г 386. Культуру выращивают на среде, содержащей источник углерода, азота и минеральные соли, Процесс идет при атмосферном давлении, температура 24 - 28 С.Описание штамма Реп 1 с 1111 цтп з 1 г) аЬ 1 п 11 БсЬгпо 11 па е 1 бо 1 оч 1 еча зр пон ИБФМ 1382.Гриб выделен из почвы близ поселка Мухинка (под Благовещенском) Амурской области, образцы почвы собраны в 1971 году Л.А. Головлевой.Культура Г 382 хранится в коллекции культур микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР.Колонии на агаризованной среде Чапека на 12 - 14 день 3,8 - 4,6 см в диаметре, бархатистые, радиально-бороздчатые, бугристые, в 2) Авторы изобретения Г, К. Скр Г. А, С469744 55 Составитель С, Малютина Корректор А. ГалаховаПодписное Редактор Т. Каранова Заказ 192213 Техред А, Камышникова Тираж 529 Изд.669 Типография, пр. Сапунова, 2 тые 1,8 - 2,4 К 3,5 (5,0) р, образуют цепочки 50 - 100 р длины.Колонии на сусло-агаре на 10 день 4,7 - 5,4 см в диаметре, прижатые, зернистые, с несколько приподнятым бархатистым центром и неравномерно радиально расходящимися от него и постепенно сужающимися к краю колонии выпуклыми пушистыми секторами. Цвет колонии - смесь темно-зеленого со свинцово- серым, секторов - свинцово-серый, центра и узкой краевой полосы - белый; обратная сторона в центре радиально-складчатая, сигарного цвета. Эксудат ограничен, быстро обрастает мицелием, образуя бугорки. Запах приятный, грибной.Описание штамма ЯЫкорцз огукае Жепе е 1 Рпп ИБФМ Р 386.Колонии гриба высокие, пушистые с хорошо развитым воздушным вегетативным мицелием, серые в центре и темно-серые или буровато-серые по краям, спороносящие. Стилоспорангии вариабельны по размерам 49,5 - 231 ц, и более, в зрелости темные с расплывающейся в молочной кислоте оболочкой. Колонка шаровидная 51 - 165 р в дм или сплюснутая 1210 р. Лпофиза блюдцевидная. Стилоспорангиеносцы прямые или извилистые 10 - 20 р в дм, простые, часто и с раздвоенной, тройчато- или неправильно мутовчаторазветвленной верхушкой и обычно с промежуточным вздутием в месте ответвления, буроватые до 50014, дл., отходят по 1 - 3 от шейки ризоида или столоновидных гиф.Спорангиеспоры шаровидные, эллиптическишаровидные, эллиптические неправильноугловатые. 3 - 7 - 8 р, в дм., часто прорастают, находясь еще в стилоспорангии, от чего последний приобретает вид клубочка. Хламидоспоры шаровидные, эллиптические, цилиндрические 49,2)(23,1 р, промежуточные и одиночные.Культура хранится под Мв Р 386 в коллекции культур Института биохимии и физиологии микроорганизмов ЛН СССР.П р и м е р 1. Культуру Реп 1 с 1111 цп 1 зр. выращивают в течение двух суток на агаризованной среде Чапека состава (в г/л):МаМОз 3,0 КС 1 0,5 Мдзо 4 0,5 КН 2 Р 04 1,0 Ре 504 0,01 Сахароза 20Вода дистиллированная до 1 л.Трансформацию бревикарина осуществляют на среде Чапека, разлитой в колбы Эрленмейера на 250 мл по 50 мл. В качестве ростового 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 субстрата используют сахарозу. В качестве трансформируемого - бревикарин (250 мг). Культивирование производят в термостате, в покое при температуре 24 - 29 С, в течение б - 7 дней, На седьмые сутки культуральную жидкость центрифугируют, упаривают фильтрат в вакууме досуха. Сухой остаток обраба тывают теплым спиртом, тердый остаток после обработки спиртом растворяют в 1 М соляной кислоте. Отфугованный мицелий промывают несколько раз соляной кислотой. Кислотные растворы объединяют, подщелачивают аммиаком до рН 9 и извлекают эфиром 7 раз по 10 мл, Эфирный раствор промывают водой, эфир отгоняют в вакууме. Остаток растворяют в небольшом количестве метанола и хроматографируют на пластинах (12)(15) в тонком незакрепленном слое окиси алюминия (11 степ. активности) в смеси растворителей хлороформ с 4% метанола, параллельно со свидетелями - бревиколлином и бревикарином. В УФ-свете обнаруживают две резко различные зоны: одна - соответствующая бревиколлину (К 1 0,56) и другая - пристартовая, размытая и неоднородная полоса, включающая зону неизменного бревикарина, Полосу, соответствующую бревиколлину, собирают, и продукт элюируют бензолом. Растворитель отгоняют в вакууме. Плотный вспенившийся остаток (100 мг, 51,3%) кристаллизуют дважды из ацетона,После выделения описанным способом продукт трансформации анализируют различными методами: температура плавления 223 - 224 С, т. пл, смешанной пробы не дает депрессии, угол вращения в спирте (ап) - 144, УФ-спектр - Лманс. 222, 288, 339 и 532 нм в спирте и Лмавс. 262, 306, 372 нм в спирте, подкисленном НС 1. ИК-, ЯМР- и масс-спектры полностью соответствуют спектрам бревиколлина,Пример 2. Культуру гриба К 111 корцз огукае выращивают в течение двух суток на агаризованной среде Чапека. Трансформацию бревикарина осуществляют на среде Чапека, разлитой по 50 мл в колбы Эрленмейера на 250 мл, с 1 % сахарозы и 250 мг бревикарина,Процесс трансформации и выделение готового продукта ведут по методике, описанной в примере 1. П р едм ет изобретенияСпособ превращения бревикарина в бревиколлин, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что трансформацию осуществляют с помощью культуры Реп 1 с 1111 цгп Я 4 г 1 аЫпй Яс 11 гпо 11 па е 1 йо 1 оч 1 еча вр поч ИБФМ Р 382 или КЫуорцз огукае ччеп 1 е 1 Рпп ИБФМ Р 386,