Способ получения протеолитических ферментов

О П И СА"-И"И-а 1146 ЛОЗИЗОБРЕТЕНИЯ С:1 оз Советских Социалистических Реепублик(51) М. Государствеииыи иомите Совета Министров СССР(71) Заявит 54) СПОС ЛУЧЕНИЯ ПРОТЕОЛИТИЧЕС ФЕРМЕНТОВ 2 тиче- мик 111 цз, ники нием Изобретение относится к технологии получения кормовых протеаз и может быть использовано в сельском хозяйстве.Известен способ получения протеоли ских ферментов путем культивирования 5 роорганизмов, относящихся к роду Вас на питательной среде, содержащей источ углерода, азота, с последующим выделе ферментов из культуральной жидкости.С целью увеличения активности продуцируе мых ферментов по предлагаемому способу из микроорганизмов, относящихся к роду Вас 11- 1 цз используют вид Ыозцз.Из вида Вас. Ыозцз используют штамм 1002. 1 Кормовые протеазы этого штамма образуются без выделения сероводорода и аммиака.Наращивание микробной массы штамма Вас. Ыозцз1002 позволяет накапливать в жидких средах экзопротеазы с протеолитической активностью (ПА) 10000 - 12000 ед/л, а клеточная масса и ее экстракты за счет эндопротеоз увеличивают ПА более чем в 20 раз (по методу водно-спиртового титрования). ПА всей культуральной мыссы имеет прямую зависимость от количественного накопления микроорганизмов-продуцентов в среде.П р и м е р. Посевной материал продуцента выращивают на рыбном бульоне, на МПБ, на бульонах из отходов рыбной и мясной промышленности, на мясо-костном бульоне, на бульоне Хоттингера с суслом, на бульонах (отварах) из трупов животных, на растительных (сенных) отварах, на производственных средах Намура,Производственное наращивание культу- ральной массы налажено в условиях хозяйства на бульонах из трупов животных.Можно использовать все трупы животных со снятой кожей и удаленным желудочно-кишечным трактом. В зимний период трупы замораживают и используют по мере надобности,Трупы в разрубленном виде погружают в специальный котел с герметичной крышкой и манометром. Трупную массу заливают водой (1: 2 или 1: 3) и варят под давлением 0,5 атм в течение 5 - б ч.При таком режиме трупы не только надежно обезвреживаются от патогенных микроорганизмов, но и хорошо развариваются, а кости легко отделяются.Всю бульонную массу вместе с остатками мышечных волокон в горячем виде переливают в специальные котлы, например молочные танки емкостью 0,5 т. В эти танки заливают (или лучше перекачивают) горячий (не ниже 80 С) бульон в количестве 100 в 3 л.Крышку герметично закрывают, а трубку в ней - стерильной ватной пробкой. Бульон ос15 20 25 30 35 Предмет изобретения 45 50 55 Составитель Л. Минеева Техред 3. Тараненко Корректор И. Позняковская Редактор В. Блохина Заказ 1802/4 Изд. М 1880 Тираж 529 11 одписное ЦНИИГ 1 И Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж.35, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр, Сапунова, 2 тавляют для остывания на 3 - 7 ч до снижения температуры до 20 - 30 С. Посевную культуру штамма-продуцента в количестве 200 - 250 г в возрасте 3 - 5 суток переливают в танк при соблюдении правил асептики.В танке штамм инкубируют в течение 3 - 4 суток при оптимальной температуре, после чего через кран (снизу) отбирают пробу культуральной жидкости для проьерки на ПА и дальнейшего использования культуральной жидкости в корм.Дозы нативной культуры в корм животным определяют в соответствии с ПА культуральной жидкости.В зимний период культуральну:о жидкость перед использованием можно подвергать трехкратному замораживанию - оттаиванию с целью разрушения микробных клеток н обогащения культуральной жидкости эндопротеазами,При смешивании культуральной жидкости с кормами последние должны иметь температуру, не превышающую 40 С,Белки кормов животного и растительного происхождения подвергают воздействию экзои эндопротеаз микроба-продуцепта.В процессе скармливания фермептированных кормов действие протеаз вырастает за счет последующего разрушения микробных клеток продуцента в желудочно-кишечном тракте животных.Хар актер истика шта м м а.М о р ф о л о г и я, Палочки тонкие, прямые 2 - 3 Х 0,6 мкм, подвижные; споры овальные, толще диаметра материнской клетки, образуют утолщения, подобные вздутию, без строго определенного положения в клетке, хотя чаще эти вздутия образуются в центре,Физиология и биохимические с в о й с т в а. Штамм хорошо растет на органических и синтетических средах.На плотных средах образует суховатые колонии или сплошной налет в виде матовых наложений, плоских, с мелкими морщинами на поверхности возвышений,На картофельной среде образует желтовато-белый, мелкоморщинистый, складчатый налет, Желатиновый столбик при посеве уколом разжижает в течение 1 - 1,5 суток.Молоко свертывает и быстро пептонизирует, а на поверхности образует толстоватую морщинистую пленку, края которой вползают на стенку пробирки.На мясо-пептонном бульоне (МПБ) образует серую пленку в складках. Муть на бульоне отмечается в первые сутки инкубации,4На дпе пробирки в осадке преобладают одиночные палочки.Отношение к источнику углер од а: разлагает крахмал, образует кислоту на средах с глюкозой, сахарозой и мальтозой.Отношение к источникам азота: усваивает белок соединительной ткани, коллаген, миозин и промежуточное вещество,Коагулированную кровяную сыворотку животных при 56 - 60 С разжижает на вторые сутки. Сероводорода, аммиака и индола не образует. Нитраты восстанавливает. Лучший рост штамма наблюдается на рыбном бульоне, а затем на МПБ и на бульонах из отходов рыбной и мясной промышленности, а также на бульоне Хотингера с суслом, на бульоне с желатиной в количестве от 5 до 15%, на бульоне с лактозой, дрожжевой среде с кашалотовым жиром, на растительных отварах, включая сенной отвар и сок растений, кормовых, луговых трав, сок сенажа и силосуемой массы, на производственной среде Намура и некоторых ее модификациях,На этих средах при оптимальной температуре и рН в теченпе 1 - 3 суток продуцирует кислые протеазы с ПА до 10000 - 12000 ед/л, а в клеточпых экстрактах, в особенности при трех и более кратных замораживаниях и оттаиваниях, ПА может возрастать более чем в 20 - 30 раз.Увеличение ПА отмечено при добавках к среде сусла и коллагена.Отношение к кислороду: выраженныи аэрофил,Температурный оптимум роста в пределах 20 - 25 С.Оптимальный рН 4,5 - 6,5.По Гр а му кр асится положительно. 1. Способ получения протеолитических фер. ментов путем культивирования микроорганизмов, относящихся к роду Вас 111 цз, на питательной среде, содержащей источники углерода, азота с последующим выделением ферментов из культуральной жидкости, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью увеличения активности продуцируемых ферментов, из микроорганизмов, относящихся к роду Вас 11- 1 цз, используют вид Ыозцз.2. Способ по п. 1, отл и ч а ю щи й с я тем, что из вида Вас 111 цз Ыозцз используют штамм 1002.