Способ пассирования клеток животных и устройство для его осуществления

(5 ОПИСАН ИЗОБРЕТ АВТОРСКОМ ИДЕТЕЛ ЬСТВУ ой физики А стовская и В,це аоб сеП, 19 ок и тканей. -вляется увеличе- травмируемости вых ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОВЕДОМСТВО СССР(56) Опа Я. Вуап ет аТз12, 619,Пол Дж, Культура клеМедгиз, 1963, с. 14. 216. Изобретение относится к технике культивирования клеток вне организма и может найти применение в биологии, медицине и биотехнологии. Из ществе ровани ких фер непрер исследо тактзав гаемый биотех клеток с них би русныхЦел обретение предназначено преимунно для облегчения техники пассия без использования протеолитичесментов и хелатирующих агентов при ывном ведении культуры клеток для вательских работ на культурах конисимых клеток, Кроме того, предласпособ может быть использован в нологии для получения биомассыцелью последующего выделения из о. огически активных веществ и випрепаратов,ью изобретения яода и уменьшение(54) СПОСОБ ПАССИРОВАНИЯ КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ И УСТРОЙСТВО ДЛЯ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ(57) Использование: биотехнология и техническая микробиология, Сущность изобретения:клеткикультивируютдо прикрепления к носителю. Затем носитель с монослоем клеток переносят в свежую питательную среду и культивируют до образования мультислоя. Верхние слои клеток снимают встряхиванием, монослой клеток вновь культивируют до образования мультислоя в свежей питательной среде. Устройство содержит емкость с размещенным в ней носителем клеток в виде волокон, закрепленных в крышке емкости, 2 с.п. ф-лы, 1 ил,ссе их отделения и снятие с клеток в проценосителя.На чертеже изображено устройство дляреализации предлагаемого способа,Устройство содержит флакон 1 с пробкой 2, в которой с помощью стержней 3закреплены эластичные трубки 4, соединенные с волокнами 5, свободно расположенными на дне флакона.Изобретение реализуется следующимобразом,Суспензию клеток в питательной средевводят во флакон 1, закрывают его пробкой2, в которой закреплены носители волокна(капилляры) 5. Клетки оседают на дно флакона 1 и волокна 5. После прикрепления клеток к волокнам 5 (контроль осуществляютпри помощи микроскопа) пробку 2 с волокнами 5 вынимают и переносят во флакон со1799907 авитель В,Лавровск ор Л.Волкова Техред М.Моргентал Корректор О,КравцоваЗаказ 1138 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СС 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5енно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул. Гагарин Прои свежей питательной средой, соблюдая условия стерильности. Дальше клетки растут на волокнах до образования мультислоя,Для отделения клеток флакон несколькораз встряхивают вручную. При этом слабо прикрепленные верхние слои клеток отде- /Уляются от волокон, обнажая монослой распластанных на волокнах клеток. Контроль за ростом и отделением клеток осуществляют визуально и с помощью микроскопа, Затем пробку 2 с волокнами 5, покрытыми моно- слоем оставшихся клеток переносят во флакон со свежей питательной средой для выращивания нового мультислоя и осуществления последующего цикла пассирования,П р и м е р . Фибробласты китайскогохомячка лини В-б-й-ГАЕклон 431 выращивали в смеси сред Игла и 199 (1:1) с добавлением сыворотки крупного рогатого скота (10) и гентамицина (150 мкг/мл), Суспензию клеток объемом 7 мл с концентрацией 4 10 клеток/мл заливали во флакон Карреля с волокнами, диаметром 1 мм и длиной 2 до 3 см, После прикрепления клеток к волокнам примерно через 10 ч культивирования при 37 С пробку с прикрепленными к ней волокнами перенесли в культуральный флакон со свежей питательной средой, Легким встряхиванием волокна располагали во флаконе так, чтобы они были отделены друг от друга. Далее проводилось культивирование при 37 С до образования мультислойных структур клеток на волокнах, через 2 - 3 дня встряхиванием снимали по (5 - 6) 10 клеток с одногобфлакона в объеме среды 7 мл.Предлагаемые способ и устройство пас сирования клеток позволяют увеличить выход клеток снимаемых с подложки в 10 - 20 раз по сравнению со способом механического съема клеток с сохранением 97 - 98; жизнеспособных клеток.Формула изобретения 1, Способ пассирования клеток животных, включающий культивирование клеток на носителе с последующим их механическим снятием, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью увеличения выхода и уменьшения травмируемости клеток, в качестве носителя используют волокна, клетки культивируют до образования мультислоя, затем верхние слои клеток снимают, а носитель с 20 монослоем клеток культивируют в свежейпитательной среде до образования мульти- слоя.2, Устройство для пассирования клетокживотных, включающее флакон с горловиной и пробкой, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что, с целью увеличения выхода жизнеспособных клеток за счет снижения их травмируемости в процессе деления и снятия, во флаконе размещены волокнакапилляры, 30 служащие носителем для клеток, расположенные свободно на дне флакона и соединенные с пробкой посредством гибких эластичных трубок и стержней.