Способ определения повреждения отделов нефрона

(56) Лойда ЗГосхимия ферментовМ,; Мир, 1982,%22осударствеий государтА.И, Гожен ныи универтвенный меВ,Н,. М ер Т. Гистоые методы. срау Р., Ши : лаборато медицине, а быть испольждения отделяется повыособа за счет ьного опредеьном и проксиС) 4 ОГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛ Изобретение относится именно к нефрологии, и може зовано для.определения повр лов нефрона.Целью изобретения яв шение информативности сп возможности дифференциал ления повреждения в дистал мальном отделах нефрона,Способ осуществляют следующим образом,Криостатный срез биопсийного материала почки инкубируют в среде для выявления активности сукцинатдегидрогеназы (инкубационную среду готовят непосредственно перед опытом, смешивая равные объемы 0,2 М фосфатного буфера с рН,6 и 0,2 М раствора сукцината натрия. к 10 мл данного раствора добавляют 10 мл раствора 10 мт нитросинего тетразолия (НСТ) в воде). В местах высокой активности сукцинатдегидрогеназы выпадают фиолетовые гранулы гидразинтетразолия, Затем эти срезы после(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОВРЕЖДЕНИЯ ОТДЕЛОВ НЕФРОНА(57) Использование: в области нефрологии. Сущность изобретения: повреждение отделов нефрона определяют.по снижению активности сукцинатдегидрогеназы в сочетании с. определением активности щелочной фосфатазы на криостатных средах .биопсийного материала почки. Способ позволяет проводить дифференциальное определение повреждения в дистальном и проксимальном отделах нефрона. промывки в дистиллированной воде инкубируют в среде для.выявленияактивности щелочной фосфатазы (инкубационную1 среду готовят также непосредственно пе-Я ред опытом, для чего растворяют 5 мг нефтол - Ав - В - фосфата в .0,25 мл диметилформамида, добавляют 25 мл дис- . тилированной воды и 25 мл 0,2 М трис-НС буфера с рН 8,7, Сюда же прибавляют 30 мг Вь прочного красного ТЯ). В местах высокой активности щелочной фосфатазы выпадают. красные гранулы красителя. Таким образом, вокруг гранул щелочной фосфатазы как маркера проксимального отдела нефрона выявляется сукцинатдегидрогеназа, по снижению активности которой определяют повреждение проксимального канальца, а при изолированно выявляемом снижении активности сукцинатдегидрогеназы определяют повреждение дистального отдела нефрона,П р и м е р 1, Больной П., поступил с жалобами на боли в области поясницы., общую слабость. В анамнезе: перенес острый гломурулонефрит. Объективно: артериаль1741079 Составитель О,филатовТехред М,Моргентал Корректор А.Ротман Редактор М.Циткина Заказ.2083 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитетапо изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинаг "Патент". г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 ное давление 140/90 мм рт,станемия (эритроциты 3,810 /л, гемоглобин 130 г/л), протеинурия 1,12 г/сут, зритроцитурия 6,5 10 /сут, циаиндрурия 7,3 10 /сут, Симптом Пастернацкого положительный, При гистологическом исследовании биопсийного материала подтвержден диагноз хронического гломерулонефрита (мембранозный тип),При исследовании биопсийного материала почки на СДГ идентифицированы проксимэльные и дистальные отделы нефрона 60 из 100 наблюдаемых фрагментов почечных канальцев, а при использовании предлагаемого способа 100 из 100, В результате достигается поставленная цель,П р и м е р 2. Больная С., поступила с жалобами на общую слабость, головную боль, В анамнезе: перенесла острый гломерулонефрит, Объективно: артериальное давление 140/80 мм рт,ст., анемия (эритроциты 3,9 10 /л, гемоглобин 126 г/л), протеинурия 1,33 г/сут, эритроцитурия 7,2 х х 10 /сут, цилиндрурия 8,2 10 /сут, Симптом Пастернацкого отрицательный, При гистологическом исследовании биопсийного материала почки подтвержден диагноз хронического гломерулонефрита (мембранозный тип).При исследовании биопсийного материала почки на СДГ идентифицированы проксимальные и дистальные отделы нефрона 60 из 100 наблюдаемых фрагментов почечных канальцев, а при использовании заявленного способа 100 из 100. В результате достигается поставленная цель.П р и м е р 3. Больная Ю, поступила с жалобами на общую слабость, головную боль, боль в области поясницы, В анамнезе: острый гломерулонефрит, Объективно: артериальное давление 150/90 мм рт.станемия (эритроциты 3,6 10 /л, гемоглобин12 130 г/л), протеинурия 0,98 г/сут, эритроцитурия 7,1 10 в/сут, цилиндрурия 4,8 10 lсут, Симптом Пастернацкого положительный.При гистологическом исследовании био псийного материала почки подтвержден диагноз хронического гломерулонефрита (мембранозный тип).При исследовании биопсийного материала почти на СДГ идентифицированы про ксимальные и дистальные отделы нефрона60 из 100 наблюдаемых фрагментов почечных канальцев, а при использовании заявленного способа 100 из 100. В результате достигается поставленная цель.15 Всего было обследовано. предложенным способом 90 лабораторных животных (крыс) с сулемовой и цис-платиновой нефропатией и 6 больных с гломерулонефритом, у которых с точностью 100 были определе ны повреждения отделов нефрона.Формула изобретения Способ определения поврежденияотделов нефрона путем гистоэнзимохи мического исследования биойсийного материала, включающий оценку активности щелочной фосфатазы по числу гранул маркера, с последующим определением повреждения в сравнении.с контролем, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышенияинформативности способа за счет возможности дифференциального определения повреждения в дистальном и проксимальном отделах нефрона, дополнительно проводят 35 оценку активности сукцинатдегидрогеназыпо числу гранул формазана и при снижении количества гранул формазана относительноконтроля определяют повреждения в дистальном участке нефрона. а при наличии 40. гранул маркера щелочной фосфатазы и снижении числа гранул формазана - повреждение проксимального отдела нефрона.