Способ низкотемпературного консервирования эмбрионов

(5)5 А 01 И 1 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР РЕТЕНИЯ ОПИСАНИЕ В ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕ(21) 4306495/14 (22) 25,09,87 (46) 15,10.91, Бюл, М 38 (71) Институт проблем криобиологии и криомедицины АН УССР (72) В, И, Грищенко, Ю. В. Калугин, Н. А, Лучко и Е, Н, Черныш, (53) 615.475(088,8) (56) Кгац К. Т. КоспегМ, )лИ 9 Ь 1 В, Э/, - ЕЬегоцепоод 1, 1985, 23, М 1, р, 194.. (54) СПОСОБ НИЗКОТЕМПЕРАТУРНОГО КОНСЕРВИРОВАНИЯ ЭМБРИОНОВ (57) Изобретение может найти применение для длительного хранения репродуктивных клеток редких и исчезающих видов животных. Цель - повышение сохранности биоИзобретен и может найти хранения репр исчезающих ви Целью изо ние сохраннос брионов до ста Способ осуяется повышеих свойств эмта.ледующим оббрион бласт овател рвалом ицери ьфокси - хол но-сол ция кр с эмб разом.Эм дии 32 послед с инте ров: гл тилсул агента фосфат центра вания ие относится к криобиологии применение для длительного одуктивных клеток редких и дов животных.бретения явлти биологическдии бластоцисществляется с ы мышеи, полученные на стаомеров, разбавляют 1:1 тремя ьно добавляемыми порциями3 мин, смеси криопротектона, пропиленгликоля и димеда (ДМСО) и метилирующего ина-хлорида на стандартной евой среде Дюльбекко. Кониопротекторов после смеширион а ми составл яет 4,75 -логических свойств эмбрионов до стадии бластоциста. Для достижения цели к эмбрионам мышей, полученным на стадии бастомеров, добавляют смесь криопротекторов; глицерина, пропиленгликоля, диметилсульфоксида и 0,40 раствор холина-хлорида, на стандартной фосфатно-солевой среде Дюльбеккодо конечной концентрации 4:75- 5,50/ каждый, Все процедуры осуществляют при температуре 4-8 С, После эквилибрации эмбрионы разливают в контейнеры, завальцовывают их и погружают контейнеры на 5-10 с в порошок цинка, охлажденный до температуры жидкого азота ( - 196 С). Затем контейнеры переносят для хранения в жидкий азот. 5,250 ь, а холина-хлорида 0,4/ Время разбавления составляет 15-20 мин и является 0 временем эквилибрации. Все указанные 00 процедуры осуществляют при 4-8 С. После (д) эквилибрации эмбрионы разливают в кон-; (с тейнеры, изготовленные из пищевой фольги, объемом 0,1 мл, которые д завальцовывают и погружают на 5-10 с в порошок цинка, охлажденной до температуры жидкого азота ( - 196 С), а затем переносят в жидкий азот для хранения. , ф Размораживание осуществляют в водяной бане при 40 С в течение 5 - 10 с.П р и м е р 1. 60 эмбрионов разделяют на 6 групп по 10 эмбрионов, В каждую из групп внесли по 5 капел фосфатно-солевой среды Дюльбекко, содержащий 10,5 глицерина (чда). 10,5% пропиленгликоля (чда),10,5 ДМСО и 0,87, холина-хлорида, при1683621 Формула изобретения Составитель В.ФроловаРедактор М,ВасильеваТехред М,Моргентал Корректор С.Черни Заказ 3450 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина, 101 этом концентрация каждого из криопротекторов составила 5,25 , а холина-хлорида 0,4 . Все процедуры проводят при температуре 4 С. Разбавленные эмбрионы переносят в контейнеры из пищевой фольги с толщиной стенок 0,03 мм и размерами 1 х 1,5 см, обьемом 0,1 мл, Свободные края контейнера завальцовывают и погружают на 10 с в металлическую емкость, заполнен-ную порошком 7 п, и погруженную в жидкий азот. После этого контейнеры переносят в жидкий азот, где хранят в течение 2 недель. Размораживали в водяной бане при 40 С. После размораживания развитие в культуре составило 94,8 о ,Для обоснования концентрации криопротекторов проводили эксперименты аналогично примеру 1, только брали различные кон центра ции криоп роте кторов (4,75%).Сохранность эмбрионов определяли по данным развития их в культуре до стадии бластоцисты.Предложенный способ позволяет повысить сохранность эмбрионов после размораживания на 27 .5 Способ низкотемпературного консервирования эмбрионов, включающий замо раживание до -196 С в фосфатно-солевойсреде Дюльбекко с криопротектором глицерином,отличающийсятем,что,сцелью повышения сохранности биологических свойств эмбрионов до стадии бластоцисты, 15 в среду добавляют 0,4 о -й раствор холинахлорида, пропиленгликоль и диметилсульфоксид до конечной концентрации 4,75-5,25 каждый, а замораживание ведут в емкости с порошком цинка, предваритель но охлажденным до -196 С,