Способ флуоресцентного определения жизнеспособности грибов

/64 ОПИСАНИЕ ИЭОБРЕТК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ в орыГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТПРИ ГКНТ СССР(71) Ленинградский институтционного приборостроения(56) Манойлов В.Е. и др. Приконтроля окружающей среды.- МАтомиздат, 1980, с,144-54.Авторское свидетельство СВ 490821, кл, С 12 (3 1/02,С 01 Б 21/64, 965.(54) (57) СПОСОБ ФЛУОРЕСЦЕНТНОГООПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ ГРИБОВпутем окрашивания суспенэии мицелиягрибов флуоресцирующим красителем,регистрации флуоресценции на двухдлинах волн и определения искомойвеличины по соотношению интенсивнос,ти люминесценции на этих длинах волн,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что,с целью повышения селективности определения, окрашивание производят9-аминоакридином, а флуоресценциюрегистрируют в спектральном диа,пазоне с длинами волн 430 и 687,5 им,14532ФИзобретение относится к микробиологическому анализу веществ и может быть использовано при исследованиях биокоррозии неметаллических материалов, условий роста и развития мик" роорганизмов на этих материалах, а . также при санитарно-гигиенических обследованиях различных помещений,Цель изббретения " повышение се лективности определения жизнеспособности грибов.Сущность способа заключается в следующем.Известно окрашивание клеточных 15 суспензий, 9-аминоакридином с целью определения и исследования некоторых клеточных физиологических характеристик, прежде всего, трансмембранного градиента рН. Водорастворимый кра ситель 9-аминоакридин хорошо Флуоресцирует в водном растворе, но его флуоресценция тушится при связывании. Максимум его Флуоресценции лежит в области 500 нм. Однако длинно волновая Флуоресценция 9-аминоакриди на на границе инфракрасной области ( 700 нм) нигде.не описана. Такая длинноволновая флуоресценция была обнаружена авторами в экспериментах 30 с мицелием грибов. Предположительно она связана с образованием эксимерных комплексов красителя на поверхности мицелия,и, такйм образом, должна зависеть от топологии этой по верхности. Поскольку сама эта топология всегда является важным систематическим признаком, то длинноволновая Флуоресценция может быть использована для идентиФикации родовой, 40 видовой или штаммовой принадлежности грибов. Кроме того, использование флуоресценции около 700 нм существен. но повышает селективность определе.ний, поскольку измерение флуоресценции ведется в области, находящейся. достаточно далеко от флуоресценции водорастворимой формы 9-аминоакриди- на, от флуоресценции большинства при 69 месей и от диапазона видимого света,Для оценки целесообразно использовать отношение интенсивностей длин".новолновой и флуоресценции в основном максимуме, так как увеличениесвязывания и, следовательно, интенсивности длинноволновой флуоресценции одновременно, уменьшает флуоресценцию в основном максимуме. Эторасширяет динамический диапазоноценок. Основной максимум содержитнесколько гауссовских составляющих430, 461, 530,нм. Численный расчетпоказывает, что разрешение, т.е. раэделение отдельных штаммов, получается наилучшим при использовании максимума= 430 нм. Дпя оценки спектра Флуоресценции 9-аминоакридина в водном растворе используются максимумпри 4 щ = 430 нм и полуширина нормированного спектра 9 п .Для оценки спектра флуоресценции 9-аминоакридина в суспейзии мицелия Аврег 8 ь 11 цз пх 8 ег, штамм В используется отношение интенсивностей, длинноволновой Флуоресценции687,5 нм и основного максимума Ъ щ 430 нм. Реализация предлагаемого способа выполняется следующим образом.В оптически однородную гомогенизированную суспензию мицелия грибов в физиологическом растворе, тестированную по оптической плотности, до- бавляют 9-аминоакридин до получения конечной концентрации 1-3 мкМ, после чего посредством флуориметра определяют интенсивности флуоресценции при Ъ = 687,5 нм и= 430 нм. Оба значения Ъ должны быть выставлены с абсолютной погрешностью й 2,5 нм. Далее составляется отношение обеих интенсивностей, которое использует" ся для оценки жизнеспособности и возможной идентификации грибов. Составитель А.разяповРедактор Л.Зайцева ТехредМ.Ходанич, Корректор М.Максимишинец Заказ 7276/39 Тираж 788 ПодписноеВНИИПИ Государственногокоютета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5ЬПроизводственно-полиграфическое предприятие, г. ужгород, ул. Провктная, 4