Способ прижизненного определения клеток и клеточных органоидов

Номер патента: 1139997

Авторы: Векслер, Литинская, Оглоблина, Хруст, Эйдус

ZIP архив

Текст

1139997 Составитель М. Мирзаев Редактор Н. Горват ТехредС,Легеза Корректор А. Обручар, Тираж 897 Подписное БНКП 1 И Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д, 4/5Заказ 254/32 Филиал ПЛП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Изобретение относится к измеритетельной технике и может быть использовано в биологии и медицине для измерения рН в клетках и их органоидах. 5Известен способ определения рНв клетках, основанный на использовании специальных микроэлектродов,ввекввык в клетку 1Недостатками известного способа 10являются нарушение целостности клеточной мембраны при введении микроэлектродов, невозможность точнойлокализации положения микроэлектродов, что не позволяет измерять рН 15внутри отдельных органоидов.Известен также способ определениярН, основанный на использовании витального индикаторного красителянейтрального красного (НК) и последующей фотометрии окрашенных .хлоропластов.в длине волны 530 нм Ц.Недостатком этого способа является низкая точность определения,так как результаты фотометрии отражают не только изменение рН, но иизменение концентрации красителя висследуемых органоидах.Цель изобретения - повышение точкости огределения рН в единичнойклетке или ее органоиде,Поставленная цель достигаетсятем, что согласно способу прижизненного определения рН клеток и кле.точных органоидов включающему приу35жизненное окрашивание клеток индикаторным красителем нейтральным красным и их последующее фотометрирование, клеткй фотометрируют в двухдлинах волн, одна из которых соответствует изобестической точке спек 1ра поглощения, а другая находится вобласти максимума спектра поглощениянейтральной формы красителя, по состк ношению оптических плотностей определяют долю нейтральной формы красителя, по которой судят о величине рН.П р и м е р 1. Препарат й объектами, например .фибробластами китайского хомячка в культуре, окрашива" ют прижизненно 0,01% НК, затем устанявливают на столик микрофотометра МЦФБ, который позволяет измерять оптические плотности в длинах волн 470 и 450 нм. Фотометрический зонд совмещают с центром одной из лизосом, аккумулирующих НК, Далее измеряют оптические плотности в указанных длинах вол 11, берут отноше ние оптических плотностей и по калибровочной кривой находят соответствующии рНу рявныи 5,2,,П р и м е р 2. Препарат с теми же объектами окрашивают прижизненно 0,1% НК, устанавливают на столик микрофотометра МЦФВи фотометриру. ют в тех же длинах волн совмещая фотометрический зонд с участком цитоплазмы одной из клеток. По соотно шению измеренных оптических плотностей и по калибровочной кривой находят рН 6,8..П р и м е р 3. Препарят с объектами, например эмбриональными клетками почки свиньи в культуре, окрашивают прижизненно 0,01% НК, затеи устанавливают на столик микрофотометра 1 ЩФВи.многократно фотометрируют в тех же длинах волн, совмещая фотометрический зонд с центром одной из лизосом. При каждом измерении по отношению измеренных оптических плотностей и по калибровочной кривой находят рН и прослеживают динамику этой величины в отдельной лизосоме; рп изменяется от 4,5 до б.8.

Смотреть

Заявка

3288537, 17.03.1981

МГУ ИМ. М. В. ЛОМОНОСОВА

ЛИТИНСКАЯ ЛЮДМИЛА ЛЬВОВНА, ОГЛОБЛИНА ТАТЬЯНА АЛЕКСАНДРОВНА, ВЕКСЛЕР АКИВО МЕНДЕЛЕВИЧ, ХРУСТ ЮРИЙ РОМАНОВИЧ, ЭЙДУС ЛАЗАРЬ ХАЙМОВИЧ

МПК / Метки

МПК: G01N 3/06

Метки: клеток, клеточных, органоидов, прижизненного

Опубликовано: 15.02.1985

Код ссылки

<a href="https://patents.su/2-1139997-sposob-prizhiznennogo-opredeleniya-kletok-i-kletochnykh-organoidov.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ прижизненного определения клеток и клеточных органоидов</a>

Похожие патенты