Способ усиления роста животных и птиц

(3) 20675/76 (33) Великобритания Гоеударственный коинтет,СССР по делан нзобретеннй н открытнВ(72) Авторы изобретении ИностранцыДэвид Хау Дэвис, Ричард Дисон Эрнилли Джоффри Лайтфут Флойд Норрис(Великобритания) Иностранная ФирмаИмпериал Кемикал Индастриз Лимитед(54) СПОСОБ УСИЛЕНИЯ РОСТА ЖИВОТНЫХ И ПТИЦ Изобретение может быть использо- вано н животноводстве и птицеводстве при выращивании на мясо продуктивного скота и птицы.Известны способы усиления роста животно и птиц путем использования различных препаратов антибиотиков, например антибиотика Хи его Физиологически активной соли (1) или производных спирамицина 2. Препараты антибиотиков вводят в корм в смеси с жидкими или твердыми кормовыми носителями, равномерно распределяя их в массе корма или пойле.Однако препараты антибиотиков еще 15 сравнительно дороги, а в некоторых случаях не всегда эффективны что вызывает необходимость дальнейшего поиска эффективных средств усиления роста и продуктивности продуктивного но скота и птицы.Цель изобретения состоит в повышении эФФективности способа усиления роста домашних животных и птиц. Это достигается тем, что в качестве препарата антибиотика используют смесь ми 1 рамицинон продуцируемую ЗСгер 1 ощусея р 11 ояця К С 1 В 11238,илк, ,Иагний хелат митрамицина А формулы Ж)(С Н О ) Мд 2 Н О или хромомицин вколичестве 0,00025-0,005 от несажидкого или твердого кормового носителя.Указанные препараты антибиотиковизвестны и применяются в медицинскойпрактике и представляют собой соединения иэ группы золотой кислоты (3),(4),Соедин"ния из группы золотой кис".лоты орально вводят животным н, ка"честве дополнения к их питанию, т.е.в смеси с твердой пищей, растворенными в питьевой воде или для молодыхживотных, например поросят или телят,растворенными н цельном или снятоммолоке. Целесообразно вводить соединение в смеси с обычной питательносбалансированной твердой пищей, такой дополнительный продукт питания,должен содержать от 0,0001 вес.Ъ,питаться такой дополнительной пищейв течение всего периода их роста илив течение лишь части их периода рос"та, например на ранней стадии, и/илив течение периода, предшествующегоубою. Достигаемоен практике увеличение скорости роста позволяет живот.ным достигать рыночного веса илиубойного веса эа более короткий период времени,При оптимальных уровнях ускорения роста не наблюдалось никакоготоксичного воздействия на животных .Предпочтительными соединениямигруппы золотой кислоты для использования в предлагаемом способе являются натриевые и магниевые соли,хелатыили комплексы митрамицина А и смесьмитрамицинов.Состав для использования в предлагаемом способе содержит соединениегруппы золотой кислоты вместе с жидким или твердым съедобным нетоксичным раэбавителем или носителем. Приемлемым жидким разбавителем или носителем является, например, питьеваявода, цельное молоко или снятое молоко.Пригодным твердым нетоксичным раэбавителем или носителем может быть,например, питательно сбалансированное питание для животных (обычнаястандартная пища бройлерных цыплятиз размолотого зерна и зерновых побочных продуктов) и животный протеин,дополненный витаминами и минералами,стандартный корм для откорма свинейили другие обычные продукты кормления. Инертным твердым разбавителемили носителем может быть веществобез питательной ценности, напримеркаолин, тальк, карбонат кальция, наполнительная земля, аттапульгитоваяглина, размолотые оболочки устрицили молотая известь; кроме того этоможет быть крахмал и лактоза,Предлагаемый состав может иметьвид дополнительного продукта питания,пригодного для непосредственного питания животных, и н этом случае он впредпочтительном варианте будет содержать 0,0001-0,005% нес,Ъ соединения из группы золотой кислоты в смеси с обычным питательно сбалансированным продуктом питания животных.Он может применяться также в видеконцентрированной примеси для разбавления с обычной пищей животных с получением дополнительного продукта питания, пригодного для непосредственного питания животных. В этом случаетакая примесь н предпочтительном варианте будет содержать 0,005-50 вес,Ъсоединения иэ группы золотой кислотыв смеси либо с питательно сбалансированной пищей животных, инертнымтвердым раэбавителем, например молотой известью, либо с крахмалом илилактоэой. Такая примесь может разбавляться обычным способом, предпочтительно последовательно в дне или более ступеней для обеспечения равномерного перемешивания.Предусматривается способ получения смеси митрамицинов, включающийвыращинание митрамицин-производящегс.штанина Б 1 герйовусез р 11 овцз в водной питательной среде, содержащей источники ассимилируемого углерода и азота с меремешиванием, в аэробных условиях при температуре 15-45 С, Фильтрование культуры и изоляцию кислойфракции из Фильтрата обычными способами. Пригодным митрамицин-производящимштаммом Б. р 11 овцн является штамм,хранящийся в Национальной коллекции(О промышленных бактерий Министерствасельского хозяйства, рыбоводства ипродуктов питания. По данным исследовательской станции Торри, 135 ЭббейРоад, Абердин АВЭ 8 ДС, Шотландия. подобозначением Ы С 1 В 11238, этот штаммБ. р 11 озцз имеет следующее описакие:А. Морфология (Дрожжевой солодовый агар, 25 С, 8 дней).Воздушный мицеллий проявляет проостое разнетвлекие. Спороные цепидлинные (более 10 спор) в спиралях(зр 1 га). Поверхность спор (н электронном микроскопе) ворсистая.В. Вид поросли после 12 дней при25 оС ка следующих питательных средах:Дрожжевой солодоный агар,Типичная стрептомицетная колония.Воздушный мицеллий нначале белый,становящийся по мере протекания спорилирования серым (серые ряды), Обра 30 зонакие спор обильное, Основание мицеллия коричневое. Диффукдирующийпигмент отсутствует.Агар солей крахмала.Воздушный мицеллий палево-серый,35 спорилиронание слабое. Основание мицеллия цвета буйволовой кожи. Диффун.дирующий пигмент отсутствует,Глюкозо-аспарагиновый агар,Воздушный мицеллий серый, спорилирование обильное. Основание мицеллия серое. Диффундирующий пигмент от.сутствует.Глицерол-аспарагиновый агар,Воздушный мицеллий серый, спорилирование обильное, Основание мицеллияцвета буйволовой кожи. Диффундирующийпигмент отсутствует.Агар из овсянки.Воздушный мицеллий отсутствует.Основание мицеллия белое. Диффукди 5 О рующий пигмент отсутствует.Сахароэо-нитратный агар.Воздушный мицеллий палево-серый.Спорилирование хорошее. Оскованиемицеллия цвета серой буйволовой кожи.55 Диффундирующий пигмент отсутствует.Тирозиновый агар.Воздушный мицеллий палево-серый.Спорилирование хорошее, Основаниемицеллия серое, Диффукдирукхций пигмент отсутстнует.Питательный агар,Воздушный мицеллий белый. Небольшое спорилировакие. Основание мицеллия цвета буйволовой кожи, становящееся почти черным. Лиффуклкрующийпигмент отсутствует.Железо-пептоновый агар.Воздушный мицеллий серо-белый. Спорилирование плохое. Основание мицеллия коричневое, становящееся черным. Слегка диффундирующий коричневый пигмент (Меланин +, но слабый).Агар иэ меланоидного пигмента.Воздушный мицеллий отсутствует. Основание мицеллия темно-коричневое. Слабый диффундирующий коричневый пигмент (Меланин +, но слабый). 10С. Физиологические свойСтва.Использование в качестве единственного источника углерода (в агаре Придхам/Готтлиба):глюкозы +15ксилозы +араб инозы +рамнозы +фрук тоэы +галак тозы +раффинозы20маннита +инозита +салицина + (очень слабый)сахарозы Ф (слабая)Гидролиз: 2желатина +крахмала +казеина (молочный агар +Действ не в лакмус ов ом молоке,Пептонизация и образование кисло ты, Отверждения не происходит.Температура роска.Прорастание на дрожжевом солодовом агаре после 14 дней при температуре ( С): 3520 25 30 37 45 55Приемлемым источником ассиьЬлируемого углерода служит, например, мно гоатомный спирт, например глицерол, глюкоза, ксилоза, арабиноза, рамноза, фруктоза, галактоза, маннит или инозит, а предпочтительным источником углерода является глицерол. Глицерол обычно вводят в среду в количестве 2-5 (вес./об.) . Приемлемым источником ассимилируемога азота является, например, пептон, который обычно вводят в количестве 0,5-2 (нес./об.) .Питательная среда дополнительно 5 О содержит небольшие количества других элементов, например фосфор, в виде, например, первичного кислого ортофосфата калия или кислого диаммонийфосфата; магний в виде, например, суль- у фата магния или карбоната магния; серу в виде, например, серной соли сер- ной кислоты; калий в виде хлорида калия, карбоната калия или первичного кислого ортофосфата калия; и следы солей таких элементов, как медь, цинк, железо, марганец и молибден.Пригодная для ферментирования температура 32 оС, а окисленный продукт может экстрагироваться из фильтрата культуры обычными способами, напри 00240,02 0,0240,02 мер, путем эксграгировання иэ Фильтрата несмешивающимся с водой органическим растворителем при нейтральном или щелочном значении рН для удаления нежелательных нейтральных и щелочных продуктов, окисления водной фазы и экстракции целевого окисленного продукта несмешивающимся с водой органическим растворителем,Используют улучшенный способочистки окисленного продукта, включающий превращение его в хелат магния или его соль путем контактирования раствора окисленного прсдукта в нес;,ешинающемся с водой органическом растворителе с силикатом магния.П р и м е р 1, Я. р 11 озцз ХСВ 11238 выращивают как наклонную культуру на четырех уклонах в среде триптондрожжевого агара, в медицинских плоскостях, при 32 С н течение 7 дней. Мицеллий и споры из каждого уклона смывают стерильной водой (100 мл) в днухлитроные склянки, содержащие 1 л среды следующего соста. ва, % (нес./об.):Глицерол 5Пептон-Дифко 0,5Карбонат кальция 0 1Первичный кислыйортофосфат калияСульфат магния7 Н ОКонцентрат микроэлементов 0,1Деионизиронаннаявода до 100Состав концентрата микроэлементов, Ъ (нес./об) зСульфат железа 7 Н О 0,1 Сульфат меди5 Н О 0,015 Сульфат цинка7 Й О0,1Сульфат марганца4 Н О 0,01 Молибдат калия 0,01 Деионизиронанная вода до 100.Соли добавляют к части деионизиронанной воды, а смесь окисляют достаточным объемом концентрированной соляной кислоты с деионизированной водой. За= и раствор стерилизуют н автоклане при давлении 1,05 атм в течение 0,5 ч. Приготовленные таким образом четыре двухлитроные склянки встряхивают при 32 ОС н течение 2 дней на круговом встряхинателе., Затем содержимое четырех склянок объединяют для прививки Ферментера, содержащего 80 л среды следующего состава, % (вес,/об.):Глицерол 5,0 Карбонат кальцияПервичный кислыйортофосфат калияСульфат магния 7 Н ОКонцентрат микроэлементов (как описано выше) 0,1 Пептон-Дифко 0,5 Деионизированная вода до 100 Затем раствор стерилиэуют н анто- клаве при давлении 0,05 атм н течение 0,5 ч. Содержание фермектера перемешивают при 32 оС в течекие 45 ч,используя мешалку с шестью плоскимилопастями, вращающимися со скоростью260 об/мин, и аэрируют со скоростью40 л в 1 мин. Для подавления вспенивания добавляют полипропиленгликоль, Ферментационный бульон профильтровывают и фильтрат (рН 7, 3) экстрагируют этилацетатом (25 л), который затем сбра- (О сывают. Знамение рН водной фазы доводят до 3,5 с помощью 5 н, соляной кислоты и экстрагируют этилацетатом (2 х 25 л) . Этилацетатные экстракты объединяют, высушивают сульфатом натрия и отфильтровывают, а фильтрат концентрируют при пониженном давлении до объема 1 л. Целевой продукт из вышеупомянутого концентрата может быть получен по следующим методикам.Этилацетатный концентрат промывают разбавленным раствором бикарбоната натрия (500 мл воды, достаточно насьпценный раствор бикарбоката натрия с получением рН между 9 и 10). Водную Фазу отделяют и промывают хлороформом (1 л), который сбрасывают. Затем рН водной фазы доводят до 3,5 с помощью добавки разбавленной соляной кислоты, промывают диэтиловым эфиром (2 х 1 л), который сбрасывают и экстрагируют этиО лацетатом (2 х 1 л)Этилацетаткые экстракты объединяют, высушиваютсульфатом натрия и отфильтровывают;Фильтрат выпаривают досуха, а остаток растирают в порошок с диэтиловым эфиром с получением сырой смеси митрамицинов в виде желто-коричневого твердого вещества.Этилацетатный концентрат выпаривают досуха до сырой смолы, Смолу (11 г) растворяют в метаноле и раствор адсорбируют ка кизельгуре (около 2 г) .Растворитель выпаривают и сухой материал помещают на верх колонны с кизельгуром (40 х 6,5 см), заполненной хлороформом. Колонну элюируют хлороформом и собирают 15 мл фракции. Эти Фракции анализируют тонкослойной хроматографией на силикагелевой пласти не Мезс 1 254, элюируемой объемной смесью хлороформ (метанол) 98-ная 50 муравьиная кислота 84:8:8 по объему на присутствие целевых митрамициновых продуктов и фракции 50-250, содержащие этот продукт, объединяют и выпаривают досуха с получением сырой смеси митрамицинов в виде желто-коричневого твердого вещества (1,9 г) .П р и м е р 2. Сырую смесь митрамицинов (3,4 г ) примера 1 в водном растворе метанола помещают на верх предварительно пропитанной поперечно О связанным декстраном ЯерЬадех Сколонки (28 х 5 см) и колонку элюируют водой. Митрамицин пропускают книзу колонки в виде зеленовато-жел того, быстро движущегося слоя и со- б 5 бирают соответствующую фракцию элюакта.А). Элюант высушен при температуре киже 0 С с получением смешанных0митрамицинов в виде желтого диофилького твердого вещества (2,5 г) . В). Элюант доводят до рН 3,5 спомощью разбавленной соляной кислотыи экстрагируют этилацетатом, а экстракт высушивают и выпаривают досухас получением смешанных митрамициновв виде желтого. порошка (2,3 г),т. пл. 169-172 оС .Полученные таким образом смешанные митрамицины конвертируют до основного компонента хелата магния следующим образом;Флорисил- торговое названиесиликата магния. Флорисил, (6 г)добавляют к раствору смешанных митрамицинов (400 мг) в этилацетате, аэтилацетат затем выпаривают. Флорисил с адсорбированными смешанными митрамицинами помещают на верх колонки (400 см х 2 см), заполненнойфлорисилом, и колонку последовательно элюируют этилацетатом,5 (об/об) метанолом в этилацетате,10 (об/об) метанолом в этилацетате,15 (об/об) метанолом в этилацетате.Фракции 111 и 1 Ч объединяют, растворители выпаривают, а остаток кристаллизуют из метанола/этилаце"атас получением хелата магния в видежелтых кристаллов т.пл. 210-217 ОС(разложение), а) = + 85 О(с : 0,5в метаноле) .Найдено,: С 56,0; Н 7,2.Вычислено для (С 5 НОу 4 ) МЯ"2 Н О, С 56,0; Н 7,0.П р и м е р 3, Раствор из сыройсмеси митрамицинов (из примера 1)250 мг растворяют в минимальном количестве метанола и помещают на верхколонки из силикагеля (25 х 2 см) сполучением в качестве кубовой фазыраствора из смеси равных объемовхлороформа, метанола и гидрата окисиаммония. Эту же кубовую фазу используют для элюировакия колбнки и собирают основную желтую фракцию. Растворитель выпаривают с получением желтого порошка, который растворяют в воде (10 мл), рН раствора доводят до3,5 с использованием разбавленной соляной кислоты и экстрагируют этилацетатом (2 х 15 мл). Этилацетатные экстракты выпаривают досуха с получениемсмешанчых митрамицинов в виде желтого порошка (100 мг), т,пл. 169-172 фС.П р и м е р 4. Группы из 20 выбранных цыплят в возрасте 1 дня помещают в небольшие загоны с настилом,заполненные деревянной стружкой иоборудованные автоматическими роликами. В 16 таких загонах птиц в течение6 дней кормят питательно сбалансированным контрольным кормом, а птиц вдругих загонах (четыре загона на раз 730274рабатываемую пищу) кормят в течениетого же периода времени этим же основным кормом, к которому добавляютукаэанный вес смешанных митрамицинов,полученных по примеру 2 или 3, илиизвестный ускоритель роста цыплят,пенициллин или нитровин, в качествеположительного контроля. В конце испытательного периода определяют средний вес каждой птицы в контрольнойгруппе и в каждой исследуемой группеи вычисляют процентное увеличениевеса для каждой исследуемой группыпо сравнению с контрольной группой.Получают результаты, приведенные втабл, 1,П р и и е р 5. При дополнительном испытании повторяют методику,укаэанную в примере 4, В этом случаевес выражен как средний общий весзагона из 20 птиц.В табл. 2 приведены результаты испытаний.П р и м е р б. При дальнейшемисследовании роста повторяют методи-ку примера 5, но в этом случае всекорма были гранулированными. Результаты исследования приведены в табл.3, 25П р и м е р 7. Методику примера 4повтрряют используя митрамицины, полученные культивированием В.агд 111 асецз А.Т.С,С, 12956 известным способом, Результаты исследования приведены в табл. 4.П р и м е р 8. Методику примера 4повторяют, используя указанный в конце примера 2 хелат магния. Результаты даны в табл. 5, 35П р и м е р 9. Описываемую в примере 4 методику повторяют с использованием магний хелата митрамицина А,полученного известным способом приферментации Я. ащ 111 асецз 40А.Т.С.С. 1295 б. Получают результаты,приведенные в табл. б. П р и м е р 10, Описываемую впримере 4 методику повторяют, используя 4 загона с 30 петушками в каждомдля каждого рецепта корма и продливпродолжительность опыта до 4 недель,Получают результаты, приведенные втабл, 750П р и м е р 11. Семьдесят два поросенка весом примерно 20 кг раз.бивают на 8 соответствующих исследуемых групп по 9 поросят по полу и живому весу. Каждую исследуемую группу сажают на одну конкретную дие. ту и каждое животное в каждой группе кормят индивидуально соответствукщей пищей, точно взвешенной в соответствии с нормой. ежедневный прирост жи" 60 вого веса в граммах (ПЬЕС) и относительное использование корма (РСВ) отношение (в кг) потребленного кОрма на 1 кг прироста живого веса определяют для каждой группы в конце 65 девятинедельного испытательного периода. Получают результаты, приведенные в табл. 8.П р и м е р 12, Описываемую в примере 4 методику повторяют, используя хромомицин Аз, полученный от Такеда Кэмикэл Ийдастриес Лимитед, Осака, Япония, взамен смешанных митрамицинов, Получают результаты, приведенные в табл. 9П р и м е р 13. Кристаллический магний хелат из примера 2 (4,2 г) растворяют в воде (100 ил) и рП доно. дят до 3,0, добавляя 0,1 н, соляную кислоту, Затем окисленный раствор экстрагируют этилацетатом (2.х 100 мл) экстракт высушивают (Ба 804) и растворитель выпаривают с получением желтой смолы. После растирания в порошок с эфиром смола дает желтый порошок (2,5 г), который кристаллизуют из этилацетата и высушивают при 100 оС под высоким вакуумом для получения материала с т.пл. 173-б С, который по ИК и ЯМР спектроскопии и жидкостной хроматографии под высоким давлением (Н 1 РС) был идентичен с митрамицином А.П р и м е р 14, 1 л;ферментационного бульона, полученного в примере 1, встряхивают с 20-ным раствором хлорида натрия, рН доводят до 3,5 и смесь экстрагируют метилэтилкетоном (2 х 300 мл) . Экстракты обьединяют и высушивают, концентрируют до 10 мл и обратно экстрагируют насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (2 мл) . Затем водную фазу обрабатывают метанолом (5 мл) с получением мелкого осадка натриевой соли митрамицина (30 мг) .Пригодные для разбавления с пищей для животных примеси могут быть получены путем введения 1, 5, 10, 25 или 50 г смешанных митрамицинов в стандартный корм бройлерных цыплят, содержащий молотый маис и рыбную муку с добавками лизина, метионина, витаминов и минералов с доведением конечного веса до 500 Г. Аналогичным образом можно получить и другие смеси, заменив смешанные митрамицины любым другим соединением иэ группы золотой кислоты. Пригодная для непосредственного кормления домашней птицы пища может быть получена путем тщательного перемешивания 500 г предварительно приготовленной смеси, как описано в примере 5, с 4,5 кг стандартного корма бройлерных цыплят и затем равномерного перемешивания полученной таким образом смеси с 995 кг стандартного корма бройлерных цыплят для получения продукта для кормления птицы, содержащего 1,5, 10 25 или 50 г соединения группы аолотой кислоты на 1 т в зависимости от концентрации соединения в предварительно приготовленной смеси."ррм 10фпри уровне р( 0,001. Основной корм - контрольОсновной корм+пенициллин 25 ррмОсновной корм+нитровин 10 ррм Основной корм+смешанныемитрамицины 25 ррм Основной кормсмешанныемитромицины 10 ррм Основной корм+смешанныемитрамицины 5 ррм Основной корм+смешанныемитрамицины 2,5 ррм Основной корм - контроль Основной корм+смешмитрамицины 25 ррОсновной корм+смешмитрамицины 10 рр Основной корм+смешанны митрамицины 5 ррм Основной корм+сммитрамицины 2, 5 38,15 42,57 42,99 11,6 12,7 18,2511,6730274 14 Таблица 4 Корм 40,1 47,6 45,2 18,8 12,9 46,2 15,9 Таблица 5 Таблица б о 41,47,овной ко 16.110.7617.9 Х Основной 5,67 0 новной корм+н ви 48, 69"46,3843,75 Ос нов ат 5 ат 2 Основ но орм+магний х 0,01 и Т ода наицуеса 9 лтровин 10 р сновной Основн митрац корм-с 5 ррм ные 0,789 ущественный при уровне р ( 0,01 щественный при уровне р 4 0,00 Основной корм - контрольОсновной корм+пенициллин 25 ррмОсновной корм+нитровин 10 ррм Основной корм+смешанныемитрамицины 25 ррм Основной корм - контрольОсновной корм+пенициллин 25 ррмОсновной корм+нитровин 10 ррмОсновной корм магний хелат 10 ррмОсновной корм магний хелат 5 ррмОсновной корм магний хелат 2,5 ррм рм - к онтрольрм+пенициллин 25 рр корм+магний хелат 10 ррм Ос нов ной к орм+м агний х новной корм - контрол Основной корм-смешаннымитрамицины 10 ррм 41,30 47,95 45,67 49,65 47,97 43,65 16,1 10,6 20,2 16,2 1,876 1,800 1,78216 730274 Корм с низким содержанием медиОсновной корм - контрольОсновной корм+нитровин 10 ррмОсновной корм+карбадокс 20 ррм 7,0 381 30,6 2,292 Основной корм+смешаннмитрамицины 25 ррм 40,2 рм с высоким содержанием меди 75,2 349 рм - контро овно 3 579,2 672,7 Основной Основной+смешанны5 ррм 45 612, 8- при уровне р0,05 - при уровне р0,01 Т а б а ор Основной корм 41,46 4673 нтроль нициллин 25 р тровин 100 рр сновной корм+и сновной корм+и 45,Основной кормА 10 ррм момици н 43,6844,51 Основной кормА 5 ррм момицин 7 р 001уро ов мула изобретени миц остас жиосито т ка лико 1972 бр (п 015 ЦНИИПИ Эакаэ 1333 филиал ППП Патент Способ усиления птиц путем введения твердыми кормовыми ратов антибиотиков, щ и й с я тем, что ния эФФективности с ве препарата антиби смесь митрамицинов, Ясгер 1 ощусев р 11 оэц магний хелат митрам (СБ Н уа 0242 Мд2 м+нитровин 10 ррми+карбадокс 20 ррм животных идкими или 5 елями препал и ч а юс целью повьпаеособа, в качесттика используют продуцируемую ИС 1 В 11238, или цина А формулы О, или хромоТаблица 8 ин в количестве 0,00025-0,005носителя.Источники информации,нятые.во внимание при эксперти1 . Патент СССР 9 404186,А 23 К 1/17, 1971.2, Акцептованная эаян Ветанин 9 1294785, кл. С 2 Аототип) .3. Патент США М 35 70,424"119, 1970.4, Патент США М 3646194,424-119, 1972,Тираж 569 Подписно ул. Проектная, 4