Способ выделения дигидрокверцетина

97 С 1 ОБРЕТ ИСАНИ К ПАТЕНТУ Комитет Российской Федерации по патентам и товарным знакам(71) Отдел химии древесины Иркутского институтаорганической химии СО РАН(73) Отдел химии древесины Иркутского институтаорганической химии СО РАН(54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ДИГИДРОКВЕРЦЕТИНА(57) Изобретение относится к медицине, а именно кхимико-фармацевтической промышленности и касается способа выделения дигидрокверцетина(ДКВ) из опилок древесины лиственницы Целью изобетения является сокращение времени способа и повышение степени очистки ДКВ Цепь достигается тем, что в охлажденный экстракт, полученный путем экстракции опилок древесины лиственницы водой при нагревании, вносят полиамидный порошок при соотношении 1: 10, смесь перемешивают в течение 2 ч, отфильтрованный полиамидлый порошок высушивают, целевой продукт экстрагируют этилацетатом и кристаппизуют его из горячей воды. Положительный эффект заключается в сокращении времени способа с 26 ч по прототипу до 11,4 ч по заявляемому способу и в повышении степени очистки целевого продукта с 940 ь до 97% 2 илИзобретение относится к медицине, аименно к химико-фармацевтической промышленности, и касается способа выделения дигидрокверцетина (ДКВ),ДКВ обладает широким спектром биологической активности: проявляет противовоспалительное и радиозацитное действие(журнал "Фармакология и токсикология". М5, 1975, с. 607).Известен способ выделения ДКВ иэ коры Дугласовой пихты путем обработки водного экстракта коры сульфитом щелочныхметаллов (Патент США М 2744919). Однакоприменение сульфитных реагентов в данном процессе нежелательно из-за их акисляющей способности, ДКВ в этом случае взначительном количестве переходит в кверцетин, Кроме того значительные различия вхимическом составе водорастворимых экстрактивных веществ коры Дугласовой пихты 20и древесины лиственницы не позволяют использовать этот способ как аналог для выделения ДКВ из водных экстрактовпоследней.Наиболее близким к заявляемому является способ выделения ДКВ путем экстракции опилок древесины лиственницы водойпри нагревании, охлаждения экстракта,фильтрования, хроматографирования на колонке с полиамидом, элюирования водно- З 0ацетоновой смесью и упаривания.Недостатками известного способа является использование хроматографическогопроцесса выделения ДКВ, требующего регулярного аналитического контроля за ходом З 5разделения, что затрудняет осуществлениеизвестного способа в промышленном масштабе. Применение флуориметрического метода определения чистоты выделяемогоДКВ в прототипе не позволяет избирательно определять содержание целевого продукта, Выделяемый по данному способуДКВ требует дополнительной очистки.Целью изобретения является сокращение времени способа и повышение степени 45очистки ДКВ.Поставленная цель достигается тем, чтоводную экстракцию древесины лиственницы ведут при 98 - 100 С с последующим выделением ДКВ путем перемешивания 50водного экстракта с полиамидным порошком в адсорбере с динамическим режимоми последующей промывкой полиамида этилацетатом. избирательно растворяющимДКВ и не смешивающимся с водой, 55Кристаллизация выделенного таким образом сырого ДКВ из горячей воды позволяет получить продукт с содержанием основного вещества 90 - 96. При этом контроля степени чистоты ДКВ используется метод ВЭЖХ, позволяющий количественно оценить содержание ДКВ и каждой из возможных примесей,Для увеличения эффективности процесса предложена обработка водного экстракта поливмидным порошком в динамическом режиме и последующее вымывание ДКВ с высушенного полиамида этилацетатом-растворителем, не смешивающимся с водой. Введение этой стадии предотвращает нежелательные явления, замедляющие процесс: уплотнение сорбента, "заиливание" и т.п возникающие при пропускании водного экстракта через слой полиамида в колонке,Кроме того применение этилацетата эффективнее по сравнению с использованием более полярных растворителей (ацетон, спирты, например, изопропиловый спирт), приводящих к получению продукта с более низким содержанием основного вещества (60 - 65),Предлагаемый способ получения ДКВ обладает следующими достоинствами:способ базируется на легкодоступном сырье, В качестве сырья можно использовать отходы древесины лиственницы, накапливающиеся в больших количествах на целлюлозных и деревообрабатывающих предприятиях;технологический процесс получения ДКВ не содержит химических превращений. Выделяемый ДКВ является нативным природным соединением, сохраняющим транс- конфигурацию центра хиральности и оптическую активностьа)о =+22,45 О);предлагаемый способ легко можно реализовать в промышленном масштабе на стандартном оборудовании;применение водонесмешивающегося растворителя, избирательно растворяющего флавоноиды, в частности зтилацетат, позволяет получить продукт высокой степени чистотыП р и м е р 1, 200 г опилок древесины лиственницы заливают 2 л горячей воды и кипятят с обратным холодильником в течение 1 ч, Горячий раствор отфильтровывают от опилок и получают водный экстракт (1,67 л) с концентрацией ДКВ 0,065 , что составляет 1,085 г.В охлажденный водный экстракт вносят 11 г полиамидного порошка (соотношение ДКВ и порошка 1:10), Полученную смесь интенсивно перемешивают в течение 2 ч, после чего полиамидный порошок отфильтровывают и высушивают на воздухе.Сухой полиамидный порошок заливают (220 мл) и выдерживают смесь при перемешивании втечение 30 мин 3 л 1 м полиамид 200079750 ный порошок отфильтровывают и этилацетатный фильтрат упэривают, Получают 1,12 г сырого продукта, содержащего 82 О ДКВ, После кристаллизации сырого продукта из горячей воды (80 С) получают 0,95 г ДКВ с чистотой 91. Выход ДКВ 87,2 от извлеченного из древесины.П р и м е р 2. В условиях примера 1 из 250 г опилок и 2,5 л горячей воды получили 2,1 л водного экстракта с концентрацией ДКВ 0,068, Экстракт перемешивали с 13,8 г полиамидного порошка. Смыв ДКВ с высушенного полиамида провели 276 мл этилацетата, Получили 1,51 г сырого продукта, содержащего 81,2 ДКВ, После двухкратной перекристаллиэации из горячей воды получили 1,24 г ДКВ с чистотой 94,5%, Выход ДКВ 86,6 оот извлеченного из древесины.Количественный анализ зэ содержанием ДКВ в выделяемых продуктах осуществляли методом ВЭЖХ на приборе "Милихром" с УВ-детектором, рабочая длина волны 290 нм, колонка 60 2,1 мм, сорбент Сепарон С 1 в, подвижная фаза - ацетонитрил - 2 -ная уксусная кислота (30:70 об), Относительная ошибка определения при уровне вероятности 0,95 не превышает 3,Как видно из примера 1 оптимальное время контакта при перемешивании составляет 2 ч. Оно установлено путем контроля эа наличием в жидкой фазе, т.е. в экстракте, смешиваемом с полиамидным порошком, флавоноидных соединений с помощью экспресс-пробы: капля экстракта наносится на хроматогрэфическую бумагу, пятно высушивается и обрабатывается 1 -ным спиртовым раствором АСз и после подсушиоания просматривается в Уф-свете. По мере снижения концентрации флавоноидных соединений на бумагу в одно пятно производят нанесение нескольких капель. Отсутствие ярко-желтого свечения соответствует полной сорбции (полному поглощению) флавоноидных соединений полиамидным порошком.Оптимальное соотношение экстракта и полиамидного порошка составляет 1:10. Описанным путем устанавливалось количество полиамидного порошка, необходимого для полного поглощения флаооноидных соединений,5 10 15 20 25 30 35 40 45 В прототипе соотношение экстракта иполиамидного порошка составляет 1:20, чеми обьясняется больший расход полиамида.При проведении процесса под словами"интенсивное перемешивание" подразумевается перемешивание с равномерным распределением поливмидного порошка повсему обьему экстракта.Поскольку ранее использованный флуориметрический метод не позволяет отличить примесь к ДКВ родственногофлавоноидного соединения - дигидрокемпферола (аромадендрина) иэ-за их неодинаковых спектральных характеристик, топриводимая в прототипе степень чистотыДКВ завышена. Как видно из хроматограмм,полученных современным методом ВЭЖХ -получаемый в заявляемом способе ДКВимеет спепень чистоты 97,27 ь с примесью2,8 одигидрокемпферола (рис. 2), а полученный в условиях прототипа ДКВ по данным флуориметрического анализа имеет94% степень чистоты, а по данным ВЭЖХ -81,1 с примесью 2,8 оаромадендрина и2,6 онарингенина (рис, 1).Таким образом, предлагаемый способвыделения ДКВ позволяет сократить времяспособа с 26 часов по прототипу по 11,4 часаи повысить степень очистки целевого продукта с 94 до 97,На фиг. 1 представлена хроматограммасубстанции ДКВ, полученной в условияхпрототипа; по данным флуориметрическогоанализа содержит 94 оДКВ, по методуВЭЖХ 81,1%; на фиг. 2 - хроматограммасубстанции ДКВ, полученной по заявляемому способу: по методу ВЭЖХ содержит97 2% ДКВИспользовался жидкостный хроматограф "Милихром", сорбент Сепарон 18, колонна 60 2,1 мм. Подвижная фазаацетонитрил-ная уксусная кислота,30;70 об. Скорость потока 50 мкл/мин, Уфдетектор, аналитическая длина воды 290 нм.Обьем ооодимойпробы 2 мкл раствора ДКВо эцетонитриле с концентрацией 1 мг/мл.При использовании предлагаемого спосаба сокращается время на выделения ДКВ,(56) Авторское свидетельство СССРМ 351847, кл, С 07 О 7/24. 1970.2000797 П ототип 2 ч 2 ч ние ние 2 ч порошком 2,5 ч Фильтрование 0,5 ч 2 ч ка 2,5 ч смесью ФильтрованиеУпаривание 0,5 ч 2,5 ч 0,5 ч 2 %-ной НС Упаривание 1 ч сушка по ошка ИТОГО: 26 ч ИТОГО: 11,4 ч Экстракция опилок древесины лиственницы водой при нагревании2 ч Охлаждение экстракта и фильтрова Подготока колонки к хроматографированию 1 чПропускание экстракта Промывка колонки водой 7 чЭлюирование колонки водно-ацетоновой Регенерация сорбента ацетоном2,5 ч Контроль за ходом хроматографического процесса 2 чФормула изобретения СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ДИГИДРОКВЕРЦЕТИНА путем экстракции опилок древесины лиственницы водой при нагревании, охлаждения, фильтрования и упаривания, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени способа и повышения степаЗаявляемый способ Экстракция опилок древесины лиственницы водой при нагревании 1 ч Охлаждение экстракта и фильтрова Перемешивание экстракта с полиамидным Высушивание полиамидного порошЭкстракция этилацетатом: 1-я стадия регенерации полиамидного порошка ",5 чКристаллизация: растворение 0,5 ч охлаждение и выпадение кристаллов 0,5 ч фильтрование 0,15 ч Регенерация (2-я стадия) полиамидного ни очистки, в охлажденный экстракт вносят полиамидный порошок в соотношении 1: 10, смесь перемешивают в течение 2 ч, отфильтрованный полиамидный порошок высушивают, целевой продукт экстрагируют этилацетатом и кристаллизуют его из горячей воды, 2000797