Способ микроклонального размножения кормовой свеклы

(51)5 А 01 Н 4/00 А РЕТ ЕИ ПИ 1 г,.Ъц" ъ,ф щ мС СВИДЕТЕЛЬСТВУ К АВТОРСКО ааЪ в. Для увеличен зовавшихся по утаминовую ки ества,клональном лы эти сред чно высокого у бегов.- повышение в иала эа счет увея коегов лоту,раз ств оовн ичеГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(56) Яапбегз А 1 е(Ье и ч 1 го зЬоот сц 1 цге ргорацатоп зузтев аког зццагЬеес СЬат псцбез гарб Лога пб(1 стоп о 1 гаветз. - Сгор. Яс - 1982 . ч. 22, М 6 - р. 1102-1105,Шумилин И.СДержавин Г,П., Артюшин А.М. и др. Состав и питательность кормов, М: Агропромиздат, 1986, с. 289.ОавЬог 9 О, Мег В., О)ва К., йц 1 гем ге 9 цгевептз о 1 зцзрепзоп сцйцгез о 1 зоуЬеап гост сеиз. - Е(р. Се. Вез. 1968- 50 - р. 151-158.Ильенко И.И., Белоус В.Е., Павловская Л,Л., Редько В,И. Использование культуры изолированных меристем и зародышей сахарной свеклы для размножения селекционного материала (физиолого-генетические проблемы интенсификации селекционного процесса) Матер. Всесоюзн. конференции, Саратов: 1984, ч. 2 с, 124-125. Изобретение относится к биотехнологии и сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции и семеноводстве растений при массовом размножении ценных форм, а также и в исследованиях по физиологии, генетике и фитопатологии растений,Известно, что для ускорения селекционного процесса по сахарной свекле используют микроклональное размножение путем культивирования верхушечных и пазушных(54) СПОСОБ МИКРОКЛОНАЛЬНОГО РАЗМНОЖЕНИЯ КОРМОВОЙ СВЕКЛЬ (57) Изобретение относится к биотехнологии и сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции и семеноводстве растений при массовом размножении цепных форм, а также в исследованиях по физиологии, генетике и фитопатологии растений. Целью изобретения является повышение выхода размножаемого материала за счет увеличения интенсивности побегообразования и улучшения роста и развития эксплантов. Изобретение предусматривает культивирование на питательных средах верхушечных и наружных почек цветочных побегов кормовой свеклы с получением регенерантов, при этом в питательные среды дополнительно вносят сок, полученный из ботвы данной культуры, в концентрации 2,5 - 10,0. 3 табл,почек цветущих побего личества вновь обра применяли аланин, гл витамины и другие вещ Однако при микро жении кормовой свек обеспечивают достато образования новых по Цель изобретения размножаемого матер5 10 15 20 25 30 35 40 ния интенсивности побегообразования иулучшения роста и развития эксплантатов.Способ состоит в том, что верхушечныеи пазушные почки цветоносных побеговкормовой свеклы культивируют на питательных средах, при этом в питательнуюсреду дополнительно вводят сок, получен.ный из ботвы этой культуры в концентрацииот 2,5 до 10,0 )ь.Сок ботвы кормовой свеклы содержитнеобходимые для образования растительной ткани аминокислоты, макро- и микроэлементы и другие вещества, что иопределяет увеличение количества вновьобразующихся побегов кормовой свеклы васептических условиях в 1,5-2,3 раза посравнению со способом, предложеннымдля сахарной свеклы. Концентрация сока всреде от 2,5 до 5,0; является оптимальнойдля получения наибольшего количества новых побегов, хотя хорошее развитие эксплантатов отмечается и при увеличенииконцентрации сокадо 10,0П р и м е р 1, Для опыта берут генотипычетырех разных сортообразцов кормовойсвеклы. Пазушные и верхушечные почки вычленяют с цветоносов растений второго года жизни. После поверхностнойстерилизации эти почки помещают на агаризованную питательную среду 85 (табл, 1)с набором витаминов и минеральных веществ, предложенных Гамборгом.При размножении в асептической культуре все изучаемые генотипы положительнореагируют на добавление к среде сока, полученного из ботвы кормовой свеклы (табл.2). В вариантах с добавлением сока ботвыувеличивается количество вновь образовавшихся побегов, а также наблюдают болееинтенсивное развитие эксплантатов увеличение их длины.и массы),Математическая обработка полученныхданных показывает, что ни количество вновьобразовавшихся побегов, ни увеличение длины и массы у эксплантатов не зависит отисходного генотипа, на эти показатели в значительной мере влияет присугствие в средесока из ботвы кормовой свеклы.Полученные растения - регенерантыпосле индукции ризогенеза высаживают впочву. Различий между растениями внутрикаждого генотипа не отмечают,Таким образом, выращивание эксплантаТов кормовой свеклы на средах с добавле нием сока ботвы позволяет увеличить выходрастений - регенерантов в 1,6-2,3 раза посравнению с контролем,П р и м е р 2. С целью определения оптимальной концентрации сока ботвы и его влияния на количество вновь образующихся побегов и развитие эксплантатов кормовой свеклы проводят ряд опытов.По количеству вновь образующихся побегов и по развитию эксплантатов достоверный положительный эффект получен по всем генотипам при концентрации сока в питательной среде от 2,5 до 5,0 (табл, 3). Более низкие концентрации сока 1,0) способствуют увеличению количества вновь образующихся побегов, но эксплантаты заметно уступают по своему развитию лучшим вариантам.При более высоких концентрациях сока (10,0-20,0%) отмечают хорошее развитие эксплантатов, но коэффициент размножения снижается.Использование питательных сред с содержанием сока менее 1,0% и более 20,0 , нецелесообразно, так как они сдерживают побегообразовательный процесс, а при низких концентрациях также заметно тормозится и развитие эксплантатов. При использовании питательных сред другого минерального состава (Мурасиге и Скуга и др.) получены аналогичные результаты.Таким образом, добавление в питательную среду от 2,5 до 5,0 сока, полученного из ботвы кормовой свеклы, положительно влияет на рост и развитие эксплантатов этой культуры и позволяет увеличить более, чем в 1,5 раза выход растений - регенератов по сравнению с контролем, Использование более высоких концентраций сока (до 10,0 ф) положительно влияет на рост и развитие эксплантатов, хотя количество вновь образовавшихся побегов несколько снижается. Формула изобретения Способ микроклонального размножения кормовой свеклы, включающий культивирование верхушечных и пазушных почек цветоносных побегов на питательных средах с последующим получением растенийрегенерантов, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода размножаемого материала за счет увеличения интенсивности побегообразования и улучшения роста и развития эксплантатов, при культивировании в питательные среды дополнительно вводят сок, полученный из ботвы кормовой свеклы, в концентрации 2,5-10,0.1697642 Т а б л и ц а 1Мимический состав, питательных сред Вещество Концентрация, мг/л,в среде состава 100 0,41,00,0151030000 м0,430000 Таблнцаг Влияние сока из ботвы на развитие эксплантатое кормовой свекл н их побегообрааоеаннв Количество вновь образоваввихся побегав ит кп/и Селе кционнаноиер йасса зксплантата, кг Длина эксплаитата мм Конт- Среда 2 к контроль В 5+сок ролюботвы Конт- Среда Ф к контрольВ 5+сок рокгботвы Кант- Среда 8 к контрольф 85+сок ролв ботвы ее350 21,8 21,О 44,О 178 еае 17820,3 " 226 10009 26437" 264 436,8 11489 та 263 6757 1084,7 161 1437,6 1615,5 112 69,3" 188 31,4 144 28,0 133 53,8 122 46,5 150 6,586,10,090 1 22. 14Э 154 33В среднеи 8,5 16,5 194 887,5 1623,2 183 зо,5 В качестве контроля используется среда В 5 с добавлением аланина 1300 мг/л) н глутаминоройкислоты (500 мг/л)гаа Приведены средние значения по серии опытое с концентрациямн сока ботвы 2,5 5 т 0 10 и гоьрва Достоверно на 5-ном уровне ананвости 1фвваДостоверно на 1-нск уровне значеюстн СаС 1 2 Н 0СОС 1 г 6 Н ОСиБ 04 5 НгОРеБ 04 7 нгоНЗВОЗКН РО,К 1КИО Змдяо ,7 н оВРО НгОМпЯО 4 Н ОИангР 04 Н 0Иа ЕНОТА1)аг МО 042 Н 0Н 4 о эТаблица 3Влияние концентрации сока из ботвы кормовой свеклы иа рости развитие эксплантатов и их побегообразование (1988 1989 г.г.) Масса зксплантатов Количество вновь образовавшихся побегов Длина эксплантатов Вариантыконцентрации сокаботвы, 4 мг Ф к контролю мм 4 к контролю шт, 4 к контролю+Достоверно на 5 ь-ном уровне значимостиоДостоверно на 14-ном уровне значимости Составитель В.ДемкинТехред М.Моргентал Редактор Н.Шитев КоРРектоР О,Кундрик Заказ 4336 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 Без сока (контроль) Оу 51,02 55,010,0 20,0 40,0 11,48,016,018,01714,013,19,6 100,070,2140,4157,9152,6122,8114,984,2 28,4 14,0 18,5 28,9 30,1 28,7 23,6 22,6 100,064,284,9132,6138,1131,7108,3103,7. 420 9 357,0 480,6 898,2 995,3 940,0 826,8 568,8 100,0 84,8 114,2 213 4 236,5 2233 196,3 135,1