Среда для криоконсервации семени баранов

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКРЕСПУБЛИИ 149848 4 А 61 П 7/О ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБР К Д ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ ЕТЕНИ 280455/ 7.07,87 7.08.89 нститут Бюл. У 29оологии и физио г К) и2 семе- тиленни барана гликолево 1965, В 9 (54) СРЕДА НИ .БАРАНО имер Асс ью хлоро а етение относится к сельскохному животноводСтву, в частискусственому осеменению з с яиств ности овец. Целью изобретения являе тся повьппет и сте езистентност ние кр рильно П рени.р. Длялено 5 и с средь сост олучени арианто е о подготосреды (та асле в зом.В кипяченой бидистиллированводе растворяли соответствующечество лактозы, стерилизовалина кипящей водяной бане,глицерин, охлаждали до 4растворяли соответствующие колжелтка и общих липидов актиномОбщие липиды актиномицетоввыделяли из биомассы актиномиц Ф ой ит средыовиях на ряли затем честваицетов. ОЛА) одвижность, показатель анных г представлены тов Г 21) 4 (22) 0 (46) 0 (71) И АН МССР (72) А.М.Гу М.Г.Букарчу И.В.Тикан, С.А.Бурцев (53) 636.0 (56) Плато ськов, В.А.Наук,Ю.М,Казакова,Л.П.Ковальчук,В.М,Богуславский(57) Изобретение относится к областисельскохозяйственного животноводства,в частности к искусственному осеменению. Целью изобретения является повышение криорезистентности гамет и стерильности семени. Среда содержит,мас.7.: лактозу 7,8-9,6; глицерин 2,45,0; желток 8,2-14,2; общие липидыактиномицетов 0,008-0,021; воду бидистиллированную остальное, Средапозволяет повысить подвижность гаметпосле оттаивания на 0,75 балла, выживаемость на 1,3 ч, антиокислительную активность липидов гамет и ихсанитарные показатели по сравнениюс известной средой ЛГЖ. 6 табл. ягыеыз, экстракциейрм: этанол (2:1) по методу Фолча,Биомассу Асс. ягзеиз выращиваюткак кормовую добавку на биохимических заводах по традиционной технологии на стандартных средах. Например,использовалась культуральная среда,содержащая муку кукурузную, мелассу,селитру аммиачную, калий фосфорнокислый однозамещенный, магний сернокислый (рН = 7,2-7,8) и штаммы 15, 307(ВНИИГ), 420 и др. Выход ОЛА иэ биомассы 4,5-137.Каждый варианиспытали влабораторных усливыживаемость и абсолютныйвыживаемости деконсервиров амет при 38 С. Результатыв табл. 2.1498489 5Этот состав был испытан в сравнении с известнойЛГЖ-средой, а такжес добавлением в эту среду спермосана(50000 ед. на 100 мл среды),который утвержден в качестве антимикробного препарата для обеззаражи"вания семени производителей сельскохозяйственных животных. Эффективность.разработанной среды оценивали по устойчивости гамет к температурномушоку, подвижности гамет после разбавления, охлаждения и оттаивания, выживаемости и абсолютному показателювыживаемости деконсервированных гамет при 38 С, сохранности акросомыгамет после охлаждения и замораживания-оттаивания семени, антиокислительной активности липидов гамет иантимикробнаму действию. Результатыпоказали, что ЛОЛАГЖ-среда обладаетвысоким криозащитным и антимикробным дейстВием, обеспечивая высокуюэффективность криоконсервации.Характеристики гамет при различных средах приведены в табл. 4.Антиокислительная активность липи"дов гамет приведена,в табл. 5,Ветеринарно-санитарные показателисемени представлены в табл. 6,Высокий криозащитный эффект ОЛАобусловлен их специфическим влияниемиа липидный бислой биомембран, котоСреда для криоконсервации семенибаранов, включающая лактозу, глице рин, желток куриного яйца и воду,о т л и ч а ю щ а я с я тем, что,с целью повышения криорезистентностигамет и стерильности семени, средадополнительно содержит общие липиды 30 актиномицетов при следующем соотношении ингредиентов, мас.%:Лактоза 7,8-9,6Глицерин 2,4-5,0Желток 8,2-14,2Общие липидыактиномицетов 0,008-0,021Вода бидистиллированная Остальное Таблица 1 Ингредиенты, мас.%Глицерин Желток Общие липидыактиномицет Состав среды Вода бидистиллированная Лактоза 0,001 0,008 0,015 0,021 О,ОЗЯ 4,4 8,2 11,5 14,2 16,7 0,9 2,4 3,8 5,0 6,0 До 100 До 100 До 100 До 100 До 100 6,6 7,8 8,8 9,6 10,4 2 3 4 5 3Оптимальный состав лактозо-ОЛА- глицерино-желточной среды (ЛОЛАГЖ) для криоконсервации семени баранов приведен в табл, 3. рое сопровождается повышением актиокислительной активности липидов гамет. Кроме этого, они обладают большим антимикробным действием,В лабораторных условиях на протяжении ряда лет испытывались разные штаммы актиномицетов, а также питательные среды самого разнообразного состава и было установлено, что эти факторы влияют на выход антибиотика и ОЛА, но отмеченные колебания в качественном и количественном составе ОЛА не оказывали существенного влияния на их актиокислительные и антимикробные свойства, Поэтому эффективность ОЛА в указанных дозах не зависит от штамма и среды культивирования Формула иэобретения1498489 Та блица 2 Ингредиенты, мас.7. Физиологические показатели гамет после деконсервации Составсреды ОЛА Вода бидистиллированная ЖелГлиЛак- тоза Выживае- Абсолютный Подвижностьбалл церин ток мость, ч показательныживаемости, у.е. До 100 До 100 До 100 До 100 До 100 3,3+ 0,114 6,2+ 0,29 11,210,74 8,8 3,8 14,2 0 До 100 Таблица 3 СодержаИнгредиенты Содержание на 1 л би ние,мас.Х дистиллированной воды 8,8 115 г 50 мл 150 мл 0,18 г 3,8 11,5 0,015 ОЛА Вода бидистиллированная До 100 Таблица 4 Показатели Вариант среды ЛГЖ + спермосанЛОЛАГЖ ЛГЖКоэффициент устойчивостигамет к температурномушоку, у.е. 0,36 ф 0,022 0,29 ф 0,16 0,29 0,018 Подвижность гамет (балл) после разбавленияохлаждения-оттаивания 7,32"- 0,16 6,431 0,14 3,25+ 0,12 7,32+ 0,167,11 Т 0,124,07 й 0,22 7,.32+ О, 16 6,84+ 0,14 3,29+. 0,14 Выживаемость деконсервированных гамет при 38 С,ч 6,214 0,29 7,57 + 0,30 6,36+ 0,27 1 .2 3 4 5 Конт- роль 6,6 0,9 7,8 2,4 8,8 3,8 9,6 5;0 10,4 6,0 4,4 0,001 8,2 0,008 11,5 0,015 14,2 0,021 6;7 0,030 ЛактозаГлицеринЖелтокф 7 3,6+ 4,3+ 4, 1+ 2,9+ 0,14 0,11 0,14 0,11 0,21 44 0,5 7,2+ 0,22 7,6+ 0,27 7,6+ 0,27 5,44 0,27 5;65 й 1 4914,5+1,7029, 851, 1018,15 ф 1,4810,85 фО, 951498489 Продолжение табл.4 Вариант среды Показатели ЛГЖЛГЖ + спермосанЛОЛАГЖ Абсолютный показатель выживаемости деконсервированных гамет при 33 С,о у.е. 11,21 + О, 74 11,23 4. 0,55 16,54+ 1,12 Сохранность акросом га"мет (Х) после охлаждения-оттаивания 66,16+ 0,90 27,52+ 0,95 67,91+ 0,97 28,01+ 0,75 70,45+.0,8235,г 4 + 1,45 р0,05. р с 0,01.р ( 0 001Таблица 5 Антиокислительная активностьлипидов замороженно-оттаянных гамет, ч/г./мл Вариант среды ЛГЖ (контроль)ЛГЖ + спермосан2633,2 1 146,9 ЛОЛАГЖ юМр0,01. Таблица 6 Ветеринарно-санитарные показатели замороженнооттаянного семени (в 1 мл) Вариант среды Грибы Кишечная палочка Общее кол-вомикроорганизмов 1,0 + 0,82 2397,5+ 117,13 111,5+ 1,91 ЛГЖ (контроль) 8,0 А 4,901 5,5 11,37 0 0 р . 0,001,Составитель И.МарченкоТехред А.Кравчук Корректор Т.Колб% Редактор В,Данко Заказ 4482/5 Тираж 643 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям прн ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101 ЛГЖ + спермосан ЛОЛАГЖ7 7153,1 + 682 18857,8 1 709,1