Способ дезинтеграции микроорганизмов

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветсникСоциалистическихРеспублик по 962301(22) Заявлено 31.03.81 (21) 3272900/28-13 351 М. Кл.з с присоединением заявки Н 9 С 12 О 1/00 Государственный комитет СССР по делам нзобретеннй н открытнйОпубликовано 3009,82, Бюллетень М 9.36 Дата опубликования описания 30.09,82 П.И. Гвоздяк, О.Г. Гавриш, И.Н. Даценко,В.У. Никоненко, А.С. Лясковский, Н.ф. Могиле ичи А.Ю. Глин ский йАТЕЯТНФ. 1 Щ1 пвщжсий 1 ДИнститут колоидной химии и химии воды им ВЫЬЛВИЕКА.А.В( Дум АН Украинской ССР(54) СПОСОБ ДЕЗИНТЕГРАЦИИ МИКРООРГАНИЗМОВ Изобретение относится к микробиологии и охране окружающей среды, в частности к способам дезинтеграции микроорганизмов.По основному авт, св. М 825626 известен способ дезинтеграции микроорганизмов, предусматривающий приготовление суспензии микроорганизмов и ее обработку электрическим полем в присутствии анион- и катионобменных смол или их смесей 1)Недостатком данного способа является то, что процесс ведут с использованием дистиллированной воды в результате чего после обработки микроорганизмов электрическим полем в дезинтеграте ,создаются физиологические условия реакции среды (рН 4,7- 6,6). В этих условиях интенсивно работают протеолитические фер-. менты, имеющиеся в любой микробной клетке и освобождающиеся из нее при обработке по известному спо-" собу, что приводит к энзиматическому разложению белков, в том числе и ферментов, разрушающих гексаметилендиамин (ГМД). Это не дает возможности получить из микроорганизмов-деструкторов ГМД ферментный препарат с вы-. сокой активностью разрушения этого соединения. Кроме того, обработку электрическим полем осуществляют вприсутствии дорогостоящих и дефицитныхионобменных смолЦель изобретения - увеличение активности извлекаемого из микробныхклеток ферментного препарата, разрушающего гексаметилендиамин, а такжеудешевление способа.Поставленная цель достигается тем,что согласно способу дезинтеграциимикроорганизмов по авт, св, М 825626обработку биомассы электрическим полем осуществляют в сточной воде, со держащей гексаметилеидиамин при рН 912,при этом при обработке биомассы вэлектрическом поле используют обработанные ионообменные смолы.П р и м е р 1, 1 г сырой биомас сы микроорганизмов-деструкторов ГМДсуспендируют в 5 мл сточной водй,содержащей ГМД в концентрации 3 г/Лс рН 10. Суспензию помещают в стеклянную цилиндрическую ячейку диамет ром 19 вм,высотой 65 мм,с двумя круглыми электродами диаметром 3 мм иэнержавеющей стали, расположеннымина максимальном расстоянии друг отдруга, Ячейка предварительно запол- .няется 15 г влажной смеси отработан ных ионообменных смол АВи КУ962301 На электроды подают постоянное напряжение 25 В. Через 7 мин электрическое поле отключают, дезинтеграт, отделяют от ионобменных смол,а послед-ние дополнительно промывают 35 млсточной всщы. 5Часть полученного дезинтегратацентрифугируют 10 мин при 6000 об/мин.Определение ферментативной активности супернатанта отцентрифугированного деэинтеграта и дезинтеграта, не 10подвергнутого центрифугированию, про"водят следующим образом,1, мл супернатанта и дезинтегратавносят в 100 мп сточной воды, сэдержащейГМД в концентрации 3 г/л, и инкубируют в течение 5 мин, при 75 С.По истечении периода инкубации опре-,деляют концентрацию ГМД в пробах известным методом с помощью реакции с2,4-динитрохлорбенэолом,Опыты показали, что после пятиминутного контакта исследуемых проб среальной сточной водой, содержащейГМД, концентрация последнего снизилась до 10 мг/л в случае инкубациис супернатантом и до 5 мг/л - в случае инкубации с дезинтегратом, не под-вергающемся центрифугированию (таблица) .П р и м е р 2 (известный способ).1 г сырой биомассы микроорганизмовдеструкторов ГМД суспендируют в 5 млдистиллированной воды и помещают в наполненную смесью обработанных смолстеклянную цилиндрическую ячейку,аналогичную примеру 1. Клетки раэру Концентрация ГМД, мг/ле е е4 ееее ее ее е Снижение концентраций (во сколько раэ) исходная конечная Центрифугирование В дистиллированнойводе 50 1500 30 рН 6,0 Без центри- фугирования 100 1500 15 В сточной воде,содержащей ГИД,Центрифугирование 300 10 3000 рН 10,0 Без центрифу- гирования 600 3000 Центрифугирование рН 12,0 600 3000 Без центрифугирования1500 3000 Формула. изобретенияспособ дезинтеграции микроорганизмов по авт. св, 9 В 25626, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью увеличения активности извлекаемого 65 Дезинтеграция биомассы Подготовкадезинтеграта шают аналогичным образом, После бтделенин полученного деэинтеграта отионобменныхсмол последние дополни-тельно промывают 3 мл дистиллированной воды,Затем определяют ферментативную.активность супернатантаи дезинтеграта:в 1 мл супернатанта и в 1 мп деэинтеграта добавляют по 1 мп сточной воды, содержащей ГМД в концентрации3 г/л (таким образом, в пробах устанавливаются концентрации ГМД 1,5 г/л),и инкубируют в течение 5 мин. По истечении периода инкубации определяютостаточную концентрацию ГИД в пробах.Опыты показали, что после пятиминутного контакта исследуежх проб состочной водой, содержащем ГМД, концентрация последнего снизилась доЗО мг/л в случае инкубирования сточной воды с супернатантом и до 15 мг/лв случае инкубации с дезинтегратом,не подвергающимся центрифугированию.Таким образом, ферментный препаратполученный по предлагаемому способу при обработке культуры в сточной воде с рН 9-11,обладает болеевысокой (в 6 и 15 раз) диструктивнойактивностью до отношению в ГИД в сравнении с ферментным препаратом, полученным по известному способу при обработке суспензии микроорганизмов-деструкторов ГИД в дистиллированнойводе.1. Зависимость активности ферментного препарата от способа разрушениябиомассы представлена в таблице. из микробных клеток ферментного препарата, разрушающего гексаметилендиамин, а также удешевления способаобработку биомассы электрическим по-,лем осуществляют в сточной воде, со962301. Составитель В. ГолимбетРедактор Л. Пчелинская Техред Т.ФантаКорректор С. Шекмар Заказ 7428/37 Тираж 505 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП фПатент, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 держащей гексаметилендиамин при рН 912, при этом при обработке биомассыв электрическом поле используют отработанные ионобмеиные смолы. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1. Авторское свидетельство СССР 9 825626,кл. С 12 К 1/00, 1979.