Предметное стекло для исследования крови

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК ПА 16 НЗУ и 904536 Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик(32) 1 Ы 47 еаударатевеай юатет СССР в лехам хзюброеаа и откратнй72) Автор изобре ия Иностранная фирма Берингер Ианнхайм Гмбх"(71) Заявитель 54)ПРЕДМЕТНОЕ СТЕКЛО ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ КРОВИтом метив ви е я к медицине,тносит ологии метисе с ндн теля, синего ри соо стекло длясенным наостоящегои ацетатаношении Однако, кр предметное с высокой конт (окраска тус лейкоцитов ( и базофилы) трудом. сители, нанесенные на екло, не обеспечивают астности окрашивания лая), формы зернистых озинофилы, нейтрофилы азличаются с большим Ацетат крезолфиолетовый очищают путем осторожного отстаивания в воде, удаляя ацетат натрия, затем растворяют в метаноле и выделяют с помощью эфира. Повторение этого процесса дает хроматографически чистый продукт.Очищенные таким образом крася" щие вещества растворяют ь метаноле и наносят на предметное стекло. Они могут быть также растворены в воде,и нанесены вместе с полиоксиэтиленсор" битанмонопальмитатом, Соотношение этих красящих веществ 1;1,5 - 1:5. Цель изобретения - повышениеконтрастности скрашивания.указанная цель достигается тем, 20 что в предметном стекле для исследования крови с нанесенным на него слоем красителей метиленового синего и ацетата крезолфиолетового слой красителя содержит красители в соот-. И Изобретение а именно к гемаИзвестно пре следования кров него слоем крас из метиленового золфиолетового 9:1 Е 11. ношении 1:1,5 - 1:5. Ори эШ леновый синий использован д моногидрохлорида.Иетиленоьый син,й очищают путем растворения в воде, выделяют гидрохлорид с помощью соляной кислоты. Получают хроматографически чистый продукт, который содержит только около 0,53 хлорида цинка и представлен в виде моногидрохлорида.3 904536Краситель наносят на предметное стекло от 0,5 до 1 Оу г/см". На предметное стекло наносят слой красителяУ затем добавляют каплю крови, накрывают покровным стеклом и через 5 3-5 мин микроскопируют с помощью иммерсионного объектива.Получается яркая контрастная окраска, воспроизведение хорошее.Гранулы эозинофилов окрашены в яркий желтый цвет, гранулы базофилов - в оранжевый цвет.Контуры ядер распознаются отчетливо, что существенно облегчает различение лимфоцитов, моноцитов и различных зрелых стадий гранулоцитов.П р и и е р 1, Очистка ацетата крезолфиолетового.50 г ацетата крезолфиолетового суспендируют в 100 мл воды и сильно раз мешивают в течение 15 мин. Затем красящее вещество отсасывают и дважды промывают 100 мл охлажденной на льду воды. Отфильтрованный осадок растворяют в 1,6 л метанола при нагрева нии и при 30 С отсасывают от нерастворимых частиц, фильтрат медленно при помешивании смешивают с 3,5 л эфира и затем перемешивают в течение 30 мин при охлаждении на льду, Образовав шиеся кристаллы осасывают, растворяют при нагревании в 620 мл метаноо ла, затем раствор охлаждают до 30 и выделяют красящее вещество добавлением 1,85 л эфира при помешивании и охлаждении на льду. После отсасывания и трехфазовой громывки 120 мле эфир-метанола 3:1) после просушки получают сверх дифосфорпентоксида 22 г ацетата крезолфиолетового в фор ме темно-зеленых кристаллов.Состав: примерно 824 ацетата крезолфиолетового, 83 хлорида крезолфиолетового и 103 воды. При нагревании до 150 С возникает разложение. 45 Вецество по данным хроматографического исследования является практически чистым. Значение В = 0,6.П р и м е р 2. Очистка метилено 50 вого синего,В четырехлитровой трехгорлой колбе растворяют при помешивании 100 г метиленового синего в 1 л воды и перемешивают с 1 л концвнтрированной соляной кислоты, сС = 1,18. После55 четырехчасового перемешивания при охлаждении на льду и восьмичасового нахождения в холодильном шкафу при 4+5 С отсасывают образовавшиеся кристаллы, промывают 400 мл охлажденной на льду 6 н. соляной кислоты и 500 мл эфира. Получают 36,5 г черных с металлическим блеском кристаллов. Очищенное красящее вещество состо-. ит из 95-9 Д метиленового синего хлорид-гидрохлорида и содержит 3-5 воды. Имеются лишь только следы цин-, ка. Красящее вещество по данным хроматографического исследования является практически чистым. Значение й = 0,5.Пример 3.Используя красящие вещества, очищенные согласно примерам 1 и 2, приготавливают раствор следующего сос 1 тава:Метиленовый синийгидрохлорид, мг 130Ацетат крезолфиолетовый, мг 270Метанол, мл Около 100Этот раствор ватным тампоном наносят или напыляют на предметное стекло и высушивают.При средней величине капли примерно 20 )ч нанесенное количество крася- щего вещества составляет около 31 ч г/см".На предметное стекло наносят каплю крови примерно 5-10)ч и накрывают покровным стеклом. Через 3-5 мин окраску оценивают под микроскопом при 800-кратном увеличении с использованием иммерсионного объектива.Отдельные частицы крови представлены в следующей окраске.Ретикулоциты: сетка пурпурного цвета внутри едва окрашенных эритро. цитов. Нейтрофилы: ядро пурпурного цвета внутри тонкозернистой почти бесцветной плазмы.Зозинофилы: ядро пурпурного цвета внутри грубозернистой желтой плазмы,Базофилы: ядро темно-пурпурного цвета внутри средней величины компа" ктно-зернистой плазмы оранжево-красного цвета. Лимфоциты: ядро пурпурного цвета с плазмой светло-пурпурного цвета. Ионоциты: как лимфоциты, только крупнее и больщим количеством плазмы,5 904536 6Тромбоциты: маленькие частицы пур:1 наблюдается различная окраскапурного цвета. отдельных форменных элементов крови.Предлагаемый краситель позволяетповысить контрастность окрашиванияВ таблице приведена окраска от"так, при сравнивании окрашенных пред-дельных элементов крови в зависимосметных стекол при соотношении 1: 1,5, ти от соотношения метилового синего1: 3 и 1;5 с окрашенными предметными М-гидрохлорида:ацетат крезилфиолето"стеклами с соотношением красителей вого,Соотношение компонентов Элементы крови1:5 9:1 Эозинофилы ХорошоХорошоОчень хорошо Очень хорошо Очень слабо Очень хорошо Базофилы Удовлетворительно Бриллиантовая окраска Бриллиантовая окраска Нейтрофилы Удовлетвори"тельно Бриллиантовая окраска Очень хорошо Бриллианто вая окраска Лимфоциты Очень хорошо Очень хорошо Очень хорошо Достаточно Очень хорошо МоноцитыТромбоциты Удовлетворительно Бриллиантовая окраска Бриллиантовая окраска Формула изобретения 1. Предметное стекло для исследования крови с нанесенным на него слоем красителя, состоящего из метиСоставитель С, МалютинаРедактор А. Лежнина Техред М. Надь Корректор И. Пожо Заказ 179/49 Тираж 882 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, И, Раушская наб., д.4/5 филиал ППП "Патент", г.ужгород ул.Проектная, 4 ВКак видно иэ таблицы, применение предметных стекол, содержащих метиленовый синий и ацетат креэолфиолетовый или метиленовый синий в виде миногидрохлорида в соотношении 1: 1,5 - 1:5, позволяет получить лучшее окрашивание различных элементов крови по сравнению с известным красителем в соотношении 9:1. Очень хорошо Очень хорошо Очень слабо ленового синего и ацетата креэолфиолетового,:о т л и ч а ю щ,е е с ятем, что, с целью повышения контрастности окрашивания, слой красителя содержит компоненты при следующем соотношении 1:1,5 - 1:5.352, Стекло по п,1, о т л и ч а "ю щ е е с я тем, что метиленовыйсиний используют в виде моногидрохларида. 4 ОИсточники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Патент США Ь 3796594,кл. 117-124, 1972.3