Штамм гриба тriсноdеrма viride продуцент внеклеточной целлюлазы и ксиланазы

(46) 30.11.89. Бюл. У 44 (71) Всесоюзный научно-исследовательский биотехнический институт и Московский технологический институт пищевой промышленности (72) Н.А.Острикова, С.А.Коновалов, М.М.Переведенцева, Н.М.Павлова, Ю.А.Белогорцев, К.А.Калунянц, М.В.Гернет, Л.П.Замотайлова и Ф.Н.Чегодаев(56) Авторское свидетельство СССР В 1090713, кл. С 12 И 9/42, 1982.Авторское свидетельство СССР У 1073282, кл. С 12 И 9/42, 1982.Авторское свидетельство СССР У 745933, кл. С 12 М 15/00, 1980. омыми Изобретение относится к ферментной отрасли микробиологической промышленности и касается нового штамма - продуцента внеклеточных целлюлаз, которые используются при силосовании грубых кормов, в производстве спирта, а также для получения сахаристых растворов из отходов пищевой и деревообрабатывающей промышленности.,Цель изобретения - получение нового штамма - продуцента внеклеточной целлюлазы и ксиланаэы, обладающего более высокой активностью.Штамм был получен путем селекции исходного штамма Тгс 11 ос 1 егша чг- де 44. Шт У ьтиви ГОСУДАРСТВЕННЫИ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ К АВТОРСКОМУ СВ(54) ШТАММ ГРИБА ТК 1 СНОПЕКМА Ч 1 К 1 РЕ ВКПМ Р- ПРОДУЦЕНТ ВНЕКЛЕТОЧНОЙ ЦЕЛЛЮЛОЗЫ И КСИЛАНАЗЫ (57) Изобретение относится к области биотехнологии и касается получения целлюлолитических ферментов на основе культуры гриба Тгхс 11 ойегша чд-. гЫе. Целью изобретения является создание штамма гриба Тг. чдгдйе 44-11- 62/3, на основе которого могут быть получены препараты целлюлозы разной степени очистки, сохраняющих продуктивность штамма. В результате мутагенной обработки исходного штамма и последующей селекции выделен штамм Тг. чдгЫе 44-11-62/3, обладающий ис- а к свойствами. Штамм Тг. чдгде - 44-11-62/3 депоннрован в Центральном музее промышленных микроорганизмов института "ВНИИгенетика" под номером ВКПИи от известных продуцентов отличается не только более высокой продуктивностью внеклеточной целлюлазы, но и высокой продуктивностью сопутст вующего фермента - ксиланазы, способствующего более глубокому расщеплению растительных остатков до легко усвояемых веществ. г. ч 1 гЫе 44-11-62/3 - илюлолитических ферментовется в глубинных условия питательной среде.Активность целлюлаэы характеризуют по гидролизу фильтровальной бумаги с определением образующихся сахаров по методу Шомодьи-Нельсона,Активность ксиланаэы характеризуют по гидролизу ксилана с последующим определением сахаров по методу Шомодьи-Нельсона,Культуральные признаки,На сусло-агаре на 5-е сутки росота при 30 С диаметр колоний 5,05,5 см колонии слегка приподнятые,мицелий пушистый, край волнистый,колонии покрыты сплошь спорами лимонно-желтого цвета, за исключением тонкого (1-2 мм) края, В среду выделя -ется желтый пигмент.На картофельно-декстроэном агарена 5-е сутки роста диаметр 6,0 -6,5 см, колонии концентрические, приподнятые, край ровный, белый, размер0,8 см. Среда не пигментирована.На среде Чапека-Докса с сахарозой на 5-е сутки диаметр колоний 34 см, колонии плоские, мицелий тонкий, колонии желтые, в центре колоний в среде желтый пигмент.На среде Росдлен-Тома колонии концентрические, выпуклые, центр не приподнят, край волнистый, споры по всейколонии, кроме тонкого края. Средапигментирована.На среде с микроцеллюпозой колонии диаметром 5,0 см. Концентрические, плоские, центр слегка приподнят, мицелий тонкий стелющийся, белый. В среде желтый пигмент.На среде с лактоэой колонии диаметром 5,0 см, плоские, мицелий белый, споры редкие, в центре желтогоцвета, среда пигментирована.На среде Гетчинсона на поверхности жидкой среды светлый мииелий,бумага и среда окрашены в желтыйцвет.Морфологические признаки.Конидиеносцы слабо дифференцированы, иногда разветвлены.Конидии овальные, желтого цвета,размер (2,5-2,8) -(3,9-4,2) мкм.физиолого-биохимические призкаки.Усваивает рамнозу, маннит, ксилозу, целлобиоэу, арабинозу, лактоэу,5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 галактоэу, глицерин, крахмал, фруктозу, мальтоэу, сахарозу.Желатину разжижает, молоко не коагулирует, Использует аминную, нитратную и белковую формы азота, Гидролиэует клетчатку до олигосахарови глюкозыШтамм интенсивно продуцирует целлюло- и ксиланолитические ферментына питательных средах, содержащихпроизводные целлюлозы или растительные остатки.Изобретение поясняется примерами.П р и м е р 1. Штамм Тг. чгЫевыращивают в пробирках на скошенномсусло-агаре в течение 7 сут прио30 С и 7 сут при комнатной температуре. Полученным споровым материалом инокулируют 50 мл питательнойсреды состава,Х: жом свекловичный 3,0, НаЬОз 04; КНгР 04 0,2, (МН) 8040,4; И 880- 0,03, солодовые ростки1,43;картофельная барда 5, вода - ос-,.тальное. рН - 5,5 до стерилизации. Культивчрование микроорганизмов проводятв течение 168 ч в конических колбахемкостью 750 мл на круговой качалке180 об/мин. Активность целлюлозы24 ед/мл культуральной жидкости,ксиланазы - 2 1 ед/мил .П р и м е р 2. Культивированиегриба Т. ч 1 гЫе 44-11-62/3 осуществляют на питательной среде того жесостава, что и в примере 1, в ферментере емкостью 10 л с коэффициентом заполнения 0,6, при аэрации 1 лкислорода на 1 л питательной среды,при начальном рН 5,5 в течение 144 ч.Активность целлюлазы 35 ед/мл, ксиланаэы - 40 ед/мл.В таблице приведена сравнительная характеристика биосинтетическойспособности предлагаемого штаммаТ.ч 1 гЫе 44-11-62/3 и известногоШтамм Т. чхг 1 йе 44-11-62/3 обладает большей продуктивностью и егоиспользование может интенсифицироватьпроцесс получения внеклеточной целлюлазы и ксиланазы.формула изобретенияШтамм гриба Тг 1 сЬойегща ч 1 гЫеВКПМ Р- продуцент целлюлазы иксиланазы,1525208 Штамм целлюлаза ксиланаза 35 24 40 21 Составитель И.ПриваловаРедактор Л.Веселовская Техред М.Ходанич Корректор Л.Бескид Заказ 7188/20 Тираж 501 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина, 101 Т, чдгЫе44-11-62/3Т.ч 1 гЫе 44 Ферментативная активность, мг глюкозы на1 мл культуральной жидкости