Способ получения протеолитических ферментов

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК ПВ 01, ства энтомопатогенИ., 1981, с. 10;Авторское свидеВ 1181316, кл. С 1 ельство СССР 0 9/54, 28.05.84. РОТЕОЛИТИЧЕС- тся к микробисти, в част- логически актических феркомплекса. тся одновреннида й пров на одной пиновременного тельной среде ОСУДАРСТЮЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ДЕЛАМ ИЗ 01 Ы%ТЕНИЙ И ОТКРЫТИИ(57) Изобретение относ ологической промышленн ности, к получению би тинных веществ протеол ментов и инсектицидног Целью изобретения явля менное получение инсек теолитических фермент тательной среде. Для о ,получения на одной пит БРЕТЕНИЯ протеолитических ферментов и инсектицида используют штаммы бактерий Вас 111 цв гЬцг 1 п 81 епв 1 в ч. Ра 11 ега69-6 - промьппленный продуцент инсектнцидного препарата-энтобактерина иВас 111 цв Фцги 81 епвв ч. Ва 11 егдаеСРР1 - продуцент протеолитическихФерментов. Посевные вегетативныекультуры используют для засева .Ферментационной среды, содержащей источники азота, углерода и стимуляторыроста. В ферментационную среду вносятвначале посевной материал штаммаВас. СЬцгдпдхепв 1 в ч. РаНегхаеСРР. При выходе культуры на стадиюэкспоненциальной фазы роста вносятпосевной материал штамма Вас. СЬцгы 81 епв 1 в ч. Ва 11 ае 69-6 при соотношении посевных доз 9: 1, Культиви. рование проводят при 30 С, 220 об/мин,в качалочных колбах. Длительностьферментации (до 953 высыпания спор),составляет 44-48 ч. По окончании Ферментации биомассу отделяют. от культуральной жидкости центрифугированием,Из культуральной жидкости одним изпромышленных методов получают ферментный препарат. Биомасса используетсяв качестве биологического инсектицида. 1 табл,39 2ва ферментационной среды. Состав ферментационной. среды и условия ферментации при совместном раздельном выращивании штаммов, Х:Мя 8 О, 0,05,Мп 80 . 0,04СаС 1 0,23й 0,08ф 1,13Сц 80 0,001Ва-цитрат 0,01, дрожжи 2Кукурузный экстракт 0,5Соевая мука 0,5 рН среды до 7,2-7,3 доводят до 403 йаОН.В ферментационную среду вносят вначале посевной материал штаммаСРРВас. СЬпгдп 81 епз 1 з ч. яа 11 егхае и при выходе культуры на стадию экспоненциальной фазы роста вносят посевной материал штамма 69-6 Вас. СЬцгЫВхепздз ч. яа 11 еНае в соотношении 9:1. При других пропорциях посевных доз поставленная цель не до:стигается. В таблице показано влияние соотно" щения посевных доз штаммов СРРи 69-6 Вас, СЬцгхп 8 депав ч, яа 11 егае на синтез биологически активных веществ (БАВ). 1:1 1:2 1 ф 5 1 ф 9 2:1 5:1 9:1 активность протеаз (ед/г) Асинхронностьштаммов СинтезБАВ активность биомассы ЬК 5 р(1 3),109 (4 9),10 ( тоновый, порошок " ферментный препарат. Протеологическая активность ацетонового порошка определяется модифи" цированным методом Ансона, Биомасса используется в качестве биологическо" го инсектицида. Инсектицидная актив- вость (ЬКрр) штаммов определяется по ГОСТ 21108-75,/энтобактерин сухой.Таким образом, при использовании предлагаемого способа повышается ко 1 13162Изобретение относится к микробнологической промьппленности, в частности к получению биологически активных веществ - протеолитических ферментов и инсектицнднога комплекса,Цель изобретения - одновременноеполучениеинсектицида на одной питательной среде,П р и м е р, Для одновременногополучения на одной питательной среде 16протеолитических ферментови инсектицида используют следующие штаммы.Штамм 69-6 Вас. йЬпгдпуепв 1 зч, ра 11 ег 1 ае - промышленный продуцентинсектицидного препарата - энтобактерина. Штамм СРРВас. гЬпг 1 пВепвхз ч. Ва 11 егхае - продуцент протеолитических ферментов депонирован вЦИПКО "ВНИИгенетика", коллекционныйномер ЦИПИ В. 20Именно зти штаммы из большого ко"лицества изученных микробных ассоциаций не проявляют антагонистическихсвойств и представляют собой перспек;тивную микробную ассоциацию. 25Для получения посевного материалаиспользуют культуры микроорганизмов;выращенные до спорового состояния наСПА. Перед засевом в ИПБ с целью по-.лучения посевного материала споры 30опрогревают при 75 С 15 мин. Затем.культуры подращивают вИПБ при220 об/мин, 30 С, в колбах емкостью750 мл, Полученные посевные вегетатинные культуры используют для эасеСоотношения посевных дозштамиов СРРи 69"6 Вас.гщгп 81 епзхз ч. Р.а 11 ег 1 ае Культивирование проводят при 30 С, .220 об/мин, в качалочных колбах емкостью 750 мл, Длительность ферментации (до 95 высыпания спор) составляет 44-48 ч, По окончании ферментации биомассу отделяют от культуральной жидкости центрифугированием.Из культуральной жидкости одним изпромышленных методов - методом осаждения белков ацетоном получают аце 5-50 ЭО70-1401316239 Составитель В.РомановаТехред Л.Сердюкова . Корректор А 0 бручар Редактор Л.Волкова Тираж 373 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж"35, Раушская наб., д. 4/5Заказ 3130 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 эффициент использования оборудованияв результате того, что эа одну ферментацию и одного ферментера можнополучиФЪ два продукта - ферментныйпрепарат и биологический инсектицидвследствие комплексного использования продуктов культивирования расходпитательной средысокращается вдвое;продукты культивирования используютсяполностью, что предполагает воэмож" Юность органиэации малоотходного производства. Формула изобретения15Способ получения протеолитическнх ферментов путем приготовления посевного материала штамма бактерий ВасИ 1 ив йЬиг 1 пВдепв 1 в айаг. яа 11 ег 1 ае СРР, засев и,культивирование в жидкой питательной среде, содержащей источники азота, углерода и стимукя" торы роста, с последующим отделением биомассы и выделением иэ культуральной жидкости протеолитическнх фер" ментов, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью одновременного получения инсектицида, на стадии экспоненциального роста в питатеЛьную среду допол", кительно вносят посевной материал штамма бактерий Вас 111 ив гЬюгйщ 1-епвдв аг. яа 11 ег 1 ае 69"6, при этом посерной материал каждого из штаммов берут в соотношении, соответственно равном 9:1, а отделенная от культуральной жид 1 кости биомасса является инсекти-цидом.