Способ определения количества извлекаемого аденозинтрифосфата из почвы

. но делам изобретений н открытий(53) УДК 576 863 ,46(088.8) а опубликования описания 30.12. 2) Авторы изобретен енов, Л, Н. Анисимова, И. В. Асее и В, Е. Зайцева Московский ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знаме государственный университет им. М . В . ЛомоносоваЗаявите СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ИЗВЛЕКАЕМОГО АДЕНОЗИНТРИФОСФАТА ИЗ ПОЧВЫ Поставленная цчто навеску вносялиофилизированныхнизмов с известнымзинтрифосфата, пербатывают кипящей ль достигается темв почву в виде культур микрооргаколичеством аценоемешивают и обраодой в течение почвенной в частностиаденозинтриноситс иохим е жан Недостатком известного ляется невысокая точность ния аденозинтрифосфата, а возможность применения спо определения количества изв аденозинтрифосфата (АТФ) и из-за разложения части вне АТФ в почве. способа определе также не соба для лекаемог з почв сенного в 20 ние то го аде Цель изобретения - повности определения извлеказинтрифосфата. е О изобретение от я кмикробиологии и б ии,к определению сод р иифосфата в почвах.Известен способ определения количества извлекаемого аденозинтрифосфа та из почвы, включающий внесение навески аденозинтрифосфата в почву с по:ледующей экстракцией и определением аденозинтрифосфата в экстракте по люциферин-люциферазной реакции 1)Для этого в природные субстраты (глину, песок и т.д.) вносят раствор аденозинтрифосфата, экстрагируют аде нозинтрифосфат серной кислотой и затем определяют количество извлекаемо го аденозинтрифосфата. Сущность предлагаемого способазаключается в следующем.К навескепочвы 100 мг добавляют навеску лиофилизированной культуры .микроорганизмов (дрожжей или бактерий), содержащую 1-3 мкг аденозинтрифосфата. Затем аденозинтрифосфат экстрагируют 4-5 мл кипящей воды, центрифугируют полученный раствор и в супернатанте определяют аденозинтрйфосфат по люциферин-люциферазной реакции . Выход адейозинтрифосфата определяют с введением поправочного коэффициента по формулеХ=В:кгде Х - выход АТФ с учетом поправочного коэффициента;к - поправочный коэффициент, раный (а - 6)/С,а - количество АТФ в почве с внсенной культурой;791771 Формула изобретения Составитель М. МирзаевТехред Т.Маточка Корректор И.Муска Редактор Н. Спиридонова Заказ 9400/25 Тираж 522 Подпи с но.е ВНЙИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. / 4/5 4Филиал ППП "П тент" г . Ужгород, ул . Проектная,аФ н - количество АТФ в почве без .учета коэффициента 1с - количество АТФ, внесенное впочву в виде лиофилизиронанной культуры .Прим е р 1. К 100 мг почвы5 (вышелоченный чернозем) добавляют 1 мл раствора АТФ в концентрации 1 мкг/мл. Затем добавляют 4-5 мл кипящей воды и выдерживают 2 сизвлекают АТФ и определяют люциферин-люциферазным методом . Параллельно опреде ляют АТФ н почве. Количество АТФ составляет соответственно 0,32 и 0,30 мкг/г, т.е в почве произошел практическИ полный распад внесенного АТФ, попраночный коэффициент в данном 15 случае равен единице, Следовательно, известный способ определения АТФ в субстрате не может быть применен для оценки количества извлекаемого аденозинтрифосфата из почвы. 20П р и м е р 2. К 100 мг почвы (выщелоченный чернозем) прибавляют лиофилизированную культуру бактерий содержащую 1 мкг АТФ. Д.Лее все операции проводят как в примере 1, только в кипящей воде нанеску выдерживают 1 с. Количество выделенного АТФ из почвы с культурой составляет 09 мкг,а содержание АТФ н черноземе - 0,3 мкг. Попраночный коэффициент, рассчитанный по .приведенной выше формуле, раЗО вен О,б, а содержание АТФ в чернозеМе с учетом поправки - 0,5 мкг, вместо 0,3 мкг. П р и м е р 3, К дерново-подзолйстой почве (100 мг) добавляют лиофилизированную культуру дрожжей н количестве 3 мкг, выход АТФ равен 0,13 мкг а после введения поправочного коэффициента, равного 0,8-0,16 мкг.Таким образом, при внесении в почву аденозинтрифосфата в виде лиофилизиронанных культур микроорганизмов точность определения адвнозинтрифос-. фата повышается на 20-40. Способ определения количества из-. влекаемого аденоэинтрифосфата из почвы, включающий внесение нанески аденозинтрифосфата в почву с последую- щей экстракцией и определением аденоэинтрифосфата в экстракте по люциферин-люциферазной реакции, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности определения, навеску вносят в почну.в виде лиофилизиронанных культур микроорганизмов с известным количеством аденозинтрифосфата, перемешивают и обрабатывают кипящей водой в течение 1-2 с. Источники информации,принятые но внимание при экспертизе,1, Аоьвць В ТЬе оье оФ йЬе АТР,аььау 1 п Теггеьйга 1 Оесовроь 1 сопЬйод 1 еь, Вц 11. Есо 1. Веь, Совв7; 223-234. 1973.