Способ получения препарата для профилактики и лечения синегнойной инфекции

Союз Советских Социалистических Республик(088.8) по делам изобретений (43) Опубликовано 30.09.79. Бюллетень36 и открытий(45) Дата опубликования описания 30,09.79(71) Заявители И. А. Гришина, И, И. Колкер и Е. С. Станиславский Институт хирургии им. А. В. Вишневского и Московский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ СИНЕГНОИНОИ ИНФЕКЦИИИзобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к получению иммунологических препаратов, которые используют в медицине.Известен способ получения препарата 5для профилактики и лечения спнегнойпойинфекции путем отбора вирулентной культуры - возбудителя синегнойной инфекции,посева ее на питательную среду и инкубпрования с последующей дезинтеграцией 10микробных клеток, концентрированием полученной взвеси, выделением и очисткойцелевого продукта 11,Однако известный способ является трудоемким и не обеспечивает получения эффективного препарата.Цель изобретения - повысить эффективность препарата и упростить способ.Эта цель достигается тем, что отбираютнесколько вирулентных штаммов синегубойной палочки, различных по серотппу и выделяющих протеазы и нуклеазы, высеваютих на питательную среду, содержащую вдистиллированной воде 2,0-1-0,1 вес. % пептона, 1,0+ 0,1 вес. % глюкозы, 0,5+-0,1 вес, % 25хлористого натрия, 1,5+-0,1 вес. % агара,инкубируют в течение 2 - 3 суток, затемпосле концентрирования взвесь клеток автоклавируют в течение 50 - 60 мпн, выдерживают ее 45 - 46 суток прп 22 - 25 С и выделяют целевой продукт ступенчатой стерилпзующей фильтрацией через асбестовые пластинки СФ и свечи Ф 5 и Фт.Кроме того, отбирают вирулентные штаммы синегпойной палочки М 8,868, 1463, 37,951.Отбирают впрулентные штаммы сине- гнойной палочки, выделяющие протеазы и нуклеазы (желатпнозу, летпциназу, ДНК - азу, фпбринолизпн, уреазу, каталазу), коагулпрующие плазму и гемолпзпрующие кроличьи эритроциты, выделенные от больных с синегнойноп инфекцией по серотппу, относящиеся к наиболее часто встречающимся в клинике,Отбирают, например, пять штаммов8, 868, 1463, 968, 37, 1 оторые выделены от тяжелых ожоговых больных и обладают всеми вышеперечисленными свойствами.Культуры этих штаммов выращивают на косяках, Затем суточ 11 ые культуры смывают физиологическим раствором и засевают газоном на чашки с питательной средой следующего состава: 2 вес. % пептона, 1 вес. % глюкозы, 0,5 вес. % 1 ЧаС 1, 1,5 вес. % агара и остальное - дистиллированная вода, стерилизуют среду прп688195 Формула изобретения Составитель О, Малютина Редактор М, Кузнецова Техред Л. Орлова Корректор Р. БерковичЗаказ 2355/16 Изд. Мо 565 Тираж 681 ПодписноеНПО Поиск Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий113035, Москва, )К.35, Раушская иаб., д. 4/5 Типография, пр Сапунова, 2 0,5 атм. Поверхность питательной среды псред посевом покрывают стерильными целлофановыми дисками (целлофан марки100). Навески ингредиентов питательнойсреды производят в пределах + 0,1 г от 5указанных значений,ьашки, не перевертывая, ставят в термостат прп 37 С на 3 суток. При таком режиме происходит образование достаточнобольшого количества экстрацеллюлярных 10продуктов жизнедеятельности синегнойнойпалочки, Температура в термостате можетизменяться в пределах -+0,1 С, т. е. в пределах точности работы самого термостата,15По истечении указанных трех суток стерильным пинцетом снимают целлофановыедиски с культурой и слизью и переносят ихв колбу с нейтральным физиологическимраствором и стеклянными бусами. 20Колбу встряхивают 10 - 15 мин на Шутеле при скорости 240 качаний в минуту.Для освобождения раствора от гелеобразных остатков питательной среды егофильтруют через марлево-ватный фильтр. 25Доводят взвесь до концентрации 5 млрд.клеток в 1 мл по оптическому стандарту.Раствор автоклавируют при 1 атм(121 С) 1 ч.После автоклавирования фильтрат контролируют на стерильность, засевая 1,0 млфильтрата на бульон Хоттингера.Стерильный фильтрат выдерживаот45 - 46 суток при 22 - 25 С для аутоферментолиза. 35Через указанный срок раствор фильтруют через фильтр Сальникова (СФ) и затемчерез свечи Фз и ФСтерильный препарат выдерживают еще10 дней при 37 С, проводя контроль на 40стерильность. Температурный режим поддерживается в пределах +-0,1 С.Стерильный препарат разливают в ампулы по 0,1 мл и запаивают.Эффективность препарата. ,15Расчет: Общая доза иммунизаций побелку предлагаемого препарата1000 у на180 в 2 г веса животного, известного16,5 у на 18 - 20 г веса животного.Доза иммунизации на 1 г веса: предла гаемого препарата 5 у, известного - .0,825 у.Доза заражения предлагаемого препарата 200000 .Взо, известного - 10 - 20-Эзо На 1 г веса предлагаемого препарата - 1000 ЬРзо, известного - 1ЭзоИз приведенного расчета очевидна высокая эффективность полученного препарата.Предлагаемый способ позволяет получить препарат, вызывающий стойкий, антитоксический и антимикробный иммунитет,и удешевить его путем сокращения технологических операций и замены дорогостоящего оборудования и реактивов,1. Способ получения препарата для профилактики и лечения синегнойной инфекции путем отбора вирулентной культуры - возбудителя синегнойной инфекции, посева ее на питательную среду и инкубирования с последующей дезинтеграцией микробных клеток, концентрированием полученной взвеси, выделением и очисткой целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения эффективности препарата и упрощения способа, отбирают несколько вирулентных штаммов синегнойной палочки, различных по серотипу и выделяющих протеазы и нуклеазы, высевают их на питательную среду, содержащую в дистиллированной воде 2,0+-0,1 вес. % пептона, 1,0+0,1 вес. % глюкозы, 0,5-1-0,1 вес. % хлористого натрия, 1,5+0,1 вес. /, огара, инкубируют в течение 2 - 3 суток, затем после концентрирования взвесь клеток автоклавируют в течение 50 - 60 мин, выдерживают ее 45 - 46 суток при 22 - 25 С и выделяют целевой продукт ступенчатой стерилизующей фильтрацией через асбестовые пластинки СФ и свечи Фз и Ф 7.2, Способ по п. 1 отличающийся тем, что отбирают вирулентные штаммы синегнойной палочки8, 868, 1463, 37, 951,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Патент Франции22902110, кл. А 61 К39/02, 1976.