Способ культивирования плесневых грибов

сударственный комитет овета Министров СССРво делам изобретений и открытий ДЬ, 576,8(088.8) а ни я 28.03.78. М. Левандовская М нчаров, Е.М. Лукьяне ологии АН Казахской СС(71) Заявител Институт микробиологии и в 4) СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБ м.ду вц цесс состоит в слслуюльную пптателью ю 1Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к ферментной, и можст быть использовано при выращивании плесневык грибов, например, Азрегр 1- 1 цвп 1 оег шт. 355 с целью получения ферментных препаратов.Известны способы выращивания плеснсвык грибов путем внесения в жидкую питательную среду посевного материала с последующими аэрацисй и перемешиванием жидкой культуры.Недостаток этих способов заключается в том, что при ик использовании затрудняется извлечение из культуральной жидкости ферментов из-за необходимости ес фильтрации для освобожлсния от мелкораздроблснного мицслия и спор. При этом сама культура используется только в течение одного цикла периодического культивирования или постоянно вывочится цз культивирования при отборе, если процесс непрерывный.Известен также способ культивирования плсснсвык грибов в нитчато-губчатой структуре путем выравнивания на поверхности питательной среды с образованием в процессе выращивания пленки, из которой при опрелеленнык условиям формируется нитчато-губчатая структура мицелия, после чего культуральную жидкость огбирают для последующего выделения цз пее фермента,Такой способ позволяет использовать одини тот же мицелцй длительное время ц получить чистую, прозрачную, не требующую фильтра циц к льт ральную жидкость.Однако ц этот способ содсржцт ряд недостатков, снижающих эффективность использования нцтчато-губчатой структуры мццслия.Образование грибной пленки на поверхности среды проискодит за 170 ч, в течение ко О торык не производится извлечение активноговещества. В процессе аэрации воздух интенсивно подается под грибную пленку, плавающую на поверхности питательной среды. Опыты показали, что интенсивная подача воздуха под пленку разрушает сс, перемешивает с жидкостью ц образует обычную глубинную культуру с раздробленным мццслцсм.Целью изобретения является повышение выкола целевого фермента ц сокращение продолжительности процесса выращивания.Это достигается тем, что над поверкцостгиопитательной среды с образованием воздушного зазора размещают пористую подложку, прц этом значале вь 1 ращивацця питательную среду с посевным материалом разбрызгцвают на поверхность пористой подложки для выращивания на ней ццтчато-губчатой структуры м ицелия.Весь про ше30 На стерн срс осятСоставитель И. Привалова Тсхрсд И, Михайлова Корректоры: Л. Денискинаи Е. Хмелева 1 зсдактор М. Дмитриева Заказ 264/12 Изд. ЛЪ 314 Тираж 568 1-1 Г 10 Государственного комитета Совета Министров СССР но делаа изобретений н открытий 113035, Москва, Ж, Раугнскав нао., д. 4/5Подписное Тин 5 графи, пр. Сапунова, и посевной материал гриба и выращивают при заданных параметрах, Одновременно обеспечивают интенсивную аэрацию и перемешивание жидкой культуры, а также ее фонтанирование в наджидкостное пространство и равномерное разбрызгивание над поверхностью пористой подложки.Твердые частицы, содержащиеся в жидкой культуре, в том числе и комочки мшелия, оседая на поверхности каркаса, образуют равномерный слой биомассы, растущей как за счет псрссева сс из глубины акидкой культуры, так и за счет постоянного притока насыщенной кислородом питательной среды.110 слс иаступлснп 51 фазы Опосиптсти 1 сскои активности (срез 70 - 80 ч) процесс переводят па поток, т, е. начинают непрерывный отбор жидкой культуры па переработку из глубинной зоны с одновременным вводом равного количества свежей стерильной среды так, чтобы ферментативная активность культуры поддерживалась на постоянном уровне. Ввод свежей среды производят разбрызгиванием ее над поверхностью биомассы в воздушной зоне.При дальнейшем росте биомасса заполняет воздушный зазор между фильтрующим каркасом и поверхностью культуральной жидкости и погружается в нее на некоторую глубину. С целью ограничения дальнейшего роста биомассы и повышения ее биосинтетической продуктивности производят лимитацию снижением уровня аэрации или уменьшением в составе среды какого-либо компонента.Данный способ в три раза ускоряет формирование нитчато-губчатой структуры мицелия и уже через 70 - 80 ч после начала культивирования обеспечивает получение целевого препарата в потоке длительное время.Пр имер. Гриб Азрегп 11 Из пдсг (шт. 355) выращивают на питательной среде, состоящей из диффузионного экстракта виноградной выжимки 4,5% сахара, 0,05 - 0,07% оощего азота, 0,03 - 0,07% фосфора, рН 3,5). В качестве дополнительных источников азота и углеводов используют 1 г/л фосфорнокислого аммония и 1 г/л свекловичного пектина.Среду стерилизуют при 0,5 кг/см в течение 1 ч в качалочных колбах в объеме 0 3 л. В качестве пористой подложки используют пластину из поролона, установленную выше уровня среды на 2 см, Для контроля берут колбу без подлоя(ки, При встряхивании колб па качалке в колбе с подложкой происходят всплески жидкости, часть которой в виде брызг попадает на подложку.Через 70 ч псктипазная акт шность в колбах на качалке на одинаковом уровне и составляет 70 - 79%. Из обеих колб был начат отборкультуральной жидкости и ввод свежей средыпо 15 мл/час 10,05%). В колбе с подложкой5 весь мицелий был сосредоточен на ней, акультуральная жидкость была значительнопрозрачней, чем в колбе без подложки, гдемицслий в виде мелких шариков был распределен в массе жидкости. Еще через 94 ч ми 10 цслий на подложке пророс в глубь 5 кидкосгпв виде светло-коричневых прядей, культуральиая жидкость была совершенно прозрачной,а активность сс повысилась до 97 - 100%. Активность в контрольной колбе снизилась до15 55 60%; 5 кдкост 1, номуИсвпая, со слсдамиавтолиза мицслия. Через 3 сгОк активностьв коИгрольпой колбе упала до 20%, а и колбес подложкой продолжался некоторый ростмицслия; активность колебалась между 85 -20 95% и лишь через 38 =уток в связи с заражением посторонней микрофлорой культивирование его было прекращено.Выделение активного вещества из культуральной жидкости производят Осаакденисм25 этиловым спиртом в соотношении 5;1. Г 1 ервые2 суток после начала замены культуральнойакидкости средОй се псред Осаждсппсм фильтруют. Фильтрация жидкости из опытной кол.бы происходит быстрее, чем из контрольноь30 поч в 2 раза, Затем жидо из опытнойколбы перед осаждением пропускаОт черслмарлю для отделения крупных частиц, тогдакак из контрольной колбы 5 кидкость осветлястся плохо даже после фильтрации через бу 35 мажиый фильтр.Выход сухого препарата в опыте и контролесоставлял 1%, по активность в опытных образцах была в 1,5 раза выше,Формула изобрстснияС.О:Об культивпроваия плеснсвых грибо 1,например, Аврсго 111 пв п 1 исг путем выращивания иа поверхности питательной среды пленки культуры с образованием пз нес нитчато-гуо чатой структуры мицслия и отбора культуральной жидкосги для послсдующс:о выделения из нес фермента, отличающийся тем, что, с целью повышенИя выхода целевого продукта и сокращения продолкитсльностп про пссса выращивания, над поверхностью питательной среды с образованием воздушного зазора размещают пористую подложку, при этом в начале выращивания питательную сред с посевным материалом разбрызгивают на по всрхность порпсто 1 подложки для выращивания на псй пптчато-губчатой структуры мицс- ЛИЯ.