Способ обработки биологических образцов для криоультратомии

;Э оюз Советсиии оцивлистицеснии Республик(22) Заявлено 08.09.75 (21)2170786/13 1 Ииг 8 присоединением з3) Приоритет и енныи комииниотроа СС изобретениикрытий осудер Совета по дел иоблем криобиологии и к"помедицины АН Украинской ССР 1 ститу 1) Заявитель 54) СПОСОБ ОБРАБОТКИ БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБРАКРИОУЛЬТРАТОИИИ Л Изобретение относится х области ны и может найти применение в кр 1 гии для изучения функциональной ат ультраструктуры клеток и тканей,Известен способ обработки биоло ких образцов для криоультратомии п фиксации образца, пропитки его жел капсулирова 11 ия в желатине, обработ опротектором и замораживания 11,Однако известный способ являетс тельным и не обеспечивает получени ратонких срезов.Целью изобретения явлартефактов при резке срезов,едиции;атомии ичес угематиной,фр Иаа я длие ультяется уменьшение что в качест- полиэтиленокзец вначале затем чисри комнатнхлаждением емпературь тыо 900- ы -120 ь Эта цель достигается тем ве криопротектора использую сиди обрабатывают обт 50-60 Ъ-ным его раствором тым полиэтилепоксидомтемпературе с последу 1 ошим со ско ростдм 1 гряд/мин до о-5 -10 С, а затем со скоро 1000 гтлд/сок до 1 иературСпособ осуществляют следутощим образом. Перед нэ талом обработки ткань режут па образцы объемом пе более 1 мм . Затем с целью сохрэнения морфологической и химической структуры ткани ее фиксируют. Для фиксации применяют глутаральдегид илп четырехокись осмия в зависимости от цели исследования. После этого промывают в фосфатном буфере в течение 11-12 час при температуре 2-4 С. Затем образецопропитывают в 2-2,5%-ном растворе жела- тины в течение 3.-3.,5 час при температуре 36-37 С и заключают в 2-2,5 о-ный расйовор желатины при температуре 2-4 С. Затем образец обрабатывают полиэтиленоксидомв 50-60%-ном растворе в течение 3.5-20 имн при комнатной температуре, затем в 100%-ном растворе полиэтиленоксидав течение 25-30 мин при и той же температуре,Затем образец примораживают к съемному столу путем медленного охлаждения со скоРостоь 1 о 1 гРад/ми 11 До темпеРатУРы -5; -10 С, а, пач 1 шая с этой температуры ск:. рость зэк 1 оопживапия резко увелн 11 ивают8872 йй Составитель С. МалютинаРедактор О, Иванова Техред И, Асталош Корректор А. Гриценко Заказ 840/56 Тираж 11 01 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская набд, 4/5филиал ППП Патент", г. Ужгород, ул, Проектная, 4 3до 900 1000 грац/сек и таким образомобразу охлаждают до температуры -120 Ф.чь 150 С,П р и м е р . Биологическую ткань (роговицу глаза человека) перед началом обработки режут на образцы объемом 1 мм.Затем образец фиксируют глутаральдегидом(5%-ный раствор в 0,1 М фосфатном буфеуе в течение 1 час при температуре .13 С). Затем образец пропитывают в 2%ном растворе желатины в течение 1 часопрн температуре + 37 С и заключают в2%-алый раствор желатины при температуре+ 3 С. После этого образец обрабатываютополиэтиленоксидом 400 в 50% ном растворе в течение 15 мин при комнатной температуре, затем в 100%-ном растворе полиэтиленоксидав течение 30 мин при.той же температуре. После этого образецпримораживают к съемному столику путеммедленного охлаждения со скоростью 1град/мин до температуры -5 оС, а, начинаяс этой температуры скорость замораживания резко увеличивается до 1000 град/секи таквм образом образец охлаждают до;-150 С,Предлагаемый способ обработки биологических образцов полиэтиленоксидом при двухэтапном режиме охлаждения обеспечивает повышение эластических, свойств3 образца, вследствие чего получают ультра- тонкие высококачественные серийные срезы необходимой, толщины, что необходимо для выполнения качественного электронно-микроскопического исследования. формула изобретения 1 ф Снос 3 обработки биологических образцов для риоультратомии путем фиксацииобразца, пропитки его желатиной, капсулирования в желатине, обработки криопротектором и замораживания, о т л и ч а ю - 16 щ и й с я тем, что, с целью уменьшенияартефактов при резке срезов, в качествекриопротектора используют полиэтиленоксид400 и обрабатывают образец вначале 5060%-ным его раствором и затем чистым 20 полиэтиленоксидомпри комнатной температуре с последующим охлаждением соскоростьу 1 град/мин до температуры-,4 фд О С, а затем со скоростью 900-1000 град/сек до температуры -120) е 26 Ф -1 50 УС.Источники информации, принятые во внимание при экспертизе;1. кеес й "Рееее 1 спес 1 соес 61- че 11 ььое"-Эы Реч со птес 1 че Т 1 ььое 30 Ве 5. чав.6, й 4 - опс 1 о,1973,р.27-303.