Способ получения электронномикроскопических автографов

; "ф ";,СПИ САНИ Е ИЗОБРЕ 1 ЕНИЯ Сова Советских Социалистических Ресаубликвки М присоединением з Гасударственный комит 11 риоритет свет Министров СССо делам изобретений(531 УДК 771.5(088.8 убликовяно 05,10.75. ллетснь М и аткоытни ата опуоликованпя описания 31.05.76(72) Авторы изобретения К, М. Романовская и А. А. Манина Всесоюзный государ проектны институт х тинистои аствор истиленную го каотноИзобретение относится к способу получения элсктронномикроскопических автографов, которые могут быть использованы в медицине, биологии и технике для исследований способом электронной авторадиографии с применением меченых атомов.Известен способ получения электронномикроскопических автографов путем нанесения на биологический срез ядерной эмульсии, предварительно подвергнутой топкослойному се парированию для выделения твердой фазы эмульсии, с последу ющим экспонированием и проявлением.В этом случае первое созревание проводят в присутствии стабилизатора - ста-соли и 1. отделяют твердую фазу эмульсии методом тонкослойного сепарирования, проводимого в одну стадию.Введение стабилизатора в первом созревании эмульсии обеспечивает заданный размер 20 микрокристаллов галогенида серебра (0,08 мкм), но при этом снижается фотографическая чувствительность (3 - 4) 10 в " единиц почернения на 1 электрон с энергией В=75,6 кэв при толщине эмульсионного слоя 25 20 мкм.Малая чувствительность эмульсионного слоя требует длительных экспозиций, сопровождающихся процессом регрессии центров скрытого изображения, а также способствующих про текапшо процессов перекристаллизации микрокрпсталлов галогенпда серебра, что вызывает артефакты автографа.11 оэтому предлагаемым способом нельзя выявить метаболизмы ультраструктур клетки.Цель изобретения - увеличение разрешающей способности автографов, повышение фотографической чувствительности эмульсии, улучшение адгезии эмульсии к биологическому срезу, повышение эффективности фотографической обработки - достигается тем, что выделение твердой фазы эмульсии выполняют не менее, чем в две стадии, причем на первой стадии выделяют микрокристаллы галогеннда серебра, средний размер которых больше среднего размера мпкрокристаллов, выделяемых на второй стадии, п фотографическую обраоотку ведут при ( - 4) - (+8) "С.Для улучшения адгезии эмульсионного слоя к биологическому срезу в эмульсию обычно вводят смачиватель - додецнлгликолевый эфир пзооктилфенола. Г 1 р и м е р. Для получения мелкозер э.,ульсип приготавливают 2,9%-ный р предварительно набухшей желатины в д лпрованной воде, причем в расплавл желатпну вводят 6,3 г-моль/л бромисто лия и водный раствор аммированного а кислого серебра (5,3 г-моль/л),48368 Средний размер непроявленногомикрокристалла, мкм Чувствительность,единиц почернения на 1 электрон с энергией Е=76,6 кэв Число зерен Концентрация галогенида серебра в сухом слое, О.сия Исходная эмульсия типа М0,110 0,70 32,50,5 2,5 5 0 10 1,0 10 0,60 0,130 3,0 82,5 0,5 82,5 - 0,5 Первая Вторая 0,05 0,075 1,5 Предмет изобретения Составитель В. Матросов Редактор Т. Шарганова Техред И. Ханеева Корректор Л. Котова Заказ 1027/14 Изд. Л"в 56 Тираж 529 Подписное Ц 11 ИИПИ государственного комитета Совета Министров ССС 1 по лслам изобретений и открытий 113035, Москва, )К, Раушская наб., л. 4/5Типографпя, пр. Сапунова, 2 К раствору желатины при перемешивании (100 об/мин) прибавляют раствор азотнокислого серебра в течение 1 - 2 сек. Продолжительность физического созревания до 60 сек. После нейтрализации избытка иона аммония 30%-пым раствором уксусной кислоты доводят рН эмульсии до 4,7 - 4,9. Тонкослойное сепарирование проводят не менее, чем в две стадии.Сначала пропускают эмульсию через дозирующий ниппель размером 6,0 мм при скорости сепаратора 4500 об/мин. Затем повторно сепарируют выделяющийся фугат, пропуская эмульсию через дозирующий ниппель размером не более 3,0 мм при скорости сепаратора 7700 об/мин.На первой стадии сепарирования выделяют крупные микрокристаллы, на второй мелкие, но более однородные по размеру.Полученный на второй стадии сепарирования осадок галогенида серебра диспергируют в присутствии желатины и подвергают химическому созреванию при 50 С в кислой среде в присутствии золотохлористоводородной кислоты, роданида и тиосульфата натрия. 1. Способ получения электронномикроскопических автографов путем нанесения на биологический срез ядерной эмульсии, предварительно подвергнутой тонкослойному сепарированию для выделения твердой фазы .эмульсии, с последующим экспонированием и проявлением, отличающийся тем, что, с целью увеличения разрешающей способности автографов, повышения фотографической чувствительности эмульсии, улучшения адгезии Физико-химические и фотографические характеристики исходной эмульсии и первой и второй фракций сепарирования приведены в таблице.5 Перед нанесением второй фракции эмульсии на биологический срез ее разводят стабилизирующим раствором в соотношении 1: 10, после чего вводят смачиватель додецилгликолевый эфир изооктилфенола, 10 Эмульсии, изготовленные предлагаемымспособом, обладают высокой коллоидной устойчивостью и не склонны к процессу пере- кристаллизации несмотря на большую удельную поверхность микрокристаллов второй 15 фракции сепарирования, поскольку использована стандартная ядерная эмульсия типа М, в которой коллоидная устойчивость микрокристаллов оптимальна. Полученную эмульсию наносят на препаративную металлическую 20 сетку с предварительно положенным биологическим объектом, содержащим меченые атомы, экспонируют в холодильнике при +4 С в течение 10 - 15 суток для следовых автографов и до 25 суток для контрастных автографов, 25 пОсле чего проявляют при ( - 4) - (+4)С втечение 4 - 10 мин. эмульсии к биологическому срезу, повышения эффективности фотографической обработки, выделение твердой фазы эмульсии ведут не 30 менее чем в две стадии, причем на первой стадии выделяю. микрокристаллы галогенида серебра, средний размер которых больше среднего размера микрокристаллов, выделяемых на второй стадии, и фотографическую обра ботку ведут при ( - 4) - (+8)С.2. Способ по п, 1, отличающийся тем,что в эмульсию добавляют смачиватель додецилгликолевый эфир изооктилфенола.