Способ получения вещества эпи-

440899 Союз Советских Социалистических Реслублив(61) Зависимое от ав (22) Заявлено 27.02.73 видетельст(32) Приорите Государственный комнте Совета Министров СССР 3) У,:1,К 663,18ллетень2 публиковано 25.07,75 ата опубликования о ло делам изобретений и открытий(71) Заяаи ый научно-исследовательский химикоеский институт им. Серго Орджоники Всесоюзармацевт 4) СПОСОБ ПОЛУЧЕ ЕЩЕСТВ чение стероида можии ДМСО с помощью е измерисутс Изобретение относится к микробиологической промышленности.Известен способ получения вещества ЭПИ. путем трансформации ацетата вещества 5 Рейхштейна с помощью штамма 5 ТЫедегпе 1 а 1 туа 1 озрога в культуральной жидкости.При известном способе стероид предварительно растворяют в ацетоне, метаноле, этаноле или другом растворителе и в таком виде 10 вносят в культуральную жидкость для его дальнейшей трансформации.Однако для такого способа характерна низкая концентрация исходного стероида в культуральной жидкости. Увеличению концен трации стероида препятствует наличие в культуральной жидкости токсичных для микроорганизма растворителей, вносимых со стероидом.С целью повышения эффективности про цесса и увеличения исходной концентрации ацетата вещества Б Рейхштейна предложено это вещество вводить в культуральную жидкость в виде суспензии в диметилсульфоксиде (ДМСО). Суспензия представляет собой 25 частицы ацетата вещества Б Рейхштейна в диметилсульфоксиде размером преимущественно 3 - 20 мкм.Механическо чьно проводить в п тв30 любого известного способа: в фарфоровой ступке, с использованием шаровой мельницы для дезинтегратора. При этом получаются кристаллы величиной 3 - 20 мкм, которые доступны для ферментных систем микроорганизма.П р и м е р, Культуру гиба Т 1 т 1 едетпе 1 а Ьуа 1 озрога выращивают в течение 22 час в 400 мл среды в колбах с объемом 2 л при 28 С в среде следующего состава, %: куку рузный экстракт 5,0 (по сухому весу); сусло пивное неохмеленное 1,0 (сахара по шкале Беллинга - 14); сахар-рафинад 1,0; рН среды 6,0,В качестве инокулята используют споровую суспензию Т. Ьуаозрога.Засеянные колбы (3 колбы по 400 лтл среды) инкубируют на круговой качалке (220 об/ мин) до получения 7 - 8 г/л биомассы (в пересчете на абсолютно сухой вес мицелия).После этого культуральную жидкость стерильно переносят в лабораторный ферментер и разводят в 3,5 - 4 раза питательной средой ССследующего состава, %: К 2 НРО, 1,0; Мд 804 1 0 СЦ 804 0 001 ХпБ 04 0 001,Общий объем культуральной жидкости и среды ССсоставляет 5 л.Инкубацию в лабораторном ферментере продолжают до получения биомассы 3 - 4 г/л, после чего вносят стероид, который готовят следующим образом; к 7,5 г ацетата вещест440899 Составитель Л, Минеева Редактор А, Бер Техред 3. Таранеико Корректор И. Симкина Заказ 235/461 Изд.918 Тираж 529 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушскан наб., д. 4/5Тип. Харьк. фил. пред, Патент ва Ь Рейхштейна добавляют 12,5 мл ДМСО, 50 г ИаС и 50 мл дистиллированной воды. Смесь тщательно растирают в фарфоровой ступке и образовавшуюся пастообразную массу вносят в,культуральную жидкость для трансформации.Одновременно со стероидом вносят 25 г сахара-рафинада в виде 50%-ного стерильного раствора.Дальнейшую трансформацию проводят в тех же условиях (рН, температура), как указано выше, при расходе воздуха 0,2 л в 1 ман на 1 л культуральной жидкости,Окончание трансформации стероида определяют с помощью хроматографии в тонком слое. Выделение стероида после окончания трансформации проводят на ионообменной смоле известным способом. Получают 6,75 г продукта, удовлетворяющего техническим требованиям (выход 76,27 о от теоретического). 5 Предмет изобретения 1. Способ получения вещества ЭПИ-Р путем трансформации ацетата вещества Я Рейхштейна с помощью штамма ТЫедегпе 1 а 1 О Ьуаоврога в культуральной жидкости, отличающийся тем, что, с целью повышения эффективности процесса и увеличения выхода готового продукта, перед трансформацией ацетат вещества 5 Рейхштейна измельчают в 15 присутствии диметилсульфоксида и в культуральную жидкость вводят в виде полученной суспензии.2. Способ по п. 1, отличающийся тем, чтоизмельчение осуществляют до размеров час тиц, преимущественно 20 - 30 мкм.