Способ приготовления мазков-отпечатков лейкоцитов кожи

(28 51)5 6 ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(21) 478522) 24,0 Г 46) 23,0 (7) Сар институ 72) С.ГА,10, Бас 53) 616934/14 и уменьшение грал 1 гается тем, что н 1 сибилизируащук) оксален и эмульсинии 1;100, а иссле:. ют содержимое ырька, полученного ожу УФА-лаэерныл 1 ж/см . Способ понизить травматичвышение выхода клеток матичности, Цель даст кожу наносят фотосе смесь, содержащую мет онный крем в соотноше дованию подверга субэпидермального пуз путем воздействия на к излучением дозой 15 Д эволяет значительно с ность исследования за скарификации, а также выход клеток. 1,905,92. Бадал. М". 19атовский научно-исследо т сельской гигиены .,Утц, В.В.Тучин, Е,В,Ру рабанов0,88.8(088,8) ательский нцева МАЗКОВЖИедицине, аляется по 1 ЕНИ Я счет исполучить алыча 1 к медицине, аасается иэлучеИзобретение относитс именно к иммунологии, и ния миграции лейкоцитов. Целью изобретения я ние выхода клеток и уменьш ности. Способ осуществляют;54 СПОСОБ ПРИГОТОВЛГНИЯ ОТПЕЧАТКОВ ЛЕЙКОЦИТОВ КО (57) Изобретение относится к м именно к иммунологии, Целью я На внутреннюю поверхность предплечья размером 0,5 0,5 см втирают фотосенсибилизатор, содержащий эмульсионный крем и метоксален в соотношении 1:100. Через 30-60 . мин (время, необходимое для фотосенсибилиэации) производят облучение кожи.в месте нанесения фотосенсибилизатора лазерным излучением с длиной волны 320 - 400 нм УФА-диапазон), В качестве источника лазерного излучения может быть использован лазер ЛГИс длиной волны 337,1 нм и средней выходной мощностью 4 м Вт, Площас 12 ь участка облучения составляет 0,03 - 0,06 см, доза облучения - не менее 15 Джейсм,Выбор дозы облучения осуществляют по результатам предварительного исследования. Через 8 - 9 ч на месте облучения начинает формироваться очаг асептической воспалительной реакции, что проявляется в виде возникновения участка зритемы, Через 46-48 ч на месте облучения возникает субзпидермальный пузырек с диаметром, соответствующим площади участка облучения. Пузырек заполняется тканевой жидкостью (экссудатом), в которую мигрируют лейкоциты. Непосредственно после образования пузырька 48 ч) или через заданный интервал времени (например, 72 ч) пузырек М вскрывают стерильной иглой и из его содержимого готовят мазок-отг ечаток на стериль- (Д ное предметное стекло, предварительно обезжиренное в смеси Никифорова спиртйфир в пропорции 1;1),После высыхания при комнатной температуре мазок-отпечаток фиксируют в течение 3 мин 96 этиловым спиртам и окрашивают например, по Романовскому), препарат просматривают под микроскопом с иммерсией и подсчитывают 50-100 клеток,П р и м е р 1. Доброволец 24 года. Диагноз: практически здоров. В участок кожи на внутренней поверхности левого предплечья размерами 3,5 х 3,5 см внесен эмульсион1735739 Составитель Л,СтебаеваТехред М,Моргентал Корректор А.Осауленко Редактор С,Пекарь Заказ 1811 Тираж ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушскэя наб;, 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород. ул,Гагарина, 101 ный крем, содержащий метоксален, Через 1 ч было проведено облучение двух участков кожи лазерным облучением с длиной волны 337,1 нм (лазер ЛГИ) с дозой по 15 Дж/см 2. Кожа внутренней поверхности правого предплечья была обработана 3%- ной настойкой йода и спиртом, затемстерильным скальпелем произведена скарификация эпидермиса размером 0,5 х 0,5 см, Скарификат был покрыт стерильным предметным стеклом, которое было зафиксировано на руке пластырем.Спустя 8 ч на месте лазерного облучения появилась эритема, а через 46 ч после облучения - два субэпидермальных пузырьках,Мазки-отпечатки из радиационных пузырьков готовились: из одного - через 48 ч, из второго - через 72 ч после облучения, Мазки-отпечатки со скарификата готовились: первый - через 6 ч, второй - через 24В мазке-отпечатке по Ребук через 6 ч определяют большое количество нитей фибрина и клеточного детрита. Лимфоцитов 27 моноцитов 17 , гранулоцитов 81 о . Через 24 ч в мазке по Ребук отмечают высокую бактериальную обсемененность, что сделало невозможным подсчет качественного состава мазка.В мазке-отпечатке, полученном из радиационного пузырька через 48 ч: лимфоциты 0 , моноциты 29, гранулоциты 80, В мазке-отпечатке через 72 ч: лимфоциты 3%, моноциты 61%, гранулоциты 36 о , Клеточные элементы в мазках-отпечатках, полученных из радиальных пузырьков, сохраняют свои мембраны, детрит и бактериал ьн а я обсеменен ность отсутствуют.П р и м е р 2, Больной 30 лет, Диагноз: псориаз, стадия прогрессирования. В участок кожи размерами 3 х 3 см навнутренней поверхности левого предплечьянанесен эмульсионный крем, содержащийфотосенсибипизатор. Через 45 мин после5 фотосенсибилиэации в пределах фотосенсибилизированных участков было облученодва участка кожи диаметром 3 мм лазернымизлучением с длиной волны 337,1 нм с дозой10 Дж/см,10 На внутренней поверхности правогопредплечья было выполнено Ребук-тестирование по описанной методике,Результаты исследования. В мазках поРебук: через 6 ч ( фаза АВР) лимфоциты 1 ,15 моноциты 15 , гранулоциты 84 через 24ч ( АВР) лимфоциты 0 , моноциты 36 ,гранулоциты 64.В мазках-отпечатках из радиационногопузырька через 48 ч лимфоциты Оо , моно 20 циты 38 о , гранулоциты 60 о .Способ позволяет значительно повысить выход лигирующих клеток, а также значительно упрощает анализ за счет снижениятравматичности,25 Формула изобретения Способ приготовления мазков-отпечатков лейкоцитов кожи путем ее предварительной обработки с последующим 30 . изготовлением мазка из мигрирующих клеток, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода клеток и уменьшения травматичности, мазок готовят из секрета субэпидермального пузырька, при этом обработку кожи проводят в течение ЗО - 60 мин фотосенсибилизирующей смесью, содержащей метоксален и эмульсионный крем в соотношении 1;100, а субэпидермальный пузырек получают путем воздействия на ко жу УФА-лазерным излучением дозой 15Дж/см,