Способ определения удельного сопротивления цитоплазмы эритроцитов

(5)4 С 01 И 2 ЕНИ ИСАНИ ЬНОГО СООЦИТОВобласти быть ис- физико ОБ ОПРЕДЕЛЕН ИЯ ЦИТОПЛА 31 фЬ ретение отно н медицины ио для исследачеитс ожеанийд о ( 1 + -изме е х матери ЬК 1 юЬК ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТПРИ ГКНТ СССР АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(56) 21 шшегшапп ц., Сгочее М, ей а 1.Рече 1 оршепг оГ а пею Соц 1 гег сошесегзузгеш. Меазцгешепг оГ гЬе чо 1 цше,1 псегпа 1 соцдцсгдч 1 йч ап 6 Й 1 е 1 есгг 1 сЬгеа 1 доюш чо 1 га 8 е оГ а вдп 81 е яцагйа 11 ргогор 1 азг оЕ Чс 1 а-ЕцЬа.1. МацЬгапе В 1 о 1 оя, 1980, В 52,37 50 зобретение относится к биологии и медицине, в части проводимости биолог лов.Цель изобретения - упрощение измерений.Указанная цель достигается тем, что клетки обрабатывают поверхностно активным веществом (гепарин) в концентрациях, увеличивающих проводимость мембраны исследуемьм клеток до значений, близких к значению Прово" димости клеточной цитоплаэмы, процедура измерения объемов клеток повторяется еще раэ, а среднее значение удельного сопротивления цитоплаэмы клеток определяется по формуле 80151875 химических свойств цитоплаэмы эритр ,цитов. Целью изобретения является упрощение способа измерения удельно го сопротивления цитоплаэм эритроци тов. Проводят обработку суспензии эритроцитов поверхностно-активньпж веществами - гепарином, увеличивающими проводимость мембраны эритроци тов до значений, близких к значению проводимости цитоплазм. Измеряют объем эритроцитов кондуктометрическим способом до и после обработки и определяют удельное сопротивление цитодлазмы по формуле(1 +. где- удельное сопротивление раствора для приготовления суспенэии эритроцитов, 2 - фактор формы; ш= 6 Ко/ЬК 1 - отношение средних эн ний электрических объемов ДКО, д в присутствии гепарина и без него. где д - удельное сопротивление раст"вора для приготовления суспензииклеток; Г - фактор формы клеток, ш= дР ь/ДК; - отношение средних или модальным значений изменений сопротивления кондуктометрического датчика(так называемых откликов) при попадании в канал датчика клеток, пропор"циональных объемам клеток, при отсутствии и в присутствии поверхностно активных веществ. В случае, еслипараметр ш определяется както можно учитывать изменения объемов Ч и формы клеток в присутствии поверхностно-активных веществ, которые при этом должны определяться незави 5 симым, например микроскопическим методом,Вклад проводимости клеточной мембраны в отклик кондуктометрического датчика в случае его представления как я ейки гетерогенной среды может быть ;чтен посредством замены в формуле эффективного удельного сопротив 1 ления клетки )к на , +- . Приа 5 этом отклик датчика будет иметь следующий вид:где о К - изменение сопротивления датчика Р при попадании клетки в канал датчика (электрический объем клетки), (1 и Ч - объемы клетки и канала датчи ка, С ,и (3 - удельные сопротивления цитоплазмы клетки, ее мембраны и буферного раствора, Й - фактор формы клетки, а - эффективные радиус клетки (для сферы - просто ее ради 30 ус), 1 - толщина мембраны клетки (1 сс а),Изменение отклика кондуктометрического датчика в случае сохранения неизменными объема и формы клетки будет обусловлено изменением проводимости клеточной мембраны, поскольку удельное. сопротивление цитоплазмы клетки меньше сопротивления мембраныКонтроль объемов и формы клеток в присутствии поверхностно-активных веществ может быть выполнен методом оку 45 лярной микроскопии или микрофотосъемки.П р и м е р. К суспензии эритро-цитов человека дсбавляют гепарин в концентрации )0,3 мг/мл, с помощью кондуктометра измеряют сопротивление суспенэии, оно снижается после добавления гепарина в два раза, Проводят расчет пс формуле (2) и устанавливают, что проводимость мембраны эритроцитов увеличивается в присутствии гепарина более, чем вФормула изобретения Способ определения удельного сопротивления цитоплазмы эритроцитов, включающий приготовление суспензия, измерение объемов клеток кондуктометрическим методом, о т л и ч а ю - щ и й с я тем, что, с целью упрощения измерений, увеличивают проводимость мембран эритрсцитов гепарином до значений, близких к значению проводимости цитоплазмы, определяют удельное сопротивление раствора для приготовления суспензии, определяют фактор формы клеток, определяют отношение средних значений электрических объемов клеток до и после обработки, а среднее значение удельного сопротивления цитоплазмы определяют по формуле=го (1 + ),Гс - среднее значениеудельного сопротивления цитоплазмы,ь - удельное сопротивление раствора для приготовления суспензии;Г - .фактор формы клетокШ=Ю/6 К, - отношение среднихзначений э.чектрических обьемсн 1 Р,р,в присутствии гепарина и его ссутствии. где 70 раз, В расчетах фактор формы эритроцитов принимают равным Г = 1,3, а удельное сопротивление раствора80 Ом см и предполагают, что Р РоОценка удельного сопротивления цитоплазмы эритроцитов может быть получена согласно формуле (1), при этом она равна )с = 210 Ом см. Для удельного сопротивления цитоплазмы эритроцитов известно значение - 220 Ом см, которое согласуется с нашими данными.Положительный эффект предлагаемого способа измерения проводимости цитсплазмы клеток подтверждается тем, что позволяет проводить измерения на доступной коммерческой аппаратуре типа Коултера, к примеру на анализаторе нЬаЬогзса 1 е" венгерской фирмы нМедикор".