Способ количественного определения м ( ) в биологической жидкости

(51) 4 6 01 Х 24/1 О ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Сл л ф С 4 4 й ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ К АВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ(71) Иркутский государственный медицинский институт(56) На 1 з О. 1. Арр 1 са 11 опв о дгарЬ 11 е 1 цгапсе а 1 а 1 огпс аЬзогр 1 оп зрес 1 гогпе 1 гу 1 п сп 1 са апауз 1 з. - Аппа. Ргос., 1981, ч. 18,8, р. 344.СоЬп М. А з 1 цду о 1 Мапдапецз согпр 1 ехев Ьу Рагагпадпе 1 с Кезопапсе аЬзогр 1 юп.= Яа 1 цге, 1954, ч. 173,4414, р. 090.(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ Мп (11) В БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЖИДКОСТИ(57) Изобретение относится к области клинической биохимии и может быть использовано в медицине при количественном определении. парамагнитных металлов в биологических жидкостях, например в слюне человека. Цель изобретения - повышение точности. Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. 0,4 мл слюны помещают в пресс-форму, замораживают в жидком.ЯО, 1323934 А 1 азоте и анализируют на ЭПР-спектрометре. Предварительно строят калибровочную кривую путем растворения различной концентрации МпСЬ 4 Н 20 в дистиллированной воде и с добавлением 0,2 мл этого раствора к 0,2 мл раствора человеческого альбумина. Приготовленные растворы замораживают также в пресс-форме в жидком азоте и анализируют в идентичных условиях на ЭПР- спектрометре. Условия записи; уровень мощности СВЧ-излучения 10 дБ; Н 0=3500 Э; развертка 1600 Э; скорость развертки магнитного поля 100 Э/мин; ВЧ-модуляция магнитного поля 5 Э; постоянная времени 0,3 с. В спектре ЭПР полученных образцов при температуре 77 К выявляется четкая сверхтонкая структура из 6 линий, характерная для Мп(11). Форма спектра ЭПР при фиксации Мп(1) на человеческий альбумин идентична форме спектра ЭПР слюны при 77 К. Для подсчета концентрации Мп (11) в биологическом объекте методом двойного интегрирования производят количественную оценку интенсивности сигнала Мп(11). По калибровочной кривой определяют концентрацию Мп(11) в биологической жидкости, в частности в слюне.1323934 Изобретение относится к клинической биохимии и может быть использовано в медицине при количественном определении парамагнитных металлов в биологических жидкостях, например в слюне человека.Цель изобретения - повышение точности, Приготовление водного раствора Мп (11) в растворе человеческого альбумина и замораживание смеси в жидком азоте позволяют приблизить условия исследования Мп (11) в смеси по предлагаемому способу к нативным условиям нахождения Мп(11) в биологической жидкости и к условиям исследования, что повышает точность и объективность исследования,Способ количественного определения Мп(11) в слюне методом ЭПР осуществляют следующим образом. Приготавливают раствор Мп 1) в конце нтра ци и 7,Р,О- 1,0)(ОМ путем растворения МпС 24 Н 20 в дистиллированной воде и раствор человеческого альбумина (300 мг альбуглина в О мл дистиллированной воды). Так как количество альбумина, необходимое для полного связывания Мп(11) в растворе не известно, дригота вливают различной концентрации (5 - 200 мг в О мл дистиллированной воды) растворы альбу- мина и добавляют в них одно и то же количество (одинаковой концентрации 10М) раствора Мп(11). Проводят запись спектра электронного парамагнитного резонанса (ЭПР). Установили, что концентрация альбумина 75 мг на 10 мл дистиллированной воды достаточна для полного связывания Мп(11) в этом растворе (от указанной концентрации кривая выходит на плато),. Это же подтверждается н литературными данными. Известно, что количество альбумина в крови человека колеблется в пределах 30 - 50 г/л. Таким образом, концентрация альбумина 300 мг на 10 мл дистиллированной воды вполне достаточна для полного связывания Мп(11) в этом растворе.Для подсчета концентрации Мп (11) в биологическом объекте количественную оценку получают, проводя двойное интегрирование спектра ЭПР. По калибровочной кривой гопределяют концентрацию Мп (11) в биологической жидкости, например в слюне,Калибровочную кривую строят путемдвойного интегрирования площади сигнала 5ЭПР модельных растворов Мп(11).Условия записи спектров ЭПР: уровеньмощности излучения СВЧ (сверхвысокой частоты) 10 дБ; внешнее магнитное поле Но=3500 Э; развертка 1600 Э; скорость развертки 00 Э/мин; высокочастотная моду ляция магнитного поля 5 Э; постоянная времени 0,3 с.Согласно предлагаемому способу определили концентрацию Мп (11) у 17 пациентов.Концентрация Мп (11) в слюне М+-гп= =5,15+0,87 К 10 5 М. Колебания Мп (11) в слюне составляют 12,24(О- 0,90)(ХОМ.Пример. Донор Ч-на, 30 лет. Взяли0 млслкзны в пробирку, 0,4 мл слюны поместили в пресс-форму и заморозили в жидком азоте.Образец выдавили из пресс-формы, поместили в кварцевый сосуд Дьюара, последний установили в резонаторе ЭПР-спектрометра Рубин и провели запись спектра ЭПР.Концентрация Мп(11), рассчитанная по предлагаемому способу с использованием калиб ровочной кривой, составила 9,43 Х 1 ОМ(по способу-прототипу концентрация Мп (11) составля"т 4,0 я, О з М).Предлагаемый способ по сравнению соспособом-прототипом позволяет повысить точность и объективность определения в 30 - 50 раз.Формула изобретенияСпособ количественного определенияМп (11) в биологической жидкости путем регистрации спектров электронного пара- магнитного резонанса замороженного в З 5 жидком азоте исследуемого образца и контрольного водного раствора известной концентрации Мп (11) с последующей оценкой его содержания в исследуемом образце по калибровочной кривой, отличагощийся тем, 40 что, с целью повышения точности, контрольный водный раствор Мп(11) известной концентрации готовят в растворе человеческого сывороточного альбумина с последующим его замораживанием в жидком азоте.Составитель С. РыковРедактор А. Лежнина Техред И. Верес Корректор В. БутягаЗаказ 2959/48 Тираж 77 б ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий13035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4