C12N 15/12 — гены, кодирующие животные белки

Способ активации тканевого активатора плазминогена (его варианты)

Загрузка...

Номер патента: 1607689

Опубликовано: 15.11.1990

Авторы: Ральф, Райнер, Штефан

МПК: C12P 21/00, C12N 15/12

Метки: варианты, тканевого, активации, плазминогена, его, активатора

...в 0,1 ммоль/лтрис/НС 1 (рН 1 0,5), 1 ммоль/л ЕДТА,0,5 ммоль/л 1.-аргинина, 1 мг/мл ВВА.а) 1 ммоль/л СБН.Зависимость активности от концент 25 рации СВН представлена в табл. 5. Активность, % Таблица 5 СБН, Активность, Стнмулируемость30 (коэффициент) 0,511,522,53 72 134 207 261 204 237 14,9 15,3 13,3 12,5 2,1 239 273 193 198 17О 0 0,1 0,2 0,5 355 10 20 4 1985 141Зависимость активации от добавок пропионамида:Пропионамид, Активность,моль/л % б) О, 2 ммоль/л СБВС.зависимость активности от концентрации СВБС представлена в табл. 6. Та блица 6 Активность, Стимулиру% мость (коэффициент) СББС,ммоль/л Активность, %. 0,5 551 524. Зависимость выхода активности от величины рН.Повторное окисление в 0,1 моль/л трис/НС 1, 1 ммоль/л ЕДТА 0,5 моль/л...

Штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент активатора плазминогена тканевого типа

Загрузка...

Номер патента: 1662352

Опубликовано: 07.07.1991

Авторы: Гордон, Давид, Диане, Вильям

МПК: C12N 15/12

Метки: бактерий, продуцент, штамм, тканевого, еsснеriснiа, типа, плазминогена, активатора

...фильтр промывают, Полученные данные свидетельствуют о наличии одного гена активаторатканевого плазминогена в человеческом геноме.Реконструкция полной кодирующей последовательности возможна с примене нием обычного НЬа 1 участка рестрикционной эндонуклеазы, разделенного на два частичных клона рРА 17 и РА 25 Е 10. Из плазмиды рРА 17 вьделяют рестрикционный Фрагмент 55 п.о, Баи ЗА 1- НЬа 1, соответствующий аьянокислотам 5-23. Из плазмиды рРА 25 Е 10 выделяют фрагмент 263 п,о. НЬа 1-Иаг 1 (кодирующий аминокислоты 24-110) . Конструируют два синтетических деоксиолигонукле отида, которые реконструируют кодоныдля аминокислот 1-4, включают кодон инициирования трансляции АТС и создают ЕгоК 1 липкое окончание, Эти три Фрагмента затем связывают...

Способ получения кднк-клонов, кодирующих человеческий эритропоэтин

Загрузка...

Номер патента: 1672930

Опубликовано: 23.08.1991

Авторы: Родни, Эдвард, Кеннет

МПК: C12N 15/12

Метки: кднк-клонов, эритропоэтин, кодирующих, человеческий

...1 для разрушения сайтов Ряс 1 и сшивают с синтетическим ЕсоК 1-линкером 20 и рециркулиэуют (соэдавая ЕсоК 1- сайт в первоначальном сайте Ряг 1, 91023(В. Каждую из двух полученных плазмид 91023(В) и 91023(В ) переваривают ХЬа и ЕсоК 1 для получе ния двух фрагментов (Г и С). Путем соединения фрагмента С иэ плазмиды р 91023(В) и фрагмента Г из плаэмиды р 91023(В ), а также фрагмента С из плазмиды р 9 1023(В) и фрагмента Р 30 иэ плаэмиды р 91023(В) создают две новые плаэмиды,которые содержат либо сайт ЕсоК 1-РяГ 1, либо сайт РяГ 1-ЕсоК 1, где РяГ 1-сайт наиболее близок к основному позднему промотору аденовируса (р 91023(С1Вектор р 91023(С) ) гидролизуют ХЬо 1, липкие концы эатупляют с помощью ДНК- полимеразы 1, пришивают фрагмент НЫд Ц...

Рекомбинантная плазмидная днк ртнуз14, кодирующая полипептид со свойствами тимозина человека, рекомбинантная плазмидная днк ртну12 промежуточный продукт для ее конструирования и штамм бактерий еsснеriснiа coli

Загрузка...

Номер патента: 1707078

Опубликовано: 23.01.1992

Авторы: Добрынин, Амосова, Болдырева, Коробко, Филиппов

МПК: C12N 15/12, C12N 15/21

Метки: рекомбинантная, полипептид, человека, тимозина, штамм, ртнуз14, промежуточный, кодирующая, продукт, бактерий, плазмидная, днк, свойствами, конструирования, ртну12, еsснеriснiа

...ауо Гача т М; - .и. Э УГ эез :. 1 ан,леатдсд дып а якт . даг д- а знык ", ос 4 дамидитн ьнл методомпПОН. С 1 Чд 1 а УУИн; - , д эп;.;-ь 1 ечат 3- . - -,д 5 гч .".щью защ;щ чы,, , тПЬ, дхтр 1 та з пил 2 азси ул с: д, п 1:асед 1 ЗОПРОП,ГатУлича)-фаСФ 1 ТОВ Эт. В 1 Раданы тетрээплал С 1 уев предадет е масшта бе 0 5.0 7 мл 1 агь 1.п;,;ь уя в каче;тве час егя посистпа стеа (газмрр пар 500 А, размер частиц 40-8; лл) отаоол 1 у через13 .суцичатчу и связь гри-оед няют перваа нулеаз 1 д аа звечп 111 эгрузка 20 -.лсль, 11 с па "ьз уат "итрасотар м паг,е рад 1ач тенг э ииВедает ПраЫЬу .а ЛЬ СмрСЬ" ТЕТРИС ИД гафуран - пиридич - дода 5 3 2) После -о чания синтеза защитные гр)псы удаляют последовательной обработкой тиофено- ЛЯтаМ то 11 зт 1 Лаь...

Способ получения водорастворимой части человеческого рецептора малого сродства f

Загрузка...

Номер патента: 1727533

Опубликовано: 15.04.1992

Авторы: Хитоши, Эдвард, Тадамитсу, Масаки

МПК: C12N 15/12

Метки: рецептора, части, человеческого, малого, сродства, водорастворимой

...после элюации Ес й подвергают дальнейшей очистке при помощи жидкостной хроматографии с обращенной фазой. При этом свежеэлюированный материал подают на колонку С - 4 и подвергают хроматографии с использованием линейного градиента 0 - 65 Я, ацетонитрила. Ес В элюируется ацетонитрилом при концентрации 44 - 45 ,Активность Ес В, получаемая в результате жидкостной хроматографии на колонке С - 4, показывает одну полосу, соответствующую материалу с молекулярной .массой 25 кд, который проявляеточень высокуюактивность при проведении анализа методом эним. Следует отметить, что полоса 25 кд соответствует меньшему виду Ес В, который обнаруживается теми же моноклональ,5 юФОУ 25 пмолей каждого олигодеоксинуклеотида подвергают ренатурации и добавляют...

Способ конструирования рекомбинантной плазмидной днк, кодирующей зимоген с человека

Загрузка...

Номер патента: 1739854

Опубликовано: 07.06.1992

Авторы: Брайан, Нилс, Сау-Чи, Хармут

МПК: C12N 15/12

Метки: днк, кодирующей, конструирования, человека, зимоген, плазмидной, рекомбинантной

...хранятся под Р АТСС. СКЬ 9595. Клетки 293 выращивают в минимальной среде Игла с 103-.ной термоинактивированной лощадиной сывороткой прио37 С Гсреду меняют дважды в неделю).Среда состоит из Э МЕМ с 107 теля-.чьей сыворотки, 50 мкг/мл ентамицина 10 и 10 мкг/мл Агнца МЕРНУТОИ фитандиона витамина К 1, Клетки субкультивируют удалением среды, промывают раствором Хенка, прибавляют 0,257.-ныйтрипсин Гсодержащий 0,2 г/л ЭДТА) 15 на 1-2 мин, промывают свежей средой,отсасывают и распределяют в новыесосуды с отношением субкультивирования 1:5 или 1:10.За 1 день перед трансформированиемклетки высевают в количестве 0,х 10 бклеток на 100 мм чашку Петри, Стерильную, осажденную этанолом плазмиду ,ДНК растворяют в ТЕ-буфере и используютдля получения...

Способ оценки радиационного воздействия

Загрузка...

Номер патента: 1747490

Опубликовано: 15.07.1992

Авторы: Семухина, Белохвостов, Владимиров, Воскресенский, Шерлина

МПК: C12N 15/12, C12N 1/21

Метки: воздействия, радиационного, оценки

...добавляя 3 объема охлажденного до -20 С этанола, Осадок собирают центрифугированием, Полученный препарат ДНК вновь растворяют в малом объеме (0,1-0,2 мл) ТЕ-буфера (10 мМ трис-Н С (рН 8,0), 1 м М ЭДТА-Ма) и переосаждают еще один раз тремя объемами этанола. Очищенную низкомолекулярную ДНК растворяют в 20-30 мкл ТЕ-буфера, проверяют, нанося 2-3 мкл пробы на ПАГ для электрофореза и, убедившись в наличии ДНК, используют ее в качестве малого )Л-Фрагмента для конс-руирования рекомбинантной молекулы В 58. В качестве ВГ-формы ДНК бактериофага М 13 вр 8 берет препарат фирмы АгпегзЬаа (Великобритания) в концентрации 1 мг/мл. 2 мкг ЯГ-формы ДНК бактериофага М 13 гпр 8 смешивают с рестриктазой Япа (15 ед) в буфере 1(20 мМ КС,10 мМ трис-НС(рН 8,0),...

Рекомбинантная плазмидная днк рек 8, кодирующая фибринолизин yersinia реsтis, способ ее конструирования и штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент фибринолизина yersinia реsтis

Загрузка...

Номер патента: 1751206

Опубликовано: 30.07.1992

Авторы: Булгакова, Попов

МПК: C12N 15/12

Метки: фибринолизин, еsснеriснiа, плазмидная, рек, штамм, фибринолизина, днк, рекомбинантная, конструирования, реsтis, продуцент, бактерий, кодирующая, yersinia

...и подсушивают, Осадок растворяют в буфере для лигировдния (0,066 М трис-НС 1, рН 7,5; 5 мМ МЫС 2, 5 мМ дитиотрейтола и 1 мМ АТФ) с добавлением ДНК лигэзы фага Т(5 ед). Лигировдние проводят 10-12 ч при 16 С.1751206В, Анализ рекомбиыантыых плазмид и форм (ЗДТА) лиэоцим, Обломки клетоквыделение клона, несущего рекомбинанг- осаждают. Супернэтант, содержащийагоную плаэмиду рЕК 4, вые частицы, используют для заражения.Полученную смесь ДНК испольэуютдля Культуру Е, соИ К 802 (110 кл/мл) сметрвнсформации клеток Е. соИ К 802. Транс шиваот с 0,1 мл фаголиэата и инкубируот 1формировайные клетки подраи 1 иваот 1 чэс ч при 28 С, полученную смесь разводятв бульоне СВ и высевают на агэризировэн-бульоном 1.В в 10 раз и 0,1 мл высевают наную среду 1,В с...

Рекомбинантная плазмидная днк hrast =3, кодирующая онкоген hras=1 карциномы щитовидной железы человека, и способ ее конструирования

Загрузка...

Номер патента: 1815273

Опубликовано: 15.05.1993

Авторы: Никифорова, Голубков, Тотолян, Плужникова, Князев, Максимишина, Бабенко, Серова, Суворов

МПК: C12N 15/12

Метки: плазмидная, карциномы, hrast, железы, щитовидной, человека, конструирования, hras=1, рекомбинантная, онкоген, кодирующая, днк

...НВАЯ 1 размером 6,7 т.п.н, и ДНК вектора рЯР 64, линеаризованного эндонуклеазой Ваа Н 1, лигировали с помощью ДНК-лигазы Е, соИ, Полученной рекомбинантной ДНК трансформировали компетентные клетки Е. соИ НВ 101, Колонии, устойчивые к ампициллину, дающие положительную гибридизацию с рЕ 1 пробой, отбирали, выделяли ДНК и характеризовали ее рестрикционным анализом. На фото.1 представлены результаты электрофореза, с помощью которого определены размеры плазмиды рНВАЗТЬ-З, вставки ДНК онкогена НВАЯ 1 человека (дорожка 2) и вектора рЯР 64 (дорожка 4). На фото,2 изображена схема рекомбинантной плазмидной ДНК рНВАЯТЬ-З, иллюстрирующая расположение вставки ДНК онкогена НВАЯ 1 человека в векторе рЯР 64, промотора фага ЯР 6, полилинкера фага М 13 и...

Рекомбинантная плазмидная днк plt21, кодирующая полипептид со свойствами лимфотоксина человека, и штамм бактерий escherichiacol продуцент полипептида со свойствами лимфотоксина человека

Загрузка...

Номер патента: 1709731

Опубликовано: 30.07.1993

Авторы: Коробко, Шингарова, Филиппов, Янулайтис, Бумялис, Добрынин, Чумаков, Давыдов

МПК: C12N 15/77, C12N 15/12

Метки: полипептид, рекомбинантная, свойствами, днк, продуцент, plt21, полипептида, штамм, плазмидная, бактерий, человека, escherichiacol, лимфотоксина, кодирующая

...лимфотоксинэ человека . промывку смолы смесью тетрагидрофуранвплазмидой р Т 21 трансформируют момпв-пиридий- вода(5;3:2). После окончания синтентные клетки Е.со Ы 20050, . теза защитные группы удаляют последоеаПолученный таким образом цтамм тельной обработкой тиофенолятомЕ,со 3620050/р Т 21 характеризуетсяеле+ 55 триэтиламмония и конц, аммиаком. Придующими признаками. зтом происходит Отделение алигонуклеаотиМорфологические признаки, Клетки да от носителя. 5-Диметоксвтритильнуюмелкие, утолщенной палочковиднай формы, группу удаляют кислотной обработкой играмотрицательные. неспоронасныволигануклеотид бчищают электрофорозом в20% ПААГ, содержащем 7 М мочевину. Вы- Аликвоту реакционной смеси используют ход 1-5 о.е, для трансформации...

Способ получения последовательности днк, содержащей фрагмент, кодирующий человеческий проаполипопротеин а-1

Загрузка...

Номер патента: 1834904

Опубликовано: 15.08.1993

Авторы: Алекс, Эрнст, Жан

МПК: C12N 15/12

Метки: фрагмент, содержащей, днк, кодирующий, человеческий, последовательности, проаполипопротеин

...мет-проапо А - 1, если присутствие метионилового радикала фармацевтически приемлемо, т.к. данный продукт может быть естественным образом и эффективно превращен в ток циркулирующей крови натуральной пропептидазой, в аутентный зрелый человеческий апо А - 1, При желании, человеческий проапо Аможет быть продуцирован в отобранных микроорганизмах или клеточных культурах, которые способны воздействовать на М- концевой метионин, и, следовательно, способны продуцировать человеческий проапо Ав форме, не содержащей М-концевой метионин. Другими словами, человеческий проапо А - 1 содержит или не содержит 1 чконцевой метиониловый радикал, может быть расщеплен в условиях а ч 1 тго с обра зованием зрелого человеческого апо А, который может...