Патенты с меткой «рекомбинантная»

Рекомбинантная плазмидная днк, способ конструирования плазмидной днк и штамм-продуцент эндонуклеазы рестрикции

Загрузка...

Номер патента: 1130602

Опубликовано: 23.12.1984

Авторы: Солонин, Баев, Глатман, Мороз, Кравец, Таняшин, Кузьмин

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, эндонуклеазы, штамм-продуцент, рестрикции, рекомбинантная, конструирования, плазмидная, плазмидной

...цитритов. Желатцну не разжижают.Уреаэцая активность не обнаруживается. Ицдол не образуют.Устойчивость к антибиотикам. Проявляет устойчивость к ампициллину.Генетические признаки штамма:1 фЕсо НФ спи Есо цугес ВСэЪсВ,Г , гпу 1, 1 еп 6, рго А 2, Ьз 4,ГМ 1, агд Е, 1 ас 41, да 1 К 2, ага 14ху 1 5, шег, еэх.П р и м е р 1. Конструированиерекомбцнантной плаэмидцой ДНК р 1 ЬНЧ 86.Плазмцдную ДНК рЬКч 8 вьсцеляютиз штамма ВКИ ВД по методу(С 1 еюе 11, Не 1 пе 1 су, 1969, РНАЯ, 62,1159-1163) .2 мкг выделенной ДНК гидролиэуютрестриктазой Нжд 111 в 100 мкл раствора, содержащего 50 мИ трис-НС 1,рН 7,8, 10 мМ МИКСТ , 2 мМ 2-меркаптоэтанола, 20 мИ ИаС 1 при 37 ОС 1 ч.После прогревания реакционной смесипри 65 ОС в течение 10 мин проводятчкольцевание"...

Рекомбинантная плазмидная днк 435, кодирующая синтез днк лигазы фага т 4. способ ее конструирования и штамм. вкм в-1449-продуцент днк-лигазыфага т4

Загрузка...

Номер патента: 1122003

Опубликовано: 15.12.1985

Авторы: Трояновский, Баев, Таняшин, Солонин

МПК: C12N 15/00

Метки: штамм, лигазы, фага, рекомбинантная, конструирования, в-1449-продуцент, синтез, плазмидная, кодирующая, вкм, днк, днк-лигазыфага

...Е.со 1 С 600 с множественностью 1 в среде ЬВ (1 О г бактотриптона, 5 г дрожжевого экстракта, 10 г 11 аС 1 нал воды),зсодержащей 10 М МАЗО, Ливис клеток завершают добавлением в среду хлоро7 11 форма (1;100). После удаления обломков клеток центрифугированием (6000, 30 мин, 4 С) клеточные ДНК и РНК лизата гидролизуют одновременно панкреатическими ДНКазой и РНКазой (по 10 мкг/мл) при 20 С, 1 ч, Первичную очистку и концентрирование фага проводят с помощью полиэтиленгликоля 6000 (Зошашого К, Р ег а 1., Чт.го 1 огу, 40, 734-744, 1970). Окончательную очистку Фага проводят равновесным центрифугированием в 4 М СяС 1, 10 мМ трис-НС 1, рН 8,0, 0,01 М МяС 1 (И 1 яоп С. С. ег а 1., Мо 1 ес.Сеп.Сепег 156,203-214, 1977). Очищенный препарат фага АМ...

Способ маркирования 11-й хромосомы человека, рекомбинантная плазмидная днк 53 для маркирования, фрагмент геномной днк 53 для маркирования и способ получения фрагмента днк 53

Загрузка...

Номер патента: 1203108

Опубликовано: 07.01.1986

Авторы: Зайцев, Юров, Гиндилис, Шапиро, Яковлев

МПК: C12N 15/00

Метки: человека, фрагмент, хромосомы, 11-й, маркирования, днк, плазмидная, рекомбинантная, фрагмента, геномной

...от анодной каме Оры диализной мембраной. Нижний крайцилиндра с фильтром опускают в катодную камеру;обе электродные камеры заполняют буАером,содержащим 89 мМ"тгйе НС 1,89 мМ Н ВО и 5 мМ ЕЭТЛ1 рН 8,3. Электрофильтрацию растворапроизводят при 5 мМ/см в течение 6-8 ч.После электрофоретического осаждения ДНК на фильтре жидкость удаляют из цилиндра, а желеобразныйслой ДНК растворяют в нужном объеме0,1 чТЕ,Для выделения препаративных количеств плазмидной ДНК культуру Е.со 1, несущую плазмиду, выращивают в25 100 мл среды В (10 г/л пептона, 5 г/л дрожжевого экстракта, 10 г/л ИаС 1) с добавками необходимых антибиотиков (100 мкг/мл ампицилина, 20 мкг/мл тетрациклина и 50 мкг/мл хлорамфеникола) при 37 С на качалке в течение ночи. Клетки...

Рекомбинантная днк и способ ее получения

Загрузка...

Номер патента: 1250575

Опубликовано: 15.08.1986

Авторы: Семенова, Петренко, Ильичев, Татьков

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, рекомбинантная

...фермецтативную активность-галактозидаэы.П р и м е р. Лвухцепочечную кольцевую ЛНК МЗгггр ЯЯР 0212 выделяют из штамма бактерий Евс 1 гегсЬа со.1. ,гп 103, трансформированных этой ДНК и очищают пентрцфугированием в градиецте плотности хлористого ггезия.Гоответствие ЛНК приписываемой структуре подтверждают анализом продуктов Фермецтативного гидролиза ЛНК рег триктазами ЕсоК 1 Рв 1 и Ба 1 С 1, Продукты гидролиза, фрагменты ЛНК разчичцой протяженности, идентифицируют по их подвижггости в 67,-ггом полиакриламидцом геле в сравнении с зтаггоцными фрагментами Вэр 1 - гидролизата плазмиды рВ 1 321, Наблюдают образование фрагментов длиной около 300 и 500 пар цуклеотидов (п.н.), что соответствгет следующей ожидаемой схеме гилролиза: ЕсоВ...

Рекомбинантная плазмида 5, способ ее конструирования и штамм. 600 5 -продуцент сайт-специфической эндонуклеазы п

Загрузка...

Номер патента: 1294824

Опубликовано: 07.03.1987

Авторы: Крамаров, Смольянинов, Прохорова

МПК: C12N 15/00

Метки: продуцент, сайт-специфической, рекомбинантная, плазмида, эндонуклеазы, штамм, конструирования

...роторе 50,2 Тх. Зону, соответствующую сверхспиральной ДНК, отбирали, бромистый.этидий экстрагировалиизопропанолом, плазмидную ДНК осаждали этанолом, осадок растворяли в0,5 М ИаС 1 и дополнительно очищалиДНК-хроматографией на колонке с Биогелем А, Фракции, содержащиеДНК, объединяли, ДНК осаждали добавлением 2 объемов этанола, осадок отделяли центрифугированием, растворяли в НО и в таком виде использовалив дальнейшем. ДНК Р. стц 1 яаг 3.з выделяли после лизиса клеток лизоцимом,. как описано вьппе, с последующей фенольной деротеинизацией. После обработки фенолом водную фазу, содержащую ДНК, диализовали против 0,01 Инатрий-цитратного буфера (рН 7,5)инкубировали 5 ч при 25 С 50 мкгпанкреатической РНК-азы, затем вновьобрабатывали равным...

Рекомбинантная плазмидная днк уе psg94, кодирующая синтез производного белка оболочки вируса лейкоза крупного рогатого скота, способ ее конструирования и штамм дрожжей sасснаrомuсеs cererrial-продуцент производ

Загрузка...

Номер патента: 1337408

Опубликовано: 15.09.1987

Авторы: Ланг, Брантл, Рослер, Скрябин, Баев, Эльдаров, Розенталь

МПК: C12N 15/00

Метки: дрожжей, вируса, sасснаrомuсеs, оболочки, штамм, кодирующая, производного, лейкоза, cererrial-продуцент, конструирования, синтез, белка, крупного, днк, скота, рекомбинантная, производ, psg94, рогатого, плазмидная

...пентрцфуировлттця аглдокклеток сусценпцруют в том ж суфрав концентрации 3 х 10 клток/ьтцц,К 200 мл сусцензиц к:теток прибавляют 20 мкг плдзмидной ПНК УЕр 809 тк тОО мкл 507, раствора П.Э.1 . 4000выдерживают 1 ч при 30 мин. Пос.те0инкубируют 5 миц при 42 С. Суспензгттоосаждают пентрцфугированием 1 О с прц1 О тыс. аб./мин. Осадок сусцендцруют в 300 ыкл воды и высевяют цо100 мкл на часики с твердой се:тектив - )Внай средой (0,67 Х дрожжевых азотистых оснований, 2 Ж глюкозы, 20 мпт/лгистидицл, 22 бактолгара),Колонии трансформацтов поятляютсяца 2- децт пос:те пасетов)тот:. - 20чг.кую стлбклтность плазмцдь тЕРВС 94в трацсформацтах определяют клк процент клеток, сохранивших плазктдупри росте в селективных условкяхминимальной среде без лейпкттд,...

Рекомбинантная плазмидная днк рсек 10, кодирующая синтез фрагмента кленова днк-полимеразы 1 е. coli, и способ ее конструирования

Загрузка...

Номер патента: 1392094

Опубликовано: 30.04.1988

Авторы: Кравченко, Кузнеделов, Нетесова, Дегтярев, Петренко, Ривкин

МПК: C12N 15/00

Метки: кодирующая, синтез, кленова, coli, конструирования, днк, рсек, фрагмента, рекомбинантная, плазмидная, днк-полимеразы

...фрагменты ДНК электрофорезом в 47.-ном полиакриламидном геле. Гель окрашивают в растворе бромистого этидия 2 мкг/мл, вырезают из геля зону, содержащую векторную часть ДНК плазмиды рСЕЕ 12, и выделяют ДНК из геля методом электроэлюции. 10 мкг плазмидной ДНК рС 155 гидролизуют 20 ед. рестрикционной эндонуклеазы ВашН 1 в 100 мкл буфера для гидролиза, содержащего 20 мМ трис-НС 1 рН 7,8, 10 мМ МяС 1, 50 мМ МаС 1, 2 мМ 2-меркаптоэтанола, при 37 С 1 ч. В полученную реакционную смесь добавляют 25 ЙАТР, ВСТР, ЙСТР и ТТР, до 0,05 мМ каждого, 10 ед. ДНК-полимеразы 1 и инкубируют 30 мин при 12 С. Реакцию останавливают добавлением Иа ЭДТА до концентрации 20 мМ, белок удаляют экстракцией водным фенолом, рН 8,0 и ДНК трижды переосаждают...

Рекомбинантная плазмидная днк ptur1-6 для идентификации межиндивидуального полиморфизма днк человека и способ ее получения

Загрузка...

Номер патента: 1463760

Опубликовано: 07.03.1989

Авторы: Рогаев, Шапиро

МПК: C12N 15/00

Метки: человека, плазмидная, полиморфизма, идентификации, межиндивидуального, рекомбинантная, днк, ptur1-6

...ДНК-дезокситрифосфатов и рольной чашке и на идентичные места 5 е.а. ДНК-полимеразы 1. Реакционную на круглый нитроцеллюлозный фильтр смесь, имеющую конечный объем 100 мкг, диаметром 8,5 см, лежащий на поверх инкубируют 20 мин при комнатной темности агара с тетрациклином (Тс) во пературе и 2 ч при 1 О С. Удельная второй чашке. После подращивания ко- активность меченых препаратов составлоний при 37 ОС 15 ч контрольную чашку ляет 6,8 10имп/мин/мкг. На каждый хранят при 4 С в перевернутом поло- фильтр суммарно наносится 4:10имп/ жении, а бактерии на нитроцеллюлозиом 45 /мин меченого препарата ДНК, фильтре лиэируют. Для этого каждый Гибридизацию проводят при 42 С фильтр помещают на поверхность бума ч, Затем фильтры отмывают в двух ги 3 мм,...

Рекомбинантная плазмидная днк 33, кодирующая метилазу s 11, и штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент метилазы s 11

Загрузка...

Номер патента: 1532585

Опубликовано: 30.12.1989

Авторы: Дебов, Грубер, Поляченко, Никольская-Санович, Карягина, Лопатина, Лунин

МПК: C12N 15/00

Метки: еsснеriснiа, плазмидная, кодирующая, штамм, днк, метилазы, метилазу, бактерий, продуцент, рекомбинантная

...Бяо 11 в клетках, несущих плазмиду с 1 33, не происходит.Плазмидную ДНК о 33 подвергают рестрикционному анализу.Характеристика штамма.2585 6Е. со 1, трансФормированных плазми"дой й 33.ШтаммТ 15 чения характера метилирования Яяо 11 20 25 30 40 45 50 55 5 153Клетки прямые, палочковидные, неподвижные, грамотрицательные, лактозопозитивные. При рассеве на чашкис 1,3%-ным МПА рост в виде отдельных,колонии, иногда в К-форме с неровными5краями. Хорошо растет на плотных ижидких питательных средах (МПА, МЛБ,1.В-бульон и ЬВ-агар).Физиолого-биохимические признаки,сКлетки растут в пределах 4-45 Спри оптимуме рН 6,8-7,5. Штамм разлагает глюкозу, лактозу, маннит с образованием кислоты, не .разлагаетсахарозу, сбраживает мальтозу, ксилозу,...

Рекомбинантная плазмидная днк 24, кодирующая синтез рестриктазы и метилазы s 11 и штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент рестриктазы и метилазы s 11

Загрузка...

Номер патента: 1539205

Опубликовано: 30.01.1990

Авторы: Лунин, Лопатина, Никольская-Санович, Грубер, Дебов, Карягина, Поляченко

МПК: C12N 15/00

Метки: метилазы, рестриктазы, плазмидная, кодирующая, бактерий, продуцент, рекомбинантная, штамм, синтез, днк, еsснеriснiа

...при 10000 я 15 мин, затем 1 О мкл супернатанта добавляют впробу, содержащую 1 мкг бактериофага 3 в 10 мкл буфера А. Пробу инкубируют 1 ч при 37 С, после чегоанализируют электрофорезом в 1,2 Еном агарозном геле. Картина рестрикции в случае штамма Е, со 1 Р 8200,несущего плазмиду с 1 24, характерназля рестриктазы Бзо 11.1 мкг плазмидной ДНК й 24, выделенной из штамма Е.со 1 Р 8200, обрабатывают 1 О ед. рестриктирующей эндонуклеазы Бво 11 в буфере А в течение 2 ч при 37 С. Электрофорез показывает, что ДНК плазмиды й 24 при такой обработке не фрагментируется, вто время как плаэмида р 11 С 19 даеткартину гидролиза, типичную для плазмиды рЦС 19, обработанной рестриктаэой Бво 11. Эти данные свидетельствуют о защите мест узнавания...

Рекомбинантная плазмидная днк pbg м3, определяющая синтез эндонуклеазы рестрикции с bi

Загрузка...

Номер патента: 1573026

Опубликовано: 23.06.1990

Авторы: Фролов, Тарутина, Солонин, Глатман, Васюренко, Кравец, Кузьмин

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, эндонуклеазы, рестрикции, рекомбинантная, плазмидная, синтез, определяющая

...штамма Е. со 11К 802, трансформанты подращивают 2 чв бульоне 1,В инфицируют фагом р 801 г9с множественностью заражения 10 ивысевают на агаризованную среду, содержащую 50 мкг/мл ампициллина, Изклонов, резистентных к ампициллину,выделяют плазмидную ДНК рВС МЗ известными способами,Проведен анализ наличия рестриктазы сГгВ 1 в клетках Е, со 1 ь.Для этого клетки Е. со 11 К 802//рВС МЗ выращивают в 10 мМ 1,В бульона до поздней логарифмической стадиироста, собирают центрифугированием,ресуспендируют в 5 мл буфера В, (10 мМтрис НС 1, рН 7,5, 50 мМ НаС 1, 10 мМЭДТА 10 мМ 2-меркгптоэтанола), раз-.рушают ультразвуком, центрифугируютпри 6000 об/мин 1 ч для освобожденияот клеточных обломков,Для определения активности готовятразведения экстракта в...

Рекомбинантная плазмидная днк pmg 16 для обнаружения микроплазменных заражений

Загрузка...

Номер патента: 1413960

Опубликовано: 07.09.1990

Авторы: Меркулова, Борхсениус, Чернова

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, заражений, рекомбинантная, микроплазменных, плазмидная, обнаружения

...рКК 3535, несущей рибосомный оперон ггп В Е.со.Плазмиду рМя 16 получают врепаративных количествах и очищают в градиенте плотности 1 в 11.П р и м е р 2, ДНК клеточньм культур выделяли стандартными методами, для этого собирают клетки МХ и Не Ьа, и предполагаемых микоплаэм цеитрифугированием культуральной жидкости при 10000 об/мин 30 мин.Оказалось, что плазмида рМ 16 не гибридизуется с ДНК эукариот, не контаминированных микоплаэмами, что является необходимым условием ее применения.Оказалось также, чтс с помощью ДНК гибридизации с рМя ,6 можно уловитьнг ДНК микоплазмы, что соот 5ветстнует .1 О инфекционных частиц. Известно, что в 1 ил культуральной жидкости клеток, культивируемых 1 п ч 1 Сго при микоплаэменной инфекции,всодержится 10 -...

Рекомбинантная плазмидная днк pifn тrр, кодирующая синтез человеческого иммунного интерферона

Загрузка...

Номер патента: 1433019

Опубликовано: 15.09.1990

Авторы: Царев, Виноградова, Ростапшов, Арсенян, Мелков, Овчинников, Ершов, Новохатский, Монастырская, Чернов, Свердлов, Кузнецов, Аспетов, Честухин, Крыкбаев

МПК: A61K 38/21

Метки: человеческого, синтез, т"рр, днк, плазмидная, кодирующая, иммунного, рекомбинантная, интерферона

...буфере.Х 1 мкг полученного фрагмента до 50бавляют 0,1 мкг синтетических олигодезоксирибонуклеотидов, полученныхпутем химического синтеза, 2 мкг выделенного электроэлюцией большого, ЕсоВ 1-Рв 1 фрагмента рВВ 322 с триптофановым промотором и лигируют вприсутствии .10 ед ДНЕ"лигазы Фага Т 4в растворе, содержащем 0,5 мМ АТР и,буФер, состав которого был приведен вьппе .Лнгазной смесью трансформируют компетентные клетки Е,со 11 К 12, которые высевают на чашки, содержащие ЬВ-агар с тетрациклипом. Из полученных клонов выделяют плаэмиды и структура встроенных генов подтверждается рестриктным анализом н спквенсом.Полученную генно-инженерную конструкцию анализируют по эффективности синтеза иммунного интерферона после трансФормации...

Рекомбинантная плазмидная днк рук11, кодирующая рестриктазу и метилазу е corii, способ ее конструирования и штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент рестриктазы и метилазы е corii

Загрузка...

Номер патента: 1453896

Опубликовано: 30.09.1990

Авторы: Косых, Витенене, Бурьянов

МПК: C12N 15/00

Метки: метилазы, днк, рестриктазы, рук11, бактерий, продуцент, плазмидная, рекомбинантная, кодирующая, еsснеriснiа, штамм, метилазу, конструирования, corii, рестриктазу

...штаммаЕ, соН В 834(рС 857),обусловлен тем,что штамм не содержит интерферируюих с ферментами Есо КП примесей исодержит плаэмиду с геном термочувст Овительного репрессора с 1 фага ляйбда,Содержаний рестриктаэы и метилазцЕсо К 11 в сконструированном штаммеравно 500000 ед, каждого фермента наг сырой биомассы клеток,Штами ЕвсИехсЫа со 1. ВКИ СК 2889 характеризуется следующими признаками;Иорфологические признаки.6 6ную как р 7 К 11 и содержащую в своем . составе трк фрагмента, которые обра,зуются при гидролизе плазмидной ДНК эндокуклеаэой рестрикции Рве 1Выделенную .ДНК р 7 К 11 трансформируют в штамм Е. со 11 В 834/рС 1857 Трансформаиты отбирают на среде, содержащей ампицкплин (50 мкг/мл) и канамкцин (25 мкг/мл). Плаэмида РС 1857 несет...

Рекомбинантная плазмидная днк рек-7-днк-зонд для идентификации штаммов чумного микроба,несущих плазмиду пестициногенности, способ ее конструирования и штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент днк-зонда для иде

Загрузка...

Номер патента: 1615181

Опубликовано: 23.12.1990

Авторы: Попов, Булгакова

МПК: C12N 15/31, C12Q 1/68

Метки: микроба,несущих, продуцент, днк, идентификации, рекомбинантная, иде, штаммов, пестициногенности, конструирования, еsснеriснiа, плазмидная, рек-7-днк-зонд, бактерий, днк-зонда, плазмиду, чумного, штамм

...Злюат экстрагиру ют Фечолом, хлороформом и обрабатываю эфиром. ДНК плазмиды рАТ 153(10 мкг) подвергают гидролизу рестриктазами Ипд 111 и ВапН 1 по методике, описанной ныше. Больший 15 (3,3 т.п,н,) из двух полученных в результате гидролиза фрагментов извлекают из геля. электроэлюцией. Злюаточищают от примесей агарозы и смешивают с злюатом, содержащим Нлпс 1 111- 20 "ВапН 1 - ррагмент рРзс, ДНК осаждают 96 Е-ным этаколом, промывают 70 Еньм зтанолом и подсушивают, Осадокрастворяют н буфере для легирования(5 ец,), Легирование проводят 1012 ч при 16 С.В. Анализ рекомбннактных плазмид 30 и получение штамма - продуцента Р 1- зонда для диагностики штаммов чумногомикроба,хлорамфениколом (С = 20 мкг/мл).ДНК плазмид рРзС и рАТ вьделяют.Клетки...

Рекомбинантная фаговая днк ра мз, кодирующая синтез слитого белка ангиогенин -пептид -галактозидазы и способ ее конструирования

Загрузка...

Номер патента: 1552645

Опубликовано: 15.01.1991

Авторы: Горн, Зарытова, Мартвецов, Коваленко

МПК: C12N 15/00

Метки: слитого, синтез, конструирования, кодирующая, мз», фаговая, ангиогенин, пептид, рекомбинантная, днк, галактозидазы, белка

...для трансфекции.Компетентные клетки для трансфекции готовят следующим образом, Клетки Е,со 11 Л(103 иэ 50 мп среды 2 х УТ (16 г триптона, 10 г дроскеного экстракта, 5 г МаС 1 на 1 л воды) при тит-Мре 5;10 кл/мл осаждают центрифугированием, ресуспендируют в 25 мл сте-, рильного 50 пИ СаС 1 при 0 С, вновь Осаждают 10 мии 5000 я при +40 С, ре" суепендируют н 3,6 мп 50 11 СаС 1 при ОС, инкубрунт 30 мин при 0 С. К 200 мкл клеток добавляют 20 нг геТЕРОДУПЛЕКСНОй ДИ:(, инкубируют ЗО мин при 0 С, затем прогренают 2 мнп при 42 С, добавляют 200 мкл экспоненциальной Л 1103, 40 мкл 2% 7-яа 1 и 10 мкл 0,1 И 1 РТС и с 3 мл верхнего агара высенают на чашку с нижним ага" ром. Чеоез 12 ч образонынаются синие и белые колонии, Среди 603 белых колоний было...

Рекомбинантная плазмидная днк 36к-pvh, кодирующая синтез иммуногенного белка 36к вируса осповакцины штамма ливп, и штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент этого белка

Загрузка...

Номер патента: 1661215

Опубликовано: 07.07.1991

Авторы: Чикаев, Рязанкина, Щелкунов, Малыгин, Муравлев, Чешенко

МПК: C12N 15/38, C12N 1/20

Метки: плазмидная, штамм, еsснеriснiа, вируса, бактерий, рекомбинантная, осповакцины, белка, штамма, этого, ливп, продуцент, синтез, 36к-pvh, кодирующая, днк, иммуногенного

...от 35 вет в гибридизации с Р-зондом, выделяют32плазмидную ДНК, обозначенную 36 К-рчН,содержащую в своем составе фрагмент вирусной ДНК 1029 п.н. с геном белка 36 К,Анализ совпадения рамок трансляции40 гена ас 7 и гена белка 36 К в клонах, содержащих рекомбинатную плазмидную ДНК,осуществляют с помощью доказательствасинтеза этими клонами химерного белка смол, м. 145 - 150 КД, Для этого клетки из45 отдельных клонов, дающих положительныйответ в реакции гибридизации с Р-зондом,32высевают в 5 мл .В, содержащего 40 мкг/млампициллина, и растят в течение 16 ч. Затем0,35 мл ночной культуры вносят в 0,5 мл50 свежего ЬВ, содержащего 40 мкг/мл ампициллина, растят до плотности суспензии0,6-0,7 ОЕ/мл при 600 нм и добавляют...

Способ выявления парвовируса свиней, рекомбинантная плазмидная днк ppv4, используемая в качестве гибридизационного зонда для выявления парвовируса свиней, и рекомбинантная плазмидная днк м13ppv, используемая в

Загрузка...

Номер патента: 1664831

Опубликовано: 23.07.1991

Авторы: Забережный, Коромыслов, Артюшин

МПК: C12Q 1/08, C12N 15/35

Метки: парвовируса, выявления, зонда, днк, ppv4, м13ppv, плазмидная, качестве, свиней, рекомбинантная, используемая, гибридизационного

...аналогично примеру.Проводят трансформацию клеток Е.соИ )м; отбирают клоны, устойчивые к ампициллину и имеющие нарушенную активность ф -галактозидазы, выделяют плазмидную ДНК из 12 клонов и проводят ее расщепление рестриктазами РзО и Есой. Отбирают клоны, содержащие плазмидные ДНК, которые при данном анализе образуют фрагменты размерами 2,1 и 2,7 т.п.н. Данные клоны используют в качестве продуцентов ДНК рРЧ 191,Б) Выделение фрагмента ДНК парвовируса свиней из ДНК плазмиды рРЧ 191 и встраивание ее в ДНК плазмиды рВВ 322.ДН К плазмиды рРЧ 191 и РВВ 322 обрабатывают рестриктазами Рзт 1 и ЕСоВ 1, проводят фенольную экстракцию и переосаждение этанолом и лигирование, как описано в примере 1,После трансформации клеток Е,СоИ С отбирают клоны,...

Рекомбинантная плазмидная днк рrд 6 источник зонда для тестирования представителей рода francisella, штамм бактерий еsснеriснiа coli, содержащий рекомбинантную плазмидную днк рrд 6 источник зонда для тестирован

Загрузка...

Номер патента: 1669981

Опубликовано: 15.08.1991

Авторы: Романова, Павлович, Мишанкин

МПК: C12N 15/31, C12Q 1/68

Метки: coli, рекомбинантная, представителей, еsснеriснiа, источник, днк, тестирования, рекомбинантную, бактерий, рода, тестирован, francisella, плазмидная, зонда, плазмидную, содержащий, штамм, рrд

...смеси трансформируют штамм Е,со 1 М 103,Выбор штамма обусловлен тем, что вприсутствии рО С 19 он способен синтезировать фермент /3-галактоэидаэу эа счет комплементации дефектного хромосомальногогена Й-концевым фрагментом гена, находящегося на плазмиде, Эта способность штаммане проявляется в присутствии рекомбинант 5 ной плаэмиды со встроенным по ЕсоВ 1 сайтуфрагментом ДНК, длина которого не кратнатрем, вследствие сдвига рамки считывания,В-галактозидаэы. Клоны с такими рекомбинантными плазмидами, не обладающие /310 галактозидаэной активностью, могут бытьотобраны на индикаторной среде с хромогенным субстратом Х-ца по отсутствию голубой окраски,Клетки культуры Е,со 11 М 103, транс 15 формированные лигазной смесью, высеивают на чашки с...

Рекомбинантная плазмидная днк prd 100 источник зонда для идентификации возбудителя чумы, способ ее конструирования и штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент рекомбинантной плазмиды prd 100

Загрузка...

Номер патента: 1677059

Опубликовано: 15.09.1991

Авторы: Мишанкин, Подладчикова

МПК: C12N 15/31

Метки: плазмиды, плазмидная, идентификации, еsснеriснiа, чумы, штамм, конструирования, рекомбинантная, продуцент, бактерий, днк, рекомбинантной, возбудителя, источник, зонда

...геле,Лигазной смесью (1/10 ч) трансформируют штамм Е.со. После трансформации культуру высеивают на агаризованную средуВ, содержащую 50 мкг/мл ампицилли 1677059на, 40 мкг/мл индикатора Р -галактозидазной активности Хца 1 и 240 мкг/мл индуктора 3-галактозидазы ИПТГ (изопропил- /3-Д-тиогалактопиранозид). Через 14 - 20 ч на чашках вырастают колонии трансформантов. Рекомбинантные клоны отбирают по отсутствию Р -галактозицазной аос, поскольку у них нарушается способность синтезировать Р-галактозидазу из-за сдвига рамки считывания фермента при встраивании в векторную плазмиду фрагмента ДНК длиной 280 п.,о.Из клеток рекомбинантных клонов была выделена плазмидная ДНК, Анализ плаэмидных ДНК осуществляют с помощью рестриктаз Мзр 1 и Есой 1....

Рекомбинантная плазмидная днк р1емз, кодирующая синтез в субъединицы холерного токсина, способ ее конструирования и штамм бактерий viвriо сноlеrае продуцент в-субъединицы холерного токсина

Загрузка...

Номер патента: 1505022

Опубликовано: 15.10.1991

Авторы: Смирнов, Ильина, Смирнова, Ливанова

МПК: C12N 15/00

Метки: бактерий, рекомбинантная, кодирующая, днк, сноlеrае, субъединицы, холерного, в-субъединицы, синтез, конструирования, р1емз, плазмидная, штамм, продуцент, viвriо, токсина

...инкубируот 18 ч гГи 37 С, В каче-. зеконтроля используют исходный штамм /, 1505022С 1)01 егае С 197 сегрупп д )акже )/ эгилбензтидзолин-сульфанд. Через 30с 1)оегде 569 В н качестве этдл.,с ого штал 1- мин экспозиции при комнаной тепеГ)д)ума - продуцента холерного то:синд. ре при постоянном встряхивании измеряютКолонии штаммов С 197, КМ 93 и 569 В оптическу 0 плотность раствора при 405 нмпереносят методом реплик на чашки с 1%- 5 Чувствительность метода в данной серииным отмытым синкдзным дгаром, содержа- опытов составляет 1 нг, В соответствии сощим 1/ отмытых в синкдз Ом бульоне установленной чунс)вигР. ьностью и ГооФ%эритроциее бард д;"осРГ)ы инкубируст 13 с етом числя ныро ших о процессе культи 011) 39 С )дл, еают ггое 10,5;, СинказнО-...

Рекомбинантная плазмидная днк 22, кодирующая синтез интерферона -11 человека, и штамм бактерии рsеudомоnаs sp. -продуцентинтерферона -11 человека

Загрузка...

Номер патента: 1703690

Опубликовано: 07.01.1992

Авторы: Стеркин, Евдонина, Стронгин, Еремашвили, Долганов, Козлов, Чистосердов, Царев, Цыганков, Юрин, Свердлов, Скворцова, Народицкая, Монастырская

МПК: A61K 37/66, C12N 1/21, C12N 15/21 ...

Метки: плазмидная, продуцентинтерферона, бактерии, кодирующая, рекомбинантная, днк, штамм, человека, рsеudомоnаs, синтез, интерферона

...вводят плазмиду 8751, которая обеспечивает устойчивость к триметаприму,Высев конъюгатов производят на минимальную агаризованную солевую среду Адамса, содержащую следующие компоненты: глюкоза 4 мг/мл; тизмингидрохло 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 рид 5 мкг/мл; треонин 50 мкг/мл; лейцин 50 мкг/мл; ампициллин 75 мкг/мл; стрептомицин 75 мкг/мл; триметаприм 75 мкг/мл, В этих условиях вырастают только коньюгаты Е.со 1 С 600 (К 751, рИЧ 22), Затем проводят коньюгацию между Е,со 1 С 600(В 751, рЧМ 22) и Рзеобоаопаз зр, 31 с дефектным геном йг А Коньюгаты вырастают на минимальной агариэованной солевой среде следующего состава: глюкоза 4 мг/мл; тиамингидрохлорид 5 мкг/мл; треонин 50 мкг/мл; ампициллин 75 мкг/мл, стрептомицин 200 мкг/мл,...

Рекомбинантная плазмидная днк 14, кодирующая полипептид, со свойствами лейкоцитарного интерферона 2 человека, и штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент полипептида со свойствами лейкоцитарного интерферона 2 человека

Загрузка...

Номер патента: 1703691

Опубликовано: 07.01.1992

Авторы: Добрынин, Филиппов, Коробко, Гилева, Кравченко, Чувпило

МПК: C12N 15/21, C12N 1/21

Метки: днк, человека, плазмидная, свойствами, штамм, интерферона, рекомбинантная, кодирующая, полипептид, продуцент, полипептида, бактерий, лейкоцитарного, еsснеriснiа

...Из гибридизующихся с этой пробой клонов выделяют плазмидную ДНК, строение которой подтверждают рестриктным анализом с помощью рестриктаз Наб, Мзри Най+ЯаОК раствору 10 мкг ДНК плазмиды Р 6 А 23/Яа в 80 мкл буфера В без МаСГприбавляют 20 ед. каждой из рестрикционных нуклеаз Яаф и Крп и инкубируют 90 мин при 37 С, Анализ полноты гидролиза и выделение векторного Крп/ЯаГ-фрагмента (3,4 т,п о) проводят при помощи электрофореза в 1 -ном геле легкоплавкой агароэы, Одновременно 10 мкг ДНК плазмиды р ецГт 17 в 100 мкл буфера В обрабатывают 1,5 ч при 37 С 20 ед, каждой из рестриктаэ 89 г и ЯаГ, после чего фрагмент величиной около 500 п,о., содержащий синтетический ген а 2 интерферона, выделяют при помощи электрофореза в 5 ь-ном...

Рекомбинантная плазмидная днк -1 1-13, кодирующая синтез фибробластного интерферона ( i) человека, способ ее конструирования, штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент i-интерферона человека

Загрузка...

Номер патента: 1703692

Опубликовано: 07.01.1992

Авторы: Рыжавская, Изотова, Козлов, Скворцова, Борухов, Мочульский, Болотин, Лившиц, Трухан, Плотникова, Подковыров, Стеркин, Янулайтис, Машко, Юрин, Гервинскас, Алексенко, Лапидус, Евдонина, Костров, Дебабов, Стронгин, Носовская, Лебедева, Бумялис

МПК: C12N 1/21, C12P 21/00, C12N 15/23 ...

Метки: еsснеriснiа, синтез, бактерий, штамм, днк, конструирования, рекомбинантная, человека, 1-13, плазмидная, интерферона, кодирующая, продуцент, i-интерферона, фибробластного

...в 20 мкл -20, 4 мкг полученного таким образом препарата ДНК обрабатывают Кленовским фрагментом ДНК-полимеразы 1 Е.со в указанных условиях для достройки возможно имеющихся одноцепочечных концов молекул до двухцепочечных. Реакцию останавливают фенольной депротеинизацией, нуклеиновые кислоты осаждают этанолом и растворяют в 20 мкл Н 20,Лигирование линейных молекул ДНК с двуцепочечными концами проводят при 16 С в пробе объемом 50 мкл, содержащей 60 мМ трис-НС, рН 7,6, 10 мМ М 9 С 2, 10 мМ дитиотреитол, 4 мМ АТФ, 8 -ный полиэтиленгликоль - 6000, 4 мкг ДНК, 100 ед, ДНК- лигазы Т 4. После завершения реакции пробу разбавляют водой в четыре раза и проводят осаждение нуклеиновых кислот этанолом, 2 мкг растворенной в Н 20 ДНК обрабатывают...

Рекомбинантная плазмидная днк 2-19, кодирующая синтез интерлейкина-2 человека, способ ее конструирования штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент интерлейкина-2 человека

Загрузка...

Номер патента: 1703693

Опубликовано: 07.01.1992

Авторы: Стронгин, Костров, Козлов, Стеркин, Трухан, Мочульский, Дебабов, Косиков, Грен, Циманис, Мазель, Черновская, Машко, Авот, Скворцова, Юрин, Романчикова, Носовская

МПК: C12N 15/26, C12N 1/21

Метки: кодирующая, еsснеriснiа, конструирования, штамм, бактерий, днк, продуцент, синтез, рекомбинантная, интерлейкина-2, 2-19, плазмидная, человека

...ДНК длиной =750 п.нвырезает и проводят элюцию ДНК. Для достройки о,;ноцепочечных концов ДНК с помощью Кленовского фрагмента ДНК-полимеразы 1 Е со, выделенный из геля фрагмент обоа;э; .пгают в пробе объемом 20 мкл, содер,кэ.,ей 10 мМ трис-НС 1, рН 8,0, 10 мМ МдС 1:, по ЗО мкМ дезоксирибонуклеозидтрифосфатов Реакцию останавливают прогреванием, ДНК из смеси переосаждают этанолом и растворяют в 20 мкл,Полученный препарат фрагмента плазмиды рАА 1213-23 В используют на дальнейших этапах конструирования для интеграции кодирующей части интерлейкиначеловека в векторную плазмиду рВВ 124 В.3 мкг ДНК плазмиды рВВ 124 В расщепляют рестриктазой ВагпН в пробе обьемс . 12 мкл, содержащей буфер для рестрикци:- Реакцию останавливают фенольной...

Рекомбинантная плазмидная днк ртнуз14, кодирующая полипептид со свойствами тимозина человека, рекомбинантная плазмидная днк ртну12 промежуточный продукт для ее конструирования и штамм бактерий еsснеriснiа coli

Загрузка...

Номер патента: 1707078

Опубликовано: 23.01.1992

Авторы: Болдырева, Коробко, Добрынин, Амосова, Филиппов

МПК: C12N 15/12, C12N 15/21

Метки: кодирующая, тимозина, полипептид, продукт, штамм, плазмидная, днк, человека, еsснеriснiа, промежуточный, рекомбинантная, ртнуз14, конструирования, ртну12, бактерий, свойствами

...ауо Гача т М; - .и. Э УГ эез :. 1 ан,леатдсд дып а якт . даг д- а знык ", ос 4 дамидитн ьнл методомпПОН. С 1 Чд 1 а УУИн; - , д эп;.;-ь 1 ечат 3- . - -,д 5 гч .".щью защ;щ чы,, , тПЬ, дхтр 1 та з пил 2 азси ул с: д, п 1:асед 1 ЗОПРОП,ГатУлича)-фаСФ 1 ТОВ Эт. В 1 Раданы тетрээплал С 1 уев предадет е масшта бе 0 5.0 7 мл 1 агь 1.п;,;ь уя в каче;тве час егя посистпа стеа (газмрр пар 500 А, размер частиц 40-8; лл) отаоол 1 у через13 .суцичатчу и связь гри-оед няют перваа нулеаз 1 д аа звечп 111 эгрузка 20 -.лсль, 11 с па "ьз уат "итрасотар м паг,е рад 1ач тенг э ииВедает ПраЫЬу .а ЛЬ СмрСЬ" ТЕТРИС ИД гафуран - пиридич - дода 5 3 2) После -о чания синтеза защитные гр)псы удаляют последовательной обработкой тиофено- ЛЯтаМ то 11 зт 1 Лаь...

Рекомбинантная плазмидная днк pga9, кодирующая синтез белка,обладающего антигенными свойствами вируса иммунодефицита человека первого типа, способ ее конструирования, и штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент

Загрузка...

Номер патента: 1708848

Опубликовано: 30.01.1992

Авторы: Казеннова, Гараев, Бобков, Бобкова, Колот

МПК: C12N 15/70, C12N 15/48

Метки: типа, вируса, pga9, человека, кодирующая, антигенными, иммунодефицита, бактерий, конструирования, белка,обладающего, плазмидная, еsснеriснiа, первого, продуцент, днк, синтез, рекомбинантная, штамм, свойствами

...ген устойчивости к канамицину, и раг-участок СоА выделяют из плазмиды рАК 25. Для этого рАК 25 подвергают гидролизу рестриктазой Е,сой 1, ин кубируя 20 мкг ДН К рАК 25 с 20 ед, 10 фермента в присутствии 50 мМ МаС 3, 10 мММцС 32 10 мМ трис-НС 3, рН 7,5, 1 мМ ДТТ в течение 2 ч г.ри 37 С с последующим прогреванием при 75 С в течение 15 мии. Далее гидрслизовзииую ДНК разделяют в 0,8% 15 дгзрозном геле и выделяют нужный фрагмент ДНК, используя бумагу ДЕ 81.В качестве вектора используют плазмиду р 630, полученную следующим образом.Клетки бактерий Е.со 3 НВ 101, содержа щие плазмидную ДНК рОВ 290 выращиваютв 200 мл бульона до титра 1 х 10 клеток/мл. Клетки осаждают центрифугирсванием(5000 ц,5 мии,4 С) и ресуспендируют в 35 мл раствора,...

Рекомбинантная плазмидная днк, кодирующая кор-антигенвируса гепатита в, лишенный днк 39с концевых аминокислот с экспонированным на его поверхности эпитопом pre s 1-55, способ ее конструирования и штамм бактерий

Загрузка...

Номер патента: 1713930

Опубликовано: 23.02.1992

Авторы: Лосева, Пушко, Грен, Берзин, Пумпен, Осе, Озолс, Цибиногин, Борисова, Петровский

МПК: C12N 1/21, C12N 15/70, C12N 15/51 ...

Метки: бактерий, 1-55, днк, кор-антигенвируса, концевых, аминокислот, плазмидная, поверхности, кодирующая, эпитопом, конструирования, штамм, рекомбинантная, лишенный, экспонированным, гепатита

...и инкубируют 30 мин при . 4 С, Лизат осветляют центрифугированием 30(10 000 д, 4 С, центрифуга). НВс Ад Ь - рге 52 (1-55) очищают следующим образом, Ли. зат подвергают фракционированию сульфатом аммония. НВс Ад Ь - рге 52 (1-55) собирают в осадке, полученном при 30% 35 насыщения. сульфатом аммония. Осадок растворяют в 0,04 М фосфате натрия, рН 8,0;0,15 М йаС, 0,1 тритоне Х 100 до конечйой концентрации белка 25-50 мг/мли 6-7 мл этого раствора наносят на колонку с Сефа-. 40 розой С 4 В (2,1 х 75 см), уравновешенную .тем же буфером, но без тритона Х 100, Фрак- ции. проявляющие НВсАд-активность, собирают и используют либо непосредственно, либо после концентриро вания переосаждением 50%-ным сульфатом аммония.Определение...

Рекомбинантная плазмидная днк pbs 2 днк зонд для идентификации штаммов чумного микроба,несущих плазмиду pfra, способ ее конструирования и штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент днк зонда для идентификации шт

Загрузка...

Номер патента: 1586193

Опубликовано: 23.02.1992

Авторы: Попов, Шишкина

МПК: C12N 15/00

Метки: штамм, плазмиду, продуцент, бактерий, днк, зонд, штаммов, микроба,несущих, рекомбинантная, зонда, чумного, pfra, плазмидная, конструирования, идентификации, еsснеriснiа

...Т 1 ЦК Д и Цц ИТа 1 М 1 Ц с Ус 1"ного микроба, депонирован п музее жи 5вьх культур ВНИПГ 1 И "Микроб под номером КМ,Способы получения рекоибццацтцыхплазмидцых ЛНК серии рВБ иллюстри, -руется примером,П р и м е р . Конструировациерекомб 13 нднтнай плаэмиды рВБ 2 и получение штамма Е,со 1 Г К- пропуцецтдзонда для идентификации штаммав чумного микроба, садерждцих плаэмиду,Л, Выделение ДНК рРка из штамма1,ревс 1 з А 1122 (рЕка+) и Д(К векторных плаэмид рВК 327 и рВК 322 иэ 1 тама Е,со 11 С 600. 20Клетки бактерий выр 3 гигдют в бульоне 1.В (рН 7,2) с аэрацией в течениеночи при 28 С (клетки бактерий 1.резьс 1 в или 37 С Е,со 11). Для амплифцкации ДНК векторных плаэмид клетки . 25бактерий Е.са 13. обрабатывают хлорамфениколом 20 лкг/мл с...

Рекомбинантная плазмидная днк 10fmd, кодирующая гибридный белок р204-as р с с vpi200-213 р р s р ( 131-160) и штамм бактерий еsснеriснiа coli -продуцент гибридного белка р204а р с с v pi200-213-р р s р vpi 131-160

Загрузка...

Номер патента: 1724691

Опубликовано: 07.04.1992

Авторы: Иванющенков, Болдырева, Филиппов, Микульскис, Добрынин, Чепуркин, Дрягалин, Некрасова, Бурдов, Коробко

МПК: C12N 1/21, C12N 15/42

Метки: гибридного, днк, белка, плазмидная, 10fmd, еsснеriснiа, кодирующая, vpi200-213, р204а, 131-160, рекомбинантная, белок, гибридный, штамм, бактерий, pi200-213-р, р204-as, продуцент

...Р 204, который представляет собой белок фактора1724691 некроза опухолей человека, слитый черездипептид АзрРго с последовательностьюантигенной детерминанты подтипа А 22 вируса ящура..Для получения бактериального штамма- продуцента иммуногенного полипептидаР 204 плазмидой р 10 РМО трансформируюткомпетентные клетки Е, соИ 3620050,Полученные таким образом штаммы Е.соИ 3620050/р 10 РМО (В КПМ В) характеризуются следующими признаками.Морфологические признаки.Клетки мелкие утолщенной палочковидной формы, грамьтрицательные, неспороносные.Культуральные признаки.Клетки хорошо растут.на простых питательных средах, При росте на агаре "Дифко"колонии круглые, гладкие, прижаты, мутные, блестящие, серые, край ровный, Приросте в жидких средах (на...