Патенты с меткой «плазмидная»

Рекомбинантная плазмидная днк, способ конструирования плазмидной днк и штамм-продуцент эндонуклеазы рестрикции

Загрузка...

Номер патента: 1130602

Опубликовано: 23.12.1984

Авторы: Таняшин, Глатман, Мороз, Баев, Кравец, Солонин, Кузьмин

МПК: C12N 15/00

Метки: штамм-продуцент, днк, плазмидной, рекомбинантная, эндонуклеазы, плазмидная, рестрикции, конструирования

...цитритов. Желатцну не разжижают.Уреаэцая активность не обнаруживается. Ицдол не образуют.Устойчивость к антибиотикам. Проявляет устойчивость к ампициллину.Генетические признаки штамма:1 фЕсо НФ спи Есо цугес ВСэЪсВ,Г , гпу 1, 1 еп 6, рго А 2, Ьз 4,ГМ 1, агд Е, 1 ас 41, да 1 К 2, ага 14ху 1 5, шег, еэх.П р и м е р 1. Конструированиерекомбцнантной плаэмидцой ДНК р 1 ЬНЧ 86.Плазмцдную ДНК рЬКч 8 вьсцеляютиз штамма ВКИ ВД по методу(С 1 еюе 11, Не 1 пе 1 су, 1969, РНАЯ, 62,1159-1163) .2 мкг выделенной ДНК гидролиэуютрестриктазой Нжд 111 в 100 мкл раствора, содержащего 50 мИ трис-НС 1,рН 7,8, 10 мМ МИКСТ , 2 мМ 2-меркаптоэтанола, 20 мИ ИаС 1 при 37 ОС 1 ч.После прогревания реакционной смесипри 65 ОС в течение 10 мин проводятчкольцевание"...

Рекомбинантная плазмидная днк 435, кодирующая синтез днк лигазы фага т 4. способ ее конструирования и штамм. вкм в-1449-продуцент днк-лигазыфага т4

Загрузка...

Номер патента: 1122003

Опубликовано: 15.12.1985

Авторы: Трояновский, Таняшин, Солонин, Баев

МПК: C12N 15/00

Метки: кодирующая, фага, плазмидная, синтез, штамм, лигазы, днк, рекомбинантная, вкм, днк-лигазыфага, в-1449-продуцент, конструирования

...Е.со 1 С 600 с множественностью 1 в среде ЬВ (1 О г бактотриптона, 5 г дрожжевого экстракта, 10 г 11 аС 1 нал воды),зсодержащей 10 М МАЗО, Ливис клеток завершают добавлением в среду хлоро7 11 форма (1;100). После удаления обломков клеток центрифугированием (6000, 30 мин, 4 С) клеточные ДНК и РНК лизата гидролизуют одновременно панкреатическими ДНКазой и РНКазой (по 10 мкг/мл) при 20 С, 1 ч, Первичную очистку и концентрирование фага проводят с помощью полиэтиленгликоля 6000 (Зошашого К, Р ег а 1., Чт.го 1 огу, 40, 734-744, 1970). Окончательную очистку Фага проводят равновесным центрифугированием в 4 М СяС 1, 10 мМ трис-НС 1, рН 8,0, 0,01 М МяС 1 (И 1 яоп С. С. ег а 1., Мо 1 ес.Сеп.Сепег 156,203-214, 1977). Очищенный препарат фага АМ...

Способ маркирования 11-й хромосомы человека, рекомбинантная плазмидная днк 53 для маркирования, фрагмент геномной днк 53 для маркирования и способ получения фрагмента днк 53

Загрузка...

Номер патента: 1203108

Опубликовано: 07.01.1986

Авторы: Яковлев, Гиндилис, Юров, Зайцев, Шапиро

МПК: C12N 15/00

Метки: хромосомы, плазмидная, днк, 11-й, рекомбинантная, геномной, человека, фрагмент, маркирования, фрагмента

...от анодной каме Оры диализной мембраной. Нижний крайцилиндра с фильтром опускают в катодную камеру;обе электродные камеры заполняют буАером,содержащим 89 мМ"тгйе НС 1,89 мМ Н ВО и 5 мМ ЕЭТЛ1 рН 8,3. Электрофильтрацию растворапроизводят при 5 мМ/см в течение 6-8 ч.После электрофоретического осаждения ДНК на фильтре жидкость удаляют из цилиндра, а желеобразныйслой ДНК растворяют в нужном объеме0,1 чТЕ,Для выделения препаративных количеств плазмидной ДНК культуру Е.со 1, несущую плазмиду, выращивают в25 100 мл среды В (10 г/л пептона, 5 г/л дрожжевого экстракта, 10 г/л ИаС 1) с добавками необходимых антибиотиков (100 мкг/мл ампицилина, 20 мкг/мл тетрациклина и 50 мкг/мл хлорамфеникола) при 37 С на качалке в течение ночи. Клетки...

Рекомбинантная плазмидная днк уе psg94, кодирующая синтез производного белка оболочки вируса лейкоза крупного рогатого скота, способ ее конструирования и штамм дрожжей sасснаrомuсеs cererrial-продуцент производ

Загрузка...

Номер патента: 1337408

Опубликовано: 15.09.1987

Авторы: Рослер, Скрябин, Брантл, Эльдаров, Баев, Ланг, Розенталь

МПК: C12N 15/00

Метки: белка, рогатого, лейкоза, штамм, кодирующая, крупного, sасснаrомuсеs, днк, оболочки, рекомбинантная, производного, вируса, дрожжей, psg94, скота, cererrial-продуцент, плазмидная, производ, синтез, конструирования

...пентрцфуировлттця аглдокклеток сусценпцруют в том ж суфрав концентрации 3 х 10 клток/ьтцц,К 200 мл сусцензиц к:теток прибавляют 20 мкг плдзмидной ПНК УЕр 809 тк тОО мкл 507, раствора П.Э.1 . 4000выдерживают 1 ч при 30 мин. Пос.те0инкубируют 5 миц при 42 С. Суспензгттоосаждают пентрцфугированием 1 О с прц1 О тыс. аб./мин. Осадок сусцендцруют в 300 ыкл воды и высевяют цо100 мкл на часики с твердой се:тектив - )Внай средой (0,67 Х дрожжевых азотистых оснований, 2 Ж глюкозы, 20 мпт/лгистидицл, 22 бактолгара),Колонии трансформацтов поятляютсяца 2- децт пос:те пасетов)тот:. - 20чг.кую стлбклтность плазмцдь тЕРВС 94в трацсформацтах определяют клк процент клеток, сохранивших плазктдупри росте в селективных условкяхминимальной среде без лейпкттд,...

Рекомбинантная плазмидная днк рсек 10, кодирующая синтез фрагмента кленова днк-полимеразы 1 е. coli, и способ ее конструирования

Загрузка...

Номер патента: 1392094

Опубликовано: 30.04.1988

Авторы: Кузнеделов, Кравченко, Петренко, Дегтярев, Нетесова, Ривкин

МПК: C12N 15/00

Метки: кодирующая, рсек, днк, синтез, фрагмента, кленова, днк-полимеразы, плазмидная, coli, конструирования, рекомбинантная

...фрагменты ДНК электрофорезом в 47.-ном полиакриламидном геле. Гель окрашивают в растворе бромистого этидия 2 мкг/мл, вырезают из геля зону, содержащую векторную часть ДНК плазмиды рСЕЕ 12, и выделяют ДНК из геля методом электроэлюции. 10 мкг плазмидной ДНК рС 155 гидролизуют 20 ед. рестрикционной эндонуклеазы ВашН 1 в 100 мкл буфера для гидролиза, содержащего 20 мМ трис-НС 1 рН 7,8, 10 мМ МяС 1, 50 мМ МаС 1, 2 мМ 2-меркаптоэтанола, при 37 С 1 ч. В полученную реакционную смесь добавляют 25 ЙАТР, ВСТР, ЙСТР и ТТР, до 0,05 мМ каждого, 10 ед. ДНК-полимеразы 1 и инкубируют 30 мин при 12 С. Реакцию останавливают добавлением Иа ЭДТА до концентрации 20 мМ, белок удаляют экстракцией водным фенолом, рН 8,0 и ДНК трижды переосаждают...

Рекомбинантная плазмидная днк ptur1-6 для идентификации межиндивидуального полиморфизма днк человека и способ ее получения

Загрузка...

Номер патента: 1463760

Опубликовано: 07.03.1989

Авторы: Рогаев, Шапиро

МПК: C12N 15/00

Метки: рекомбинантная, человека, полиморфизма, идентификации, ptur1-6, межиндивидуального, днк, плазмидная

...ДНК-дезокситрифосфатов и рольной чашке и на идентичные места 5 е.а. ДНК-полимеразы 1. Реакционную на круглый нитроцеллюлозный фильтр смесь, имеющую конечный объем 100 мкг, диаметром 8,5 см, лежащий на поверх инкубируют 20 мин при комнатной темности агара с тетрациклином (Тс) во пературе и 2 ч при 1 О С. Удельная второй чашке. После подращивания ко- активность меченых препаратов составлоний при 37 ОС 15 ч контрольную чашку ляет 6,8 10имп/мин/мкг. На каждый хранят при 4 С в перевернутом поло- фильтр суммарно наносится 4:10имп/ жении, а бактерии на нитроцеллюлозиом 45 /мин меченого препарата ДНК, фильтре лиэируют. Для этого каждый Гибридизацию проводят при 42 С фильтр помещают на поверхность бума ч, Затем фильтры отмывают в двух ги 3 мм,...

Рекомбинантная плазмидная днк 33, кодирующая метилазу s 11, и штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент метилазы s 11

Загрузка...

Номер патента: 1532585

Опубликовано: 30.12.1989

Авторы: Лунин, Лопатина, Дебов, Поляченко, Никольская-Санович, Карягина, Грубер

МПК: C12N 15/00

Метки: штамм, бактерий, метилазу, продуцент, еsснеriснiа, плазмидная, рекомбинантная, кодирующая, днк, метилазы

...Бяо 11 в клетках, несущих плазмиду с 1 33, не происходит.Плазмидную ДНК о 33 подвергают рестрикционному анализу.Характеристика штамма.2585 6Е. со 1, трансФормированных плазми"дой й 33.ШтаммТ 15 чения характера метилирования Яяо 11 20 25 30 40 45 50 55 5 153Клетки прямые, палочковидные, неподвижные, грамотрицательные, лактозопозитивные. При рассеве на чашкис 1,3%-ным МПА рост в виде отдельных,колонии, иногда в К-форме с неровными5краями. Хорошо растет на плотных ижидких питательных средах (МПА, МЛБ,1.В-бульон и ЬВ-агар).Физиолого-биохимические признаки,сКлетки растут в пределах 4-45 Спри оптимуме рН 6,8-7,5. Штамм разлагает глюкозу, лактозу, маннит с образованием кислоты, не .разлагаетсахарозу, сбраживает мальтозу, ксилозу,...

Рекомбинантная плазмидная днк 24, кодирующая синтез рестриктазы и метилазы s 11 и штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент рестриктазы и метилазы s 11

Загрузка...

Номер патента: 1539205

Опубликовано: 30.01.1990

Авторы: Никольская-Санович, Лунин, Грубер, Дебов, Карягина, Лопатина, Поляченко

МПК: C12N 15/00

Метки: плазмидная, днк, продуцент, бактерий, кодирующая, еsснеriснiа, рестриктазы, синтез, рекомбинантная, метилазы, штамм

...при 10000 я 15 мин, затем 1 О мкл супернатанта добавляют впробу, содержащую 1 мкг бактериофага 3 в 10 мкл буфера А. Пробу инкубируют 1 ч при 37 С, после чегоанализируют электрофорезом в 1,2 Еном агарозном геле. Картина рестрикции в случае штамма Е, со 1 Р 8200,несущего плазмиду с 1 24, характерназля рестриктазы Бзо 11.1 мкг плазмидной ДНК й 24, выделенной из штамма Е.со 1 Р 8200, обрабатывают 1 О ед. рестриктирующей эндонуклеазы Бво 11 в буфере А в течение 2 ч при 37 С. Электрофорез показывает, что ДНК плазмиды й 24 при такой обработке не фрагментируется, вто время как плаэмида р 11 С 19 даеткартину гидролиза, типичную для плазмиды рЦС 19, обработанной рестриктаэой Бво 11. Эти данные свидетельствуют о защите мест узнавания...

Рекомбинантная плазмидная днк pbg м3, определяющая синтез эндонуклеазы рестрикции с bi

Загрузка...

Номер патента: 1573026

Опубликовано: 23.06.1990

Авторы: Тарутина, Глатман, Кравец, Солонин, Фролов, Кузьмин, Васюренко

МПК: C12N 15/00

Метки: плазмидная, определяющая, рестрикции, рекомбинантная, эндонуклеазы, днк, синтез

...штамма Е. со 11К 802, трансформанты подращивают 2 чв бульоне 1,В инфицируют фагом р 801 г9с множественностью заражения 10 ивысевают на агаризованную среду, содержащую 50 мкг/мл ампициллина, Изклонов, резистентных к ампициллину,выделяют плазмидную ДНК рВС МЗ известными способами,Проведен анализ наличия рестриктазы сГгВ 1 в клетках Е, со 1 ь.Для этого клетки Е. со 11 К 802//рВС МЗ выращивают в 10 мМ 1,В бульона до поздней логарифмической стадиироста, собирают центрифугированием,ресуспендируют в 5 мл буфера В, (10 мМтрис НС 1, рН 7,5, 50 мМ НаС 1, 10 мМЭДТА 10 мМ 2-меркгптоэтанола), раз-.рушают ультразвуком, центрифугируютпри 6000 об/мин 1 ч для освобожденияот клеточных обломков,Для определения активности готовятразведения экстракта в...

Рекомбинантная плазмидная днк pmg 16 для обнаружения микроплазменных заражений

Загрузка...

Номер патента: 1413960

Опубликовано: 07.09.1990

Авторы: Меркулова, Борхсениус, Чернова

МПК: C12N 15/00

Метки: заражений, рекомбинантная, днк, микроплазменных, обнаружения, плазмидная

...рКК 3535, несущей рибосомный оперон ггп В Е.со.Плазмиду рМя 16 получают врепаративных количествах и очищают в градиенте плотности 1 в 11.П р и м е р 2, ДНК клеточньм культур выделяли стандартными методами, для этого собирают клетки МХ и Не Ьа, и предполагаемых микоплаэм цеитрифугированием культуральной жидкости при 10000 об/мин 30 мин.Оказалось, что плазмида рМ 16 не гибридизуется с ДНК эукариот, не контаминированных микоплаэмами, что является необходимым условием ее применения.Оказалось также, чтс с помощью ДНК гибридизации с рМя ,6 можно уловитьнг ДНК микоплазмы, что соот 5ветстнует .1 О инфекционных частиц. Известно, что в 1 ил культуральной жидкости клеток, культивируемых 1 п ч 1 Сго при микоплаэменной инфекции,всодержится 10 -...

Рекомбинантная плазмидная днк pifn тrр, кодирующая синтез человеческого иммунного интерферона

Загрузка...

Номер патента: 1433019

Опубликовано: 15.09.1990

Авторы: Овчинников, Ростапшов, Крыкбаев, Арсенян, Свердлов, Новохатский, Честухин, Кузнецов, Монастырская, Чернов, Виноградова, Ершов, Аспетов, Мелков, Царев

МПК: A61K 38/21

Метки: синтез, кодирующая, т"рр, рекомбинантная, днк, плазмидная, человеческого, интерферона, иммунного

...буфере.Х 1 мкг полученного фрагмента до 50бавляют 0,1 мкг синтетических олигодезоксирибонуклеотидов, полученныхпутем химического синтеза, 2 мкг выделенного электроэлюцией большого, ЕсоВ 1-Рв 1 фрагмента рВВ 322 с триптофановым промотором и лигируют вприсутствии .10 ед ДНЕ"лигазы Фага Т 4в растворе, содержащем 0,5 мМ АТР и,буФер, состав которого был приведен вьппе .Лнгазной смесью трансформируют компетентные клетки Е,со 11 К 12, которые высевают на чашки, содержащие ЬВ-агар с тетрациклипом. Из полученных клонов выделяют плаэмиды и структура встроенных генов подтверждается рестриктным анализом н спквенсом.Полученную генно-инженерную конструкцию анализируют по эффективности синтеза иммунного интерферона после трансФормации...

Векторная плазмидная днк polya15, предназначенная для клонирования чужеродных генов в клетках еsснеriснiа coli и bacillus spp., и способ его конструирования

Загрузка...

Номер патента: 1476896

Опубликовано: 23.09.1990

Авторы: Шевченко, Добрица

МПК: C12N 15/00

Метки: конструирования, клонирования, предназначенная, векторная, bacillus, генов, клетках, spp, чужеродных, polya15, еsснеriснiа, плазмидная, днк

...0 С. На следую- тов, Зля трансформации берут в рабощнй день О, мл Са ф -клеток смешиваютту 0,5 мл суспензин полученных прото"с 0,05 мп ДНК (10 мкг/мп), инкубируют пластов, смешивают с ДНК, растворен-.1 ч при температуре ОС и 5 мин ной в ЯММР буфере,н добавляют 1,5 мппри температуре 42 С и затем перено- полиэтиленгликоля (ПЭГ). После разсят в пробирку с 1,5 мп среды ЬВ. 1 О бавления в 5 мп БММР буфера клеткиПосле 2 ч инкубации в этой среде при центрифугируют и ресуспендируют в37 С со встряхиванием клетки высева мл ЯММР буфера. Через 1,5 ч суспенют на чашки с индикаторными (Ьас) зию высевают на чашки Петри со средойсредами, содержащими тетрациклин ДМЗ. Чашки инкубируют при температурео(15 мкг/мл). В качестве индикаторных 5 37 С в течение 2...

Рекомбинантная плазмидная днк рук11, кодирующая рестриктазу и метилазу е corii, способ ее конструирования и штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент рестриктазы и метилазы е corii

Загрузка...

Номер патента: 1453896

Опубликовано: 30.09.1990

Авторы: Косых, Витенене, Бурьянов

МПК: C12N 15/00

Метки: бактерий, метилазы, днк, рук11, рекомбинантная, штамм, corii, метилазу, рестриктазы, плазмидная, конструирования, еsснеriснiа, рестриктазу, продуцент, кодирующая

...штаммаЕ, соН В 834(рС 857),обусловлен тем,что штамм не содержит интерферируюих с ферментами Есо КП примесей исодержит плаэмиду с геном термочувст Овительного репрессора с 1 фага ляйбда,Содержаний рестриктаэы и метилазцЕсо К 11 в сконструированном штаммеравно 500000 ед, каждого фермента наг сырой биомассы клеток,Штами ЕвсИехсЫа со 1. ВКИ СК 2889 характеризуется следующими признаками;Иорфологические признаки.6 6ную как р 7 К 11 и содержащую в своем . составе трк фрагмента, которые обра,зуются при гидролизе плазмидной ДНК эндокуклеаэой рестрикции Рве 1Выделенную .ДНК р 7 К 11 трансформируют в штамм Е. со 11 В 834/рС 1857 Трансформаиты отбирают на среде, содержащей ампицкплин (50 мкг/мл) и канамкцин (25 мкг/мл). Плаэмида РС 1857 несет...

Плазмидная днк pmtf59, предназначенная для транспозонного мутагенеза бактерий семейства еnтеrовастеriасеае

Загрузка...

Номер патента: 1599434

Опубликовано: 15.10.1990

Авторы: Максимова, Прокулевич, Фомичев, Титок

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, транспозонного, еnтеrовастеriасеае, мутагенеза, плазмидная, семейства, бактерий, предназначенная, pmtf59

...а среди них счастотой 1,17, отбирают ауксотройные50мутанты,П р и м е р 2. Для полученияауксотроАных мутантов используютштамм Егюп 1 а ЬегЬ 1 со 1 а 103 К/рМТР 59.Способ получения ауксотроных мутантов такой же, как и в примере 1, различия состоят в том, что частотаВтранспозиции транспозона Тп 5 вхромосому этого штамма 9,9 10 а ауксотрофные мутанты отбирают счастотой 5,57,П р и м е р 3. Для полученияауксотройных мутантов используютштамм Аитопатогенных бактерий Егт- па сЬгуяапгЬе 1 п 1 ЕИА 49/рМТР 59, Способ получения ауксотройных мутантовтакой же, как и в примере 1, разли"чия состоят в том, что частота транспозиции транспозона Тп 5 в хромосому этого штамма 1,2 10 -, а ауксотроАные мутанты отбирают с частотой2,07,П р и м е р 4. Для...

Рекомбинантная плазмидная днк рек-7-днк-зонд для идентификации штаммов чумного микроба,несущих плазмиду пестициногенности, способ ее конструирования и штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент днк-зонда для иде

Загрузка...

Номер патента: 1615181

Опубликовано: 23.12.1990

Авторы: Булгакова, Попов

МПК: C12Q 1/68, C12N 15/31

Метки: чумного, штамм, штаммов, рек-7-днк-зонд, рекомбинантная, продуцент, пестициногенности, еsснеriснiа, конструирования, плазмиду, идентификации, днк-зонда, иде, плазмидная, микроба,несущих, бактерий, днк

...Злюат экстрагиру ют Фечолом, хлороформом и обрабатываю эфиром. ДНК плазмиды рАТ 153(10 мкг) подвергают гидролизу рестриктазами Ипд 111 и ВапН 1 по методике, описанной ныше. Больший 15 (3,3 т.п,н,) из двух полученных в результате гидролиза фрагментов извлекают из геля. электроэлюцией. Злюаточищают от примесей агарозы и смешивают с злюатом, содержащим Нлпс 1 111- 20 "ВапН 1 - ррагмент рРзс, ДНК осаждают 96 Е-ным этаколом, промывают 70 Еньм зтанолом и подсушивают, Осадокрастворяют н буфере для легирования(5 ец,), Легирование проводят 1012 ч при 16 С.В. Анализ рекомбннактных плазмид 30 и получение штамма - продуцента Р 1- зонда для диагностики штаммов чумногомикроба,хлорамфениколом (С = 20 мкг/мл).ДНК плазмид рРзС и рАТ вьделяют.Клетки...

Векторная плазмидная днк ртк 1261, предназначенная для интеграции чужеродного фрагмента в геном вируса осповакцины, и способ ее конструирования

Загрузка...

Номер патента: 1640163

Опубликовано: 07.04.1991

Авторы: Микрюков, Приходько, Урманов, Чижиков, Серпинский

МПК: C12N 15/79

Метки: 1261, ртк, векторная, плазмидная, предназначенная, осповакцины, конструирования, интеграции, вируса, днк, чужеродного, фрагмента, геном

...ДНК разделяют электрофорезом в 43-ном полиакриламидном геле (ПААГ) и выделяютбольший Фрагмент ДНК.20 мкг плаэмидной ДНК рПС 18 расщепляют ферментами Нпй 111 и,Есо К 1,55как описано, и выделяют Ндпй 1 ПЕсо К 1-полилинкер из 87-ного ПААГ.Линеариэованную плазмидную ДНКрТК 1285 Нхат 111 Есо К 1 и Ный 1114 Есо К 1-полилинкер сшивают ДНК-лигазой Фага Т 4 (1 е.а.) в 50 мИ трисНС 1, рН 7,5; 0,5 мИ АТР, 10 мМ 2-мерокаптоэтанола, 5 мМ И 8 С 1 при 8 С12 ч. Препарат ДНК осаждают спиртом.1/10 часть ДНК трансформируют вкомпетентные клетки штаюа Е,со 11НВ 101, Пдазмидную ДНК (рТК 1261)выделяют щелочным методом из положительно гибридизующейся п здп колонии Е.со 1 и подвергают рестрикционному анализу. Структуру полилинкераподтверждают...

Векторная плазмидная днк ртк 1285, предназначенная для интеграции чужеродного фрагмента в геном вируса осповакцины, и способ ее конструирования

Загрузка...

Номер патента: 1640164

Опубликовано: 07.04.1991

Авторы: Микрюков, Чижиков, Приходько, Урманов, Серпинский

МПК: C12N 15/79

Метки: предназначенная, плазмидная, 1285, вируса, конструирования, ртк, фрагмента, геном, днк, осповакцины, интеграции, чужеродного, векторная

...1 х НВ 101 проводятотбор колоний фенотипа "Ар Тс и рестрикционный анализ плазмидных ДНК(рВКНК)П р и м е р 3. Рекомбинантныеплазмидные ДНК рТК 108, рТК 1567,рТК 1238 и РТК 1285Плазмидную ДНК рВКНК подвергаютгидролизу эндонуклеазой рестрикцииРчц 11 в стандартных Условиях и сшивают ДНК-лигазой фага Т 4 по примеруЛигаэной смесью трансформируют компетентные клетки штавща Е.со 1 НВ 101и отбирают колонии, содержащие рекомбинантные плазмиды с Нпй 111 - Рсщ 1150фрагментом ДНК длиной 1708 н.п,(рТК 1708).Плазмидную ДНК рТК 1708 расщепляют последовательно рестриктазамиНЫЙ 111 и ХЬа 1, выделяют большийфрагмент ДНК, который инкубируют снуклеаэой З 1 по примеру 1. Затем пре парат ДНК сшивают ДНК-лигазой фагаТ 4 и проводят трансформацию компе 64...

Рекомбинантная плазмидная днк 36к-pvh, кодирующая синтез иммуногенного белка 36к вируса осповакцины штамма ливп, и штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент этого белка

Загрузка...

Номер патента: 1661215

Опубликовано: 07.07.1991

Авторы: Чикаев, Рязанкина, Чешенко, Щелкунов, Малыгин, Муравлев

МПК: C12N 1/20, C12N 15/38

Метки: штамма, кодирующая, иммуногенного, ливп, осповакцины, штамм, продуцент, 36к-pvh, рекомбинантная, плазмидная, еsснеriснiа, белка, бактерий, синтез, днк, вируса, этого

...от 35 вет в гибридизации с Р-зондом, выделяют32плазмидную ДНК, обозначенную 36 К-рчН,содержащую в своем составе фрагмент вирусной ДНК 1029 п.н. с геном белка 36 К,Анализ совпадения рамок трансляции40 гена ас 7 и гена белка 36 К в клонах, содержащих рекомбинатную плазмидную ДНК,осуществляют с помощью доказательствасинтеза этими клонами химерного белка смол, м. 145 - 150 КД, Для этого клетки из45 отдельных клонов, дающих положительныйответ в реакции гибридизации с Р-зондом,32высевают в 5 мл .В, содержащего 40 мкг/млампициллина, и растят в течение 16 ч. Затем0,35 мл ночной культуры вносят в 0,5 мл50 свежего ЬВ, содержащего 40 мкг/мл ампициллина, растят до плотности суспензии0,6-0,7 ОЕ/мл при 600 нм и добавляют...

Способ выявления парвовируса свиней, рекомбинантная плазмидная днк ppv4, используемая в качестве гибридизационного зонда для выявления парвовируса свиней, и рекомбинантная плазмидная днк м13ppv, используемая в

Загрузка...

Номер патента: 1664831

Опубликовано: 23.07.1991

Авторы: Забережный, Коромыслов, Артюшин

МПК: C12N 15/35, C12Q 1/08

Метки: м13ppv, ppv4, зонда, парвовируса, свиней, гибридизационного, качестве, рекомбинантная, плазмидная, выявления, днк, используемая

...аналогично примеру.Проводят трансформацию клеток Е.соИ )м; отбирают клоны, устойчивые к ампициллину и имеющие нарушенную активность ф -галактозидазы, выделяют плазмидную ДНК из 12 клонов и проводят ее расщепление рестриктазами РзО и Есой. Отбирают клоны, содержащие плазмидные ДНК, которые при данном анализе образуют фрагменты размерами 2,1 и 2,7 т.п.н. Данные клоны используют в качестве продуцентов ДНК рРЧ 191,Б) Выделение фрагмента ДНК парвовируса свиней из ДНК плазмиды рРЧ 191 и встраивание ее в ДНК плазмиды рВВ 322.ДН К плазмиды рРЧ 191 и РВВ 322 обрабатывают рестриктазами Рзт 1 и ЕСоВ 1, проводят фенольную экстракцию и переосаждение этанолом и лигирование, как описано в примере 1,После трансформации клеток Е,СоИ С отбирают клоны,...

Рекомбинантная плазмидная днк рrд 6 источник зонда для тестирования представителей рода francisella, штамм бактерий еsснеriснiа coli, содержащий рекомбинантную плазмидную днк рrд 6 источник зонда для тестирован

Загрузка...

Номер патента: 1669981

Опубликовано: 15.08.1991

Авторы: Мишанкин, Павлович, Романова

МПК: C12N 15/31, C12Q 1/68

Метки: coli, представителей, рrд, тестирован, штамм, francisella, бактерий, плазмидную, днк, рекомбинантная, рекомбинантную, плазмидная, рода, зонда, источник, тестирования, содержащий, еsснеriснiа

...смеси трансформируют штамм Е,со 1 М 103,Выбор штамма обусловлен тем, что вприсутствии рО С 19 он способен синтезировать фермент /3-галактоэидаэу эа счет комплементации дефектного хромосомальногогена Й-концевым фрагментом гена, находящегося на плазмиде, Эта способность штаммане проявляется в присутствии рекомбинант 5 ной плаэмиды со встроенным по ЕсоВ 1 сайтуфрагментом ДНК, длина которого не кратнатрем, вследствие сдвига рамки считывания,В-галактозидаэы. Клоны с такими рекомбинантными плазмидами, не обладающие /310 галактозидаэной активностью, могут бытьотобраны на индикаторной среде с хромогенным субстратом Х-ца по отсутствию голубой окраски,Клетки культуры Е,со 11 М 103, транс 15 формированные лигазной смесью, высеивают на чашки с...

Рекомбинантная плазмидная днк prd 100 источник зонда для идентификации возбудителя чумы, способ ее конструирования и штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент рекомбинантной плазмиды prd 100

Загрузка...

Номер патента: 1677059

Опубликовано: 15.09.1991

Авторы: Подладчикова, Мишанкин

МПК: C12N 15/31

Метки: плазмиды, источник, бактерий, рекомбинантная, продуцент, рекомбинантной, плазмидная, еsснеriснiа, конструирования, идентификации, штамм, зонда, днк, возбудителя, чумы

...геле,Лигазной смесью (1/10 ч) трансформируют штамм Е.со. После трансформации культуру высеивают на агаризованную средуВ, содержащую 50 мкг/мл ампицилли 1677059на, 40 мкг/мл индикатора Р -галактозидазной активности Хца 1 и 240 мкг/мл индуктора 3-галактозидазы ИПТГ (изопропил- /3-Д-тиогалактопиранозид). Через 14 - 20 ч на чашках вырастают колонии трансформантов. Рекомбинантные клоны отбирают по отсутствию Р -галактозицазной аос, поскольку у них нарушается способность синтезировать Р-галактозидазу из-за сдвига рамки считывания фермента при встраивании в векторную плазмиду фрагмента ДНК длиной 280 п.,о.Из клеток рекомбинантных клонов была выделена плазмидная ДНК, Анализ плаэмидных ДНК осуществляют с помощью рестриктаз Мзр 1 и Есой 1....

Рекомбинантная плазмидная днк р1емз, кодирующая синтез в субъединицы холерного токсина, способ ее конструирования и штамм бактерий viвriо сноlеrае продуцент в-субъединицы холерного токсина

Загрузка...

Номер патента: 1505022

Опубликовано: 15.10.1991

Авторы: Ливанова, Смирнова, Смирнов, Ильина

МПК: C12N 15/00

Метки: плазмидная, токсина, холерного, продуцент, днк, viвriо, сноlеrае, бактерий, рекомбинантная, кодирующая, синтез, в-субъединицы, субъединицы, штамм, конструирования, р1емз

...инкубируот 18 ч гГи 37 С, В каче-. зеконтроля используют исходный штамм /, 1505022С 1)01 егае С 197 сегрупп д )акже )/ эгилбензтидзолин-сульфанд. Через 30с 1)оегде 569 В н качестве этдл.,с ого штал 1- мин экспозиции при комнаной тепеГ)д)ума - продуцента холерного то:синд. ре при постоянном встряхивании измеряютКолонии штаммов С 197, КМ 93 и 569 В оптическу 0 плотность раствора при 405 нмпереносят методом реплик на чашки с 1%- 5 Чувствительность метода в данной серииным отмытым синкдзным дгаром, содержа- опытов составляет 1 нг, В соответствии сощим 1/ отмытых в синкдз Ом бульоне установленной чунс)вигР. ьностью и ГооФ%эритроциее бард д;"осРГ)ы инкубируст 13 с етом числя ныро ших о процессе культи 011) 39 С )дл, еают ггое 10,5;, СинказнО-...

Рекомбинантная плазмидная днк 22, кодирующая синтез интерферона -11 человека, и штамм бактерии рsеudомоnаs sp. -продуцентинтерферона -11 человека

Загрузка...

Номер патента: 1703690

Опубликовано: 07.01.1992

Авторы: Скворцова, Чистосердов, Монастырская, Еремашвили, Народицкая, Царев, Евдонина, Цыганков, Стронгин, Стеркин, Юрин, Долганов, Козлов, Свердлов

МПК: C12N 1/21, A61K 37/66, C12N 15/21 ...

Метки: штамм, плазмидная, рsеudомоnаs, человека, кодирующая, синтез, днк, продуцентинтерферона, рекомбинантная, интерферона, бактерии

...вводят плазмиду 8751, которая обеспечивает устойчивость к триметаприму,Высев конъюгатов производят на минимальную агаризованную солевую среду Адамса, содержащую следующие компоненты: глюкоза 4 мг/мл; тизмингидрохло 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 рид 5 мкг/мл; треонин 50 мкг/мл; лейцин 50 мкг/мл; ампициллин 75 мкг/мл; стрептомицин 75 мкг/мл; триметаприм 75 мкг/мл, В этих условиях вырастают только коньюгаты Е.со 1 С 600 (К 751, рИЧ 22), Затем проводят коньюгацию между Е,со 1 С 600(В 751, рЧМ 22) и Рзеобоаопаз зр, 31 с дефектным геном йг А Коньюгаты вырастают на минимальной агариэованной солевой среде следующего состава: глюкоза 4 мг/мл; тиамингидрохлорид 5 мкг/мл; треонин 50 мкг/мл; ампициллин 75 мкг/мл, стрептомицин 200 мкг/мл,...

Рекомбинантная плазмидная днк 14, кодирующая полипептид, со свойствами лейкоцитарного интерферона 2 человека, и штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент полипептида со свойствами лейкоцитарного интерферона 2 человека

Загрузка...

Номер патента: 1703691

Опубликовано: 07.01.1992

Авторы: Гилева, Кравченко, Чувпило, Филиппов, Коробко, Добрынин

МПК: C12N 15/21, C12N 1/21

Метки: рекомбинантная, полипептида, интерферона, лейкоцитарного, продуцент, человека, бактерий, кодирующая, днк, полипептид, плазмидная, еsснеriснiа, свойствами, штамм

...Из гибридизующихся с этой пробой клонов выделяют плазмидную ДНК, строение которой подтверждают рестриктным анализом с помощью рестриктаз Наб, Мзри Най+ЯаОК раствору 10 мкг ДНК плазмиды Р 6 А 23/Яа в 80 мкл буфера В без МаСГприбавляют 20 ед. каждой из рестрикционных нуклеаз Яаф и Крп и инкубируют 90 мин при 37 С, Анализ полноты гидролиза и выделение векторного Крп/ЯаГ-фрагмента (3,4 т,п о) проводят при помощи электрофореза в 1 -ном геле легкоплавкой агароэы, Одновременно 10 мкг ДНК плазмиды р ецГт 17 в 100 мкл буфера В обрабатывают 1,5 ч при 37 С 20 ед, каждой из рестриктаэ 89 г и ЯаГ, после чего фрагмент величиной около 500 п,о., содержащий синтетический ген а 2 интерферона, выделяют при помощи электрофореза в 5 ь-ном...

Рекомбинантная плазмидная днк -1 1-13, кодирующая синтез фибробластного интерферона ( i) человека, способ ее конструирования, штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент i-интерферона человека

Загрузка...

Номер патента: 1703692

Опубликовано: 07.01.1992

Авторы: Болотин, Мочульский, Стронгин, Костров, Гервинскас, Скворцова, Борухов, Янулайтис, Юрин, Рыжавская, Евдонина, Лебедева, Носовская, Подковыров, Изотова, Лапидус, Бумялис, Стеркин, Плотникова, Лившиц, Алексенко, Машко, Трухан, Дебабов, Козлов

МПК: C12P 21/00, C12N 1/21, C12N 15/23 ...

Метки: кодирующая, синтез, продуцент, бактерий, 1-13, человека, плазмидная, днк, фибробластного, i-интерферона, интерферона, еsснеriснiа, рекомбинантная, штамм, конструирования

...в 20 мкл -20, 4 мкг полученного таким образом препарата ДНК обрабатывают Кленовским фрагментом ДНК-полимеразы 1 Е.со в указанных условиях для достройки возможно имеющихся одноцепочечных концов молекул до двухцепочечных. Реакцию останавливают фенольной депротеинизацией, нуклеиновые кислоты осаждают этанолом и растворяют в 20 мкл Н 20,Лигирование линейных молекул ДНК с двуцепочечными концами проводят при 16 С в пробе объемом 50 мкл, содержащей 60 мМ трис-НС, рН 7,6, 10 мМ М 9 С 2, 10 мМ дитиотреитол, 4 мМ АТФ, 8 -ный полиэтиленгликоль - 6000, 4 мкг ДНК, 100 ед, ДНК- лигазы Т 4. После завершения реакции пробу разбавляют водой в четыре раза и проводят осаждение нуклеиновых кислот этанолом, 2 мкг растворенной в Н 20 ДНК обрабатывают...

Рекомбинантная плазмидная днк 2-19, кодирующая синтез интерлейкина-2 человека, способ ее конструирования штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент интерлейкина-2 человека

Загрузка...

Номер патента: 1703693

Опубликовано: 07.01.1992

Авторы: Мочульский, Носовская, Авот, Дебабов, Стеркин, Циманис, Козлов, Стронгин, Мазель, Скворцова, Машко, Юрин, Романчикова, Трухан, Черновская, Косиков, Грен, Костров

МПК: C12N 15/26, C12N 1/21

Метки: бактерий, конструирования, плазмидная, продуцент, еsснеriснiа, штамм, интерлейкина-2, 2-19, синтез, днк, человека, кодирующая, рекомбинантная

...ДНК длиной =750 п.нвырезает и проводят элюцию ДНК. Для достройки о,;ноцепочечных концов ДНК с помощью Кленовского фрагмента ДНК-полимеразы 1 Е со, выделенный из геля фрагмент обоа;э; .пгают в пробе объемом 20 мкл, содер,кэ.,ей 10 мМ трис-НС 1, рН 8,0, 10 мМ МдС 1:, по ЗО мкМ дезоксирибонуклеозидтрифосфатов Реакцию останавливают прогреванием, ДНК из смеси переосаждают этанолом и растворяют в 20 мкл,Полученный препарат фрагмента плазмиды рАА 1213-23 В используют на дальнейших этапах конструирования для интеграции кодирующей части интерлейкиначеловека в векторную плазмиду рВВ 124 В.3 мкг ДНК плазмиды рВВ 124 В расщепляют рестриктазой ВагпН в пробе обьемс . 12 мкл, содержащей буфер для рестрикци:- Реакцию останавливают фенольной...

Рекомбинантная плазмидная днк ртнуз14, кодирующая полипептид со свойствами тимозина человека, рекомбинантная плазмидная днк ртну12 промежуточный продукт для ее конструирования и штамм бактерий еsснеriснiа coli

Загрузка...

Номер патента: 1707078

Опубликовано: 23.01.1992

Авторы: Добрынин, Амосова, Коробко, Болдырева, Филиппов

МПК: C12N 15/21, C12N 15/12

Метки: штамм, ртнуз14, бактерий, днк, ртну12, плазмидная, полипептид, свойствами, человека, конструирования, продукт, промежуточный, кодирующая, тимозина, еsснеriснiа, рекомбинантная

...ауо Гача т М; - .и. Э УГ эез :. 1 ан,леатдсд дып а якт . даг д- а знык ", ос 4 дамидитн ьнл методомпПОН. С 1 Чд 1 а УУИн; - , д эп;.;-ь 1 ечат 3- . - -,д 5 гч .".щью защ;щ чы,, , тПЬ, дхтр 1 та з пил 2 азси ул с: д, п 1:асед 1 ЗОПРОП,ГатУлича)-фаСФ 1 ТОВ Эт. В 1 Раданы тетрээплал С 1 уев предадет е масшта бе 0 5.0 7 мл 1 агь 1.п;,;ь уя в каче;тве час егя посистпа стеа (газмрр пар 500 А, размер частиц 40-8; лл) отаоол 1 у через13 .суцичатчу и связь гри-оед няют перваа нулеаз 1 д аа звечп 111 эгрузка 20 -.лсль, 11 с па "ьз уат "итрасотар м паг,е рад 1ач тенг э ииВедает ПраЫЬу .а ЛЬ СмрСЬ" ТЕТРИС ИД гафуран - пиридич - дода 5 3 2) После -о чания синтеза защитные гр)псы удаляют последовательной обработкой тиофено- ЛЯтаМ то 11 зт 1 Лаь...

Рекомбинатная плазмидная днк рвgнтrр 3, кодирующая гормон роста крупного рогатого скота, и штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент гормона роста крупного рогатого скота

Загрузка...

Номер патента: 1708847

Опубликовано: 30.01.1992

Авторы: Баев, Скрябин, Горбулев, Чернов, Свердлова, Голова, Рубцов, Позмогова, Шульга, Садиев, Чупеева

МПК: C12N 1/21, C12N 15/18

Метки: плазмидная, рвgнтrр, гормон, штамм, рогатого, крупного, бактерий, кодирующая, днк, рекомбинатная, продуцент, роста, гормона, еsснеriснiа, скота

...20 вМ, Реакционную смесь экстрагируют равным объемом смеси фенол:хлороформ. ДНК из водной фазы осаждают спиртом, высушивают, растворяют в водефракционируют в 1 Д агарозном геле, Нужный фрагмент ДНК (Рчц И - Есой - фрагмент размером 680 п,о.) элюируют из легкоплавкой агарозы с помощью стандартной процедуры осаждают спиртом, высушивают и растворяют в воде,0,5 мкг Рчц 1 - Есой - фрагмента инкубируют в 10 мкл срднесолевого буфера с 5 ед. рестриктазы Н 1 пб И 1 в течение 1 ч при 37 С, ДНК из реакционной смеси осаждают спиртом, высушивают и растворяют в воде.Для получения вектора из плазмиды зуп/рВй 327 4 мкг ДНК гидролизуют в 20 мкл инкубационной смеси на основе среднесолевого буфера, содеожащей 15 ед. Рчц И и 20 ед, Н 1 пб 1 И, в...

Рекомбинантная плазмидная днк pga9, кодирующая синтез белка,обладающего антигенными свойствами вируса иммунодефицита человека первого типа, способ ее конструирования, и штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент

Загрузка...

Номер патента: 1708848

Опубликовано: 30.01.1992

Авторы: Бобков, Колот, Казеннова, Бобкова, Гараев

МПК: C12N 15/70, C12N 15/48

Метки: типа, плазмидная, продуцент, иммунодефицита, человека, бактерий, белка,обладающего, конструирования, pga9, днк, первого, антигенными, рекомбинантная, кодирующая, вируса, еsснеriснiа, штамм, свойствами, синтез

...ген устойчивости к канамицину, и раг-участок СоА выделяют из плазмиды рАК 25. Для этого рАК 25 подвергают гидролизу рестриктазой Е,сой 1, ин кубируя 20 мкг ДН К рАК 25 с 20 ед, 10 фермента в присутствии 50 мМ МаС 3, 10 мММцС 32 10 мМ трис-НС 3, рН 7,5, 1 мМ ДТТ в течение 2 ч г.ри 37 С с последующим прогреванием при 75 С в течение 15 мии. Далее гидрслизовзииую ДНК разделяют в 0,8% 15 дгзрозном геле и выделяют нужный фрагмент ДНК, используя бумагу ДЕ 81.В качестве вектора используют плазмиду р 630, полученную следующим образом.Клетки бактерий Е.со 3 НВ 101, содержа щие плазмидную ДНК рОВ 290 выращиваютв 200 мл бульона до титра 1 х 10 клеток/мл. Клетки осаждают центрифугирсванием(5000 ц,5 мии,4 С) и ресуспендируют в 35 мл раствора,...

Рекомбинантная плазмидная днк, кодирующая кор-антигенвируса гепатита в, лишенный днк 39с концевых аминокислот с экспонированным на его поверхности эпитопом pre s 1-55, способ ее конструирования и штамм бактерий

Загрузка...

Номер патента: 1713930

Опубликовано: 23.02.1992

Авторы: Лосева, Осе, Цибиногин, Озолс, Грен, Пушко, Борисова, Петровский, Пумпен, Берзин

МПК: C12N 1/21, C12N 15/51, C12N 15/70 ...

Метки: экспонированным, бактерий, лишенный, 1-55, днк, концевых, рекомбинантная, гепатита, штамм, плазмидная, кор-антигенвируса, эпитопом, конструирования, кодирующая, аминокислот, поверхности

...и инкубируют 30 мин при . 4 С, Лизат осветляют центрифугированием 30(10 000 д, 4 С, центрифуга). НВс Ад Ь - рге 52 (1-55) очищают следующим образом, Ли. зат подвергают фракционированию сульфатом аммония. НВс Ад Ь - рге 52 (1-55) собирают в осадке, полученном при 30% 35 насыщения. сульфатом аммония. Осадок растворяют в 0,04 М фосфате натрия, рН 8,0;0,15 М йаС, 0,1 тритоне Х 100 до конечйой концентрации белка 25-50 мг/мли 6-7 мл этого раствора наносят на колонку с Сефа-. 40 розой С 4 В (2,1 х 75 см), уравновешенную .тем же буфером, но без тритона Х 100, Фрак- ции. проявляющие НВсАд-активность, собирают и используют либо непосредственно, либо после концентриро вания переосаждением 50%-ным сульфатом аммония.Определение...