Патенты с меткой «кодирующей»

Способ получения рекомбинантной днк, кодирующей нуклеотидную последовательность инсулина

Загрузка...

Номер патента: 1308199

Опубликовано: 30.04.1987

Авторы: Говард, Джон, Вильям, Рэймонд, Аксель, Питер

МПК: C12N 15/00

Метки: последовательность, инсулина, кодирующей, нуклеотидную, днк, рекомбинантной

...9 мИ М 8 СС, 10 мИ дитиотрейтола, 50 мМ трех немеченных 10 деоксирибонуклезидтрифосфатов, 1 мМ меченого 32 в порции нуклеозидтриРфосфата с удепьной радиоактивностью1 - 10 Ки/ммоль, 50 мкг/мл к-ЛНК и 220 ед/мл обратной транскриптазы. Реакционную смесь инкубируют при 45 Со в течение 120 мин. Реакцию останавливают добавлением ЗДТА-Иа, до 25 мМ,экстрагируют фенолом и подвергают хроматографическому анализу на сефа дексе С, а затем осаждают этанолом, Порции продукта реакции с показателем от 500 до 1000 отсчетов в минуту анализируют с помощью электрофореза на геле. Полоса поглощения гетеродисперсоида сосредоточена вокруг 450 нуклеотидов по длине.Порции ДНК, полученные по примерам 1 и 2, порознь обрабатывают пищеварительными ферментами с...

Способ конструирования рекомбинантной плазмидной днк per-33, кодирующей зрелый -интерферон человека

Загрузка...

Номер патента: 1417800

Опубликовано: 15.08.1988

Авторы: Эва, Норберт, Марк-Брус, Гюнтер, Рудольф, Петер

МПК: A61K 38/21

Метки: per-33, рекомбинантной, зрелый, кодирующей, плазмидной, интерферон, человека, днк, конструирования

...тупой конец фрагмента размером 90 Ьр легируют с тупым концом КВБ и получают молекулы, в которых содержат КВБ в направлении ориентации вниз от промотора. После реакции лигазу инактивируют в течение 10 мин при 70 фС, устанавливают концентрацию ТА-буфера и дополнительно переваривают с помощью 200 единиц Ндпй 111 и 10 единиц Есо К 1. 50В образующихся в реакции мульти- мерах наряду с желательной реакцией могут.лигироваться друг с другом как Есо К 1-концы, так и также Нпй 111- концы и снова превращаться в мономеры. Затем пробу разделяют на 6 Е-ном полиакриламидном геле и вырезают из геля промотор-операторный КВБ-фраг мент. размером 100 Ьр, который имеет 0 8Есо К 1- и Нпй 111-концы электрофоретически элюируют, чтобы отделить от избытка...

Способ получения рекомбинантной плазмидной днк, кодирующей гормон роста крысы или человека

Загрузка...

Номер патента: 1436887

Опубликовано: 07.11.1988

Авторы: Аксель, Рэймонд, Джон, Питер, Вильям, Говард

МПК: C12N 15/00

Метки: плазмидной, крысы, днк, человека, рекомбинантной, кодирующей, гормон, роста

...0,1 ммоль ЭДТКдо 25 смоль и тДНК,После экстрагирования этанолом реакционной смеси и хроматографического анализа на БерЬайех С, 32 ркДНК, элюированную в пустой объем,осаждают при помощи этанола. В результате такой обработки обеспечивается высокий выход молекул кДНК, концы которой связаны основанием, Линкер Ыпй 111 лигируют с кДНК осущестовляют при помощи инкубации при 14 Св смеси бб ммоль трис-НС 1, рН 7,6,6,6 ммоль хлорида магния, 1 ммольАТФ, 10 ммоль дитиотрейтола, 3 ммольдекамера Нпй ТТТ с показателем 105отсчетов в 1 мин/мол и лигазы ДНК Т 4,приблизительно 500 ед./мл, в течение1 ч. Чтобы дезактивировать лигазу,ореакционную смесь нагревают до 65 С;которуи поддерживают в течение 5 мин,Предварительно к ферментам, содержащим...

Способ конструирования рекомбинантной плазмидной днк, кодирующей бычий гормон роста

Загрузка...

Номер патента: 1471949

Опубликовано: 07.04.1989

Авторы: Уолтер, Джон, Джозеф

МПК: C12N 15/00

Метки: плазмидной, конструирования, роста, днк, рекомбинантной, кодирующей, бычий, гормон

...Осуществляют процедуру такимже образом, как описано в примерах5(А) - (С), в которых использовалисьЕ, со 1 х КРЛ, Е. со 11 НВ 101, Е. со 11РР 50 или Е. со 1 ПРЯ иф Р, вместоЕ. со 1, Х 1776, Все условия идентичны и получают идентичные результаты.П р и м е р б. Для осуществления данного примера получают сДНК,кодирующую предшественник.гармонароста, как описано в примере 1. Вводят линкеры Нпй 111 и кДНК обрабатывают посредством Нпи 1 111 илиНзц 1, как описано в примере 4(А).Плазмиду рС 194, изолированнуюиз Б. ацгеце, используют в качествевектора, рС 194 расщепляют в зонеНпс 1 1 .1 посредством Нпй 111 илиНяц 1 и затем подвергают обработкещелочной фосфатазой,Полученную кДНК соединяют с расщепленной рС 194. Осуществляют трансформацив В. зцЬг 11...

Способ получения рекомбинантной плазмидной днк, кодирующей синтез бычьего или человеческого гормона роста

Загрузка...

Номер патента: 1491346

Опубликовано: 30.06.1989

Авторы: Бригитте, Рональд

МПК: C12N 15/00

Метки: кодирующей, роста, синтез, днк, гормона, плазмидной, бычьего, рекомбинантной, человеческого

...Абс ТТС ТСС ВСС СТС ТТТ ЮСС ААС ССТ СТССТ Ю ААС А 66 ССС САС ААА СБС ГТС ССА С 5 Конструируют указанную линкерную последовательность в соответствии с обычной методикой.Целевые трансформанты, обозначенные Е.со 1 д К 12 КЧ 309/рСЕ 112,2, помещают на ТЧ агар, содержащий соответствующие антибтотики, а затем обычным способом культивируют до получения и выделения плазмиды рСЕ 112,2. Эти трансформанты как показано по дан ным гель-электрофореза, К 1 А и других тестов, экспрессируют шей-ЬСН с вы 6 АС, ОЛТ ТДД АТС ттт сст ССТ в 1 111 111 11 Т 11 . 111, 11 СТС СТА АТТ ТАС ддд ОСА ССЯ ДАС ССТ СТ 6 СТ 311 111 1ТГО ССА С У 5 СТДОД 666 ТАТТЛЛТА, 1.1 11 1111 3 ТСССЯТЯАТТДТ АТВ ТСС ТТС ТСС СРС 111 11 11111 11 тдс АСС ДЯС АСС СССАТС фАТ 1 САС111 1 1....

Способ получения рекомбинантной плазмидной днк prh w11 или prh w12, кодирующей омега-интерферон

Загрузка...

Номер патента: 1572419

Опубликовано: 15.06.1990

Авторы: Эва, Рудольф, Петер, Норберт, Гюнтер, Кристиан

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, плазмидной, кодирующей, рекомбинантной, омега-интерферон

...этих фрагментов. Сделан вывод, что в случае вставки клонов, Е 76 Е 9 и Р 9 А 2 речь идет о до сих пор неизвестных интерфероногенах, а именно о омега-интерферонах.Информацию об омега-интерферонах используют для того, чтобы переварить кДНК-ставку с рестрикционными эндонуклеазами. Образовавшиеся фрагменты лигируют в с 1 з ДНК-форму (репликативная форма) М 13 тпр 9 и секвенсируют с помощью дидеокси-метода Бащег. Однонитевую ДНК рекомбинантных фагов изолируют. Послесвязывания синтетического олигомера в четырех отдельных приготовлениях осуществляют двухнитевые синтезы при применении большого фрагмента ДНК-полимеразы 1 из Е.со 1 (фрагмент Кленова). В каждой из четырех частичных реакций добавляют один из четырех дидезоксинуклеозидтрифосфатов...

Способ конструирования рекомбинантной плазмидной днк, кодирующей синтез полипептидных субстанций против гепатита а

Загрузка...

Номер патента: 1469856

Опубликовано: 30.09.1990

Авторы: Чернос, Снешков, Блинов, Кусов, Фролов, Дроздов, Приходько, Антонова, Балаян, Насташенко, Овчинников, Чижиков, Маркова, Василенко, Ростапшов, Петров, Коврига, Урманов, Царев, Свердлов, Вальяно, Ажикина, Серпинский, Арсенян, Кравченко, Рохлина, Анджапаридзе

МПК: A61K 39/29, C12N 15/00

Метки: рекомбинантной, днк, конструирования, против, полипептидных, субстанций, плазмидной, кодирующей, гепатита, синтез

...эндонуклеазой рестрикции Вя 11 и затем Рз 1, как описанов примере 1, Полученный больший фрагмент лигируют с Вя 11 - (ЛРцц 11)Рзг.фрагментом длиной 1243 п.о., вьделенным из плазмиды рНА 123. Лигазной смесью трансформируют компетентные клетки штамма Е,.со 1 НВ 101 и в клонах, содержащих плазмиду со встроенным фрагментом, определяют ориентацию последнего с помощью эндонуклеаз рестрикции ЕсоВ. и Ваш 1,Клоны, содержащие плазмиды с нужной ориентацией фрагмента, наращиваютв среде Мс, тетрациклином и р -индЬ- дилакриловой кислотой, синтезируемый гибридный белок, содержащий полный 7 ф-интерферон человека и фрагменты белков ОРЗ (со 11 О по 23,а.к.) и УР5 (спо 271 а.к.) ВГА, выделяют из бактериальных клеток и используют дпя иммунизации морских...

Способ получения рекомбинантной плазмидной днк phtn 713, кодирующей фактор некроза опухоли человека

Загрузка...

Номер патента: 1614765

Опубликовано: 15.12.1990

Авторы: Ясуджи, Юнити, Мицие, Масааки

МПК: C12N 15/28

Метки: некроза, плазмидной, днк, кодирующей, фактор, опухоли, человека, рекомбинантной

...со скоростью потока, равной133 мп/ч. Элюат фракционируют по ф 1 акциям 10 мп. Фракции, обладающие цито"токсической активностью, :.бирают иобъединяют,Выделение цитотоксической активности на этой стадии составляет 533, удельная активность повышается приблизительно в 9 раэСоединенные активные фракции обессоливают и концентрируют до 1/10 объеУ ма ультрафильтрацией с помощью Оай 1 о .с использованием мембраны УМ 10,Концентрат подвергают препаративному изоэлектрофокусирующему гель-электрофорезу, Аликвоту концентрата наносят на пластинку из полиакриламидного геля (0,2 х 10 х 10 см) с градиентомрН от 5,6 до 6,1, созданном с помощью1 ишоЪ 1 чпе. Электрофореэ проводят принапряжении 2400 В в течение 16 ч при15 С, "ель нарезают на куски...

Способ конструирования рекомбинантной плазмидной днк, кодирующей зимоген с человека

Загрузка...

Номер патента: 1739854

Опубликовано: 07.06.1992

Авторы: Хармут, Брайан, Сау-Чи, Нилс

МПК: C12N 15/12

Метки: зимоген, рекомбинантной, плазмидной, кодирующей, конструирования, днк, человека

...хранятся под Р АТСС. СКЬ 9595. Клетки 293 выращивают в минимальной среде Игла с 103-.ной термоинактивированной лощадиной сывороткой прио37 С Гсреду меняют дважды в неделю).Среда состоит из Э МЕМ с 107 теля-.чьей сыворотки, 50 мкг/мл ентамицина 10 и 10 мкг/мл Агнца МЕРНУТОИ фитандиона витамина К 1, Клетки субкультивируют удалением среды, промывают раствором Хенка, прибавляют 0,257.-ныйтрипсин Гсодержащий 0,2 г/л ЭДТА) 15 на 1-2 мин, промывают свежей средой,отсасывают и распределяют в новыесосуды с отношением субкультивирования 1:5 или 1:10.За 1 день перед трансформированиемклетки высевают в количестве 0,х 10 бклеток на 100 мм чашку Петри, Стерильную, осажденную этанолом плазмиду ,ДНК растворяют в ТЕ-буфере и используютдля получения...

Способ конструирования рекомбинантной плазмидной днк, кодирующей фермент деацетоксицефалоспорин с синтетазудеацетилцефалоспорин с синтетазу

Загрузка...

Номер патента: 1739856

Опубликовано: 07.06.1992

Авторы: Сьюллен, Стефен, Поль, Томас

МПК: C12N 15/52

Метки: рекомбинантной, деацетоксицефалоспорин, конструирования, плазмидной, синтетазу, кодирующей, фермент, днк, синтетазудеацетилцефалоспорин

...связуйщей 5 молекулы обрабатывают Т 4 ДНК"кинаэойи затем аннелируют с.образованиемнеповрежденной связуюцей молекулы.1 мкл гидролизованной Ваш Н 1 ДНКплазмиды рМЬС 12 лигируют с 4 мкл 1 О Бсо 1 - Нсо 1 фрагмента плазмидырЬС 1 и 10 мкл аннелированной связующей молекулы.Лигазной смесью трансформируютЕ.со 1 Аликвоты трансформированной 15 клеточной смеси вжевают на чашкахс Ь-агаром, содержащим 25 мкг/млхлорамфеникола, 40 мкг/мл Х-да 1.и40 хмкг/мл 1 РТС. Чашки инкубируютнри 37 С в течение ночи. Колонии,окоторые содержат плазмиду беэ вставки, такие как Е.со 1 К 12 М 109//рМЬС 12, проявляют синий цвет наэтих чашках. Колонии, которые содержат плазмиду с вставкой, такие какЕ.со 11 К 12 1 М 109/рРБ 53, проявляютбелый цвет на этих чашках,...

Способ конструирования рекомбинантной плазмидной днк pps 20, кодирующей изопенициллин-n-синтетазу, способ получения штамма сернаlоsроriuм асrемоniuм, обладающего активностью изопенициллин-n-синтетазы

Загрузка...

Номер патента: 1780542

Опубликовано: 07.12.1992

Авторы: Стефен, Томас, Сьюллен, Поль

МПК: C12N 15/80, C12N 15/52

Метки: штамма, днк, плазмидной, обладающего, сернаlоsроriuм, изопенициллин-n-синтетазу, кодирующей, асrемоniuм, активностью, конструирования, рекомбинантной, изопенициллин-n-синтетазы

...3,7 ХааРестрикцибуфера и 85 мкл Н 20. Около 5 мкл (50 еди онного фрагмента получают и суспендир ютниц) рестрикционного фермента Н 1 пб - И 1 в 10 мкл Н 20.добавляют к раствору ДНК и полученный В, Окончательное конструированиераствор инкубируют при 37 С в течение 2 ч. плэзмид РРЯ 30 и РРЯ 30,1.Н 1 пб- расщепленную плазмиднуюРРЯ 21 А ДНК помещают на 1 агарозный 40 . Около 1 мкг плэз ДНКг плэзмиднои Д растворягель и проводят электрофорез до тех пор, ют в 2 мкл 10 Х Хмкл аа рестрикционного буфеН 1 пб - И 1пока. 3,45 кв, 3,16 кв, 1,2 кви 69 кв ра и 6 мкл Н О. 0 2и - рестрикционные фрагменты не ста- рестрикционного фермента Хаа 1 добавляновятся четко выделенными на геле. Выде- ют к раствор " ДЙКляют Н 1 пб - И 1ляют и - рестрикционный...

Способ получения рекомбинантной плазмидной днк рсдус 2. 27, кодирующей гликопротеин межклеточной адгезии

Загрузка...

Номер патента: 1809837

Опубликовано: 15.04.1993

Авторы: Дональд, Тимоти, Майкл

МПК: C12N 15/06

Метки: плазмидной, днк, кодирующей, гликопротеин, рекомбинантной, межклеточной, рсдус, адгезии

...СОМ 8, она демонстрируетналичие как зависимых от ЗСАМ, так инезависимых от 1 САМкомпонентов адгезии, зависящей от ЛФА. Трансфецированные клетки СОЯ инкубируют в покрытыхЛФАчашках Петри при наличии моноклональных антител 3 САМдля предотвращения выделения кодирующей ДНК ЗСАМ, 15Адгезированные клетки элюируют ЭДТА, аплазмиды выделяют и амплифицируют, После трех циклов трансфекции, адгезии, выделения плаэмиды и фракционирования поразмерам, 30 плазмид анализируют с использованием рестрикционной эндонуклеазы, Из трех плазмид со вставкой более 1,0тыс. пар оснований (т.п,о,) одна, введеннаяв клетки СОЯ посредством трансфекции,обуславливает адгезию по отношению к,25Л ФА.П р и м е р 2. Характеристика последовательности, кодирующей ДНК 3...

Способ получения рекомбинантной плазмидной днк, кодирующей бычий гормон роста, способ биосинтеза производного бычьего гормона роста

Загрузка...

Номер патента: 1838412

Опубликовано: 30.08.1993

Авторы: Бригитте, Хансен, Рональд

МПК: C12N 15/70, C12N 15/18

Метки: днк, рекомбинантной, бычьего, гормона, кодирующей, гормон, роста, бычий, плазмидной, биосинтеза, производного

...трансформантыэкспрессируют вышеупомянутое производное МЕТ бГР с высокими уровнями, Поскольку плазмида рАТ содержит15 термоиндуцируемый репликон неконтролируемого роста, максимальная экспрессияжелаемого продукта производного бГР происходит при культивировании при температурах около 37 С,20 П р и м е р 9. Конструирование плазми 25 ДНК; ССС ЛАС ССТ СТССТ 3ССС ТТС ССЛ С 515 30 35 40 ки, и затем культивируют для последующего продуцирования и выделения плазмиды45 рАЯР 1. Как показано ЯОЯ-гель-электрофо 50 55 В, Лигирование и трансформация,Примерно 20 пикомолей линкернойДНК примера 7,Б, 1 мкг перевара рММ 608примера 7,А, 0,5 мкг ВаоН 1-ЕсоВ 1 фрагмента примерно 10,2 3 сЬ плазмиды рСЕ 101(полученного в соответствии с методикойпримера 2;Б, с...