Препарат биоспорин для профилактики и лечения желудочно кишечных заболеваний человека

Скачать ZIP архив.

Текст

(5) 5 ИЯ ГОСУДАРСТБЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР НИЕ ИЗОБР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(56) Руководство по вакцинномуи сыворточному делу, /Под ред. П.Н.Бургасова, М.:Медицина, 1978, с. 90.(54) ПРЕПАРАТ БИОСПОРИН ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЧЕЛОВЕКА Изобретение относится к биотехнологии, а именно к препаратам для профилактики и лечения дисбактериозов и других желудочно-кишечных заболеваний человека, вызванных патогенными и условно патогенными микроорганизмами.Целью изобретения является повышение эффективности профилактики и лечения дисбактериозов и других желудочно-кишечных заболеваний человека.Препарат биоспорин содержит в качестве живых микробных культур Васцз зцЫ 3 3 (ВКПМ М В) и Васцз с)еп 0 оппз 31 (ВКПМ М В) и наполнитель.В качестве ндержит предпочттиновую смесь.Входящие в состав препарата живыемикробные культуры характеризуются следующими свойствами. аполнителя препарат соительно сахарозу - жела(57) Использование: медицина, дисбактериозы, профилактика и лечение желудочно-кишечных заболеваний, вызванных патогенными и условно-патогенными мик-роорганизмами. Сущность изобретения: живые штаммы ВасШцз ЯцЬтз ВКПМ М В и ВасШцз с)епИогп)з ВКПМ МВс типичными свойствами смешивают в количестве соответственно 4 10 -16 10 и 2 10-3 10 кл/мл по 47 об,;6 каждого, доводят наполнителем до 100. Препарат проверяют на безвредность и антагонистическую активность, определяют фагоцитарную активность лейкоцитов и индукцию интерферона. .Препарат испытан на людях, 7 табл. В.зцЬтз 3 (ВКПМ М В) - грамположительные аэробные спорообразующие палочки, продуцирующие каталазу, На сусло-агаре, среде Громыко, стрептомицетном агаре растут обильно, образуя матовые складчатые колонии телесного цвета с изрезанными краями, легко снимаются петлей.В мазках из колоний, выросших на МПА, через 18 ч обнаруживаются прямые палочковидные клетки размером 2,7 х 0;8 мкм, расположенные одиночно или в виде цепочек. Клетки подвижны, образуют аэробно споры овальной формы, которые располагаются в клетке центрально, При спорообразовании клетки не раздуваются. После роста на глюкозном агаре в протоплазме не обнаруживаются включения поли-,В-оксимасляной кислоты. На МПБ культура образует пленку. Не растет в анаэробных условиях, не гидролизует мочэвину, не образует газ из нитратов в анаэробных условиях. не продуцируетаргининдигидролаэу, Дает положительную реакцию Фогес-Проскауэра, растет в присутствии 7 йаС. Гидролизует крахмал и казеин, разжижает желатину. Ферментирует глюкозу, арабинозу, ксилозу, маннит с 5 образованием кислоты без газа. Редуцирует нитраты, обеспечивает метиленовую синь, Не обладает коагулаэной и лецитиназной активностью.В.сЬепИоппэ 31 (ВКПМ М 8-2336) - 10 грамположительные клетки, палочковидные, размером 2,5 х 0,6 мкм. Клетки подвижны, перитрихи, располагаются, в основном, в виде цепочек. Споры овальной формы, располагаются в клетке центрально, Клетки 15 при спорообразовании не раздуваются. После роста на глюкозном агаре в протоплазме не обнаруживаются включения полир-оксимасляной кислоты.На МПА колонии с тусклой грубой по ,верхностью, непрозрачные, плотно прикреплены к агару; нередко на поверхности обнаруживается слизь. На МПБ образуется морщинистая пленка, иногда с кремовым опенком. 25Культура образует каталазу, характеризуется способностью расти на агаре в анаэробных условиях. Дает положительную реакцию Фогес-Проскаузра, растет при 7 О йаС. Гидролизует крахмал, казеин, не гид ролизует мочевину. Желатин разжижает медленно. Ферментирует глюкозу, араби- козу, ксилозу, маннит с образованием кислоты без газа. Редуцирует нитраты, в анаэробных условиях иэ нитратов образует 35 газ. Продуцирует аргининдигидролаэу. Не обладает коагулазной и лецитиназной активностью.П р и м е р 1. Из штаммов В. зцЬсИэ 3 и В.сЬеп 0 огеэ 31 с типичными морфологи ческими, культуральными, биохимическими свойствами приготовлены три варианта препарата биоспорин с различным содержанием микробных клеток в составе препарата. 45Вариант .Препарат, содержащийследующие компоненты, об.;4:Биомасса В.эцЬШэВКПМ МВ4 млрд.живых микробных клетокв 1 мл физиологического 5раствора 47Биомасса В.сйепНога 3ВКПМ МВ200 млн.живых микробных клеток .в 1 мл физиологического 10 раствора 47Наполнитель Остальноедо 100 Вариант ,Препарат, содержащийследующие компоненты, об, :Биомасса В.зцЬОИэ ВКПМВВ 2335 10 млрд. живыхмикробных клеток в 1 млфизиологического раствора 47Биомасса В.сйеп 1 оггпэВКПМ ЬВВ1,6 млрд.живых микробных клеток в1 мл физиологическогораствораНаполнитель 47Остальноедо 100 Вариант .Препарат, содержащийследующие компоненты, об. О:Биомасса ВлЬИз ВКПМВВ16 млрд. живыхмикробньх клеток в 1 млфизиологическогораствораБиомасса В,ИсЬеп 0 огпэВКПМ ФВ3 Млрд.живых микробных клетокв 1 мл физиологическогораствораНаполнитель Оста 47льноедо 100Результаты испытания вариантов препарата биоспорин Н на безвредность и антагонистическую активность и редставлены в табл, 1.Как видно из представленных в табл. 1 данных, оптимальные количества живых микробных клеток в 1 мл составляют для ВлцЬМПз ВКПМ МВ4-10 млрд и для В.сЬепПоппэ ВКПМ МВмлн,6 млрд при их объемном соотношении 47,: 47 ф. Дальнейшее увеличение количества микробных клеток не изменяет существенным образом специфическую активность препарата в отношении тест-культур микроорганизмов.П р и м е р 2. ЭФФективность препарата биоспорин, содержащее различные соотношения культур ВлцЬз 3 и В,ИсЬеп 0 огщз 31 оценена путем воздействия их на ЯтарЬ. ацгецэ,Результаты опытов представлены в табл. 2.Результаты табл. 2 также подтверждают, что наиболее оптимальным сочетанием культур В.эцЬсэ ВКПМ ЬЬВи В.ИсЬепЮогвз ВКПМ МВявляется соотношение между ними соответственно 470 и 47. При таком соотношении культур регистрируется наиболее быстрое и наиболее полное подавление стафилококка. Сходные данные получены и при изучении воздействия различных оариантоо препарата биоспорин на патогенные для человека зшерихии, сальмонеллы, шигеллы и другие болезнетворные микроорганизмы.П р и м е р 3. Культуры, входящие в состав препарата биоспорин, безвредны для лабораторных животных, Введение даже значительных доз препарата не вызывает гибели и патологических изменений у животных. Противопоказаний к применению препарата нет.Результаты исследования безвредности штаммов В.зцЬсссз 3 и В,ссссеЮоппсз 31, входящих в состав препарата биоспорин, представлены о табл. 3 и 4.П р и м е р 4. Антагонистическую активность биоспорина определяют методом отсроченного антагонизма. Для этого содержимое ампулы растворяют в 1 мл физиологического раствора, Полученную взвесь высеоают штрихом по диаметру чашки Петри с агазированной средой Гаузе М 2 (или в центре чашки) петлей диаметром 3,5 мм. Посевы инкубирусот в термостате при 37 С в течение 72 ч. Затем к выросшей ассоциации культур подсеоают штрихом посевной материал тест-микроорганизмов (500-миллионные суспензии суточных культур о физиологическом растворе), Учет результатов проводят через 18 ч инкубирования при 37 С по величине зон отсутствия роста тест-культур. Контролем роста тест-культур служит их параллельный посев на чашки с агаризованной средой Гаузе М 2 без исследуемой ассоциации куль-. тур.Данные об антагонистической активности препарата биоспорин представлены в табл, 4.П р и м е р 5. Определение фагоцитарной актионости лейкоцитов животных проводят по Лабинской (1968).Опыты проводят на кроликах массой 2,5-2,8 кг, которым вводят перорально препарат на протяжении 10 дней. Пробы крови исследуют по фагоцитарной активности в различные сроки после перорального введения препарата (до опыта, через 5 дней, 10 дней и 15 дней и через один месяц),Контрольным животным вводят перо-, рально физиологический раствор или яичный белок (200 мг).Определение фагоцитарной активности лейкоцитов проводят о отношении различных текст-культур возбудителей желудочно- кишечных заболеваний челооека.Клинические наблюдения за зксперимесстальс-сыми животными, проведенные о процессе перорального введения препара 40 ток доводят с помощью 0,1 И ИаОН до нейтрального значения,.Эту операцию проводятс целью инактивации индукторов интерферона, которые могут быть в сыворотке крови.Для определения интерферонной активности.полученных сывороток их титруют на культуре мышиных клеток линии а против вируса индуктора - ,вируса везикулярного стоматита(штамм Индиана). С этой целью пробы раститрованных сывороток наносят на монослой клеток линииа, выдерживают 18-20 ч при 37 С, затем отмывают их раствором Хенкса и вводят 100 ТЦД 50 вируса индикатора. Учет проводят через 24 ч. За титр интерферона принимают наибольшееразведение сыворотки, которое угнетает репродукцисо вируса в культуре клеток.Для подтверждения интерферонной активности полученных сывороток их выдержиоают на монослое клеток ав та, а также на протяжении двух месяцевпосле окончания введения показьсвасот: всеживотные остасотся активными, полностьюпоедают пищевой рацион, физиологические .5 отправления у них не нарушаются, поведение обычное, изменений со стороны шерстного покрова не отмечается.При исследовании показателей фагоцитоэа (по отношению к энтеропатогенным10 штаммом Е.сос и сальмонеллам) отмечаетсясуществацное повышение афгоцитарной активности лейкоцитов кроликов, которымвводят препарат перорально (табл.5),Число фагоцитируемых клетох Е.сос15 увеличивается почти вдвое, а число фагоцитируемых сальмонелл - в полтора раза. Фагоцитарная активность лейкоцитов кровикроликов, получавших перорально препарат биоспорин, по отношению к разным бак 20 териям представлены в табл. 6.Таким образом полученные данные сви-,детельствуют о том, что пероральное введение препарата вызывает существенноеповышение фагоцитарной активности лей 25 коцитов животных,П р и м е р 6, С целью проверки.индукции интерферона биоспорин вводят черезрот подопытным мышам весом 18-20 г, Вконтроле две группы по 30 животных. Одной30 группе вводят физиологический раствордругой - вирус болезни Ньюкасла (210БОЕ/мл). Через различные промежутки времени мышей декапитируют и собирают пулсывороток от 5-6 животных одной группы.35 Сыворотки центрифугируют в течение 1 минпри 3000 об/мин, затем обрабатывают 0,1 ИНС (доводя рН их до 2,2) и выдерживают 3сут при температуре 4 С. Затем рН сыворо1722502 47До 100 35 Таблица 1 присутствии антибиотика актиномицина Д, который используют в концентрации 5 мкг/мл в качестве ингибитора транскрипции, Затем в реакционную систему вносят вирус индикатора (100 ТЦДщ), Отсутствие антивирусного действия сывороток свидетельствует об их интерферонной активности.Результаты опыта представлены в табл.7.Данные, представленные в табл, 7, свидетельствуют о том, что пероральное введение препарата биоспорин существенно индуцирует продукцию зндогенного интерферона.П р и м е р 7, Препарат биоспорин применен на людях, показана его абсолютная безвредность, хорошая переносимость и высокая эффективность.Пациент В-в, 57 лет. Жалобы на частый ,стул с примесью слизи, боли в животе. При обследовании отмечается болезненность по ходу толстого кишечника. Диагноз - обострение хронического колита, дисбактериоз кишечника, Принимает биоспорин по 2 дозы 4 раза в день. Уже через несколько часов после применения препарата отмечается исчезновение тошноты, болей в животе. После 3 дней приема препарата состояние хорошее, стул нормализовался, живот мягкий, безболезненный. Таким образом препарат биоспорин оказывает выраженное лечебное действие, причем действие его наступает быстрее и значительно эффективнее, чем действие употребляемых пациентом ранее в подобных случаях препаратов (бисептола, фуразолидона и др.).5 Таким образом препарат биоспорин может быть использован для профилактики и лечения дисбактериозов и других желудочно-кишечных заболеваний человека, вызванных патогенными и 10 условно-патогенными микроорганизмами.Формула изобоетения Препарат биоспорин для профилактикии лечения желудочно-кишечных заболеваний человека, содержащий живую культуру 15 штамма ВасИцз ЯцЬ 611 з и наполнитель, о тл и чаю щи й с ятем,что, с целью повышения эффективности препарата за счет усиления фагоцитарной активности крови и индукции интерферона, дополнительно со. держит штамм ВасИцз ИсЬепЫопп 1 з ВКПММВв количестве 2 10-310 кл/мл, а в качестве культуры ВасИ 1 цз ЯцЬтИ 1 з штамм ВасИ 1 цз ЯцЫИз ВКПМ МВв количестве 4 10-16 ф 10 кл/мл при следующем соот ношении компонентов, об,ф:Штамм ВасИ 1 цз ЯцЬсИ 1 зВКПМ МВв количестве 4 10 -16 с 10 кл/мл 47 Штамм ВасИ 1 цз Исйеп 130 Хоггз ВКПМ МВ в количестве 2 10-310кл/млНаполнитель, млрд. Количест"во мышейв опыте нПерорально В.1 сЬепНоппв 31 В/брюшинноВ/венноПодкожно Перорально 1 О 10 10 10 10 10 10 10 10 1 О 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 В.яцЬгПхз 3 .В/брюшинноВ/венноПод кожно 1 О 10 10 10 10 10.1 О101010Таблицач Определение токсичности Фильтратов и центриФугатов культур,выращенных на среде Гаузе И 2 при 37 С в течение 8 сутДоза Фильтра" та или центриФугатавил Путь введения Количест"во мышейв опыте Курс введения Заболе ло Выжилоз щ а вз в а В.виЪ 3.13.в 3 10 10 10 10 10 1,0 0,5 0,5 0,5 0,5 В/брюшинноВ/венноПодкожно 15 5 О 0 0 0 0 10 10 10 10 10 11,Перорально В.13.сЬепНо 3;ш 3.в 31 1,0 О 5 Ов 5 0,5 0,5 10 10 10 10 10 0 10 0 10 0 10 О, 10 0 10 В/брюшинноВ/венноПодкожно 11Перорально 1 1 1 5 5 Таблица 5 Зона подавленна ростатест. культур, ьь Тест-культура Зеарй.ацгецв 209ЯеарЬ.ацгецв 1429ЯеарЬрйцгець 1623ЯгарЬЯоод 46Рь,р 1 сьеЕШ 4140Рв, ша 1 еорЫНа 4131Зег.шагсеьсепв 10002 Саад. в 1 ЫсапвсогупаЬасе. ш 2 сЬЯЗ.Хапеошапав РЬавео 12ЗЬЯЗе 11 а воппе 1Яа 1 ш.зеап 1 еу 5266За 1 ш геад 1 пЗ 5270Яа 1 ш пенроге 5 Т 51Яаш. Зге 2 в 1190За 1 ш.аЬоггцв-еЗц 2 202Яа 1 ш. дегЬу 1519За 1 ш. цав 1 асо 247149Рг, вц 10 агРв 226Рг, ьц 10 аг 3 в 72Рг. цр 10 аг 3.ь,162Рг. цц 10 агРв 181яеасЬуЬоШв а 1 еегпапвОепдгодосЬдцш Еох 2 сцшщ 4 Н 25-28 29 32 18-22 ,. 23-2523"25 13"15 12 14 18" 20 18 ф 20 18-20 10-12 14"6 12 16 1 О 12 14-1 Т 11 "13 15-18 12-14 18" 20 18"го 18"20 13" 16 1416 10 1213 1722502 Таблицабг Бактериальные культуры ру паиспользованные а реакции вивотных Фагоцитарныа индекс До введе- Дни после введения препарата ния препарата 5О.15 20 149 203 228 216 2 1 1,42 1,40 1,44 1,47 1,42 1,64 2,17 г,44 г,61 г,27 1,56 1,61 1,60 158 1,59 2,00 2,86 3,14 3,22 301 2,41 2,40 2,44 2,22 2,17 1,67 287 3, 4 3, 12 3,03 1 685472 1 68 1 66 144 2, 87 322 3 14 294 1,5 г 1,56 1,64 1,60 1,53 1,54 2,68 3,06 3, 11 2,96 1,78 1,72 1,68 1,64 1,59 1,66 3,28 З,г 8 З,гг 2,97 Фагоцитоза Зав.вкгббсапв т.пеырогг 5701 Опыт Контроль За 1 щ,еурбйацг 1 цютЛеЫе 1 ЬегЗ 1150Зв 1 в. гурЫшцгбцп Опыт Контроль Опыт т,Зтап 1 еу 5266За 1 з, епгегШИв Контроль Опыт Контроль ОпытКонтроль Е.со 12 0127 Опыт Е,со 12 0119 Контроль Опыт Е со 11 055 Е,со 16 086Ргосецв тц 1 Загбв 226 1,73 2,54 1,65 2,38 1,46 2,4 42 Контроль 172 1,.47 1,70 1,44 1,58 153 152 1,76 3,2 1,70 2,56 172 2,36 1,58 1,Ь 9 1,75 3,05 322 1,72 167 2,35 2,28 1,63 1,59 233 2,32 1,59 1,61 ОпытКонтроль Опыт Контроль Опыт Ргосецз цц 1 Заггв 72 Контроль П р и и е ч а н и е. Интервалы значений составляли от а 001 до зО 21,Таблица 7 Составитель Г.СоболеваТехред М.Моргентал Корректор В.Гирн Редактор СЛиси Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгор агаринэ, 1 Заказ 1011 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ С 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5

Смотреть

Заявка

4641513, 06.02.1989

ИНСТИТУТ МИКРОБИОЛОГИИ И ВИРУСОЛОГИИ ИМ. АКАД. Д. К. ЗАБОЛОТНОГО

СМИРНОВ ВАЛЕРИЙ ВЕНИАМИНОВИЧ, РЕЗНИК СЕМЕН РАФАИЛОВИЧ, СОРОКУЛОВА ИРИНА БОРИСОВНА, ВЬЮНИЦКАЯ ВАЛЕНТИНА АЛЕКСЕЕВНА, СЛАБОСПИЦКАЯ АЛЛА ТИМОФЕЕВНА, БЕРИЛЛО ЭЛЬВИРА АНДРЕЕВНА, СКОРИКОВА ИРИНА ГРИГОРЬЕВНА, ЧАПЛИНСКИЙ ВЛАДИМИР ЯКОВЛЕВИЧ, ТОФАН АНАТОЛИЙ ВАСИЛЬЕВИЧ

МПК / Метки

МПК: A61K 39/02, A61K 35/74

Метки: препарат, биоспорин, человека, профилактики, желудочно, заболеваний, кишечных, лечения

Опубликовано: 30.03.1992

Код ссылки

<a href="http://patents.su/7-1722502-preparat-biosporin-dlya-profilaktiki-i-lecheniya-zheludochno-kishechnykh-zabolevanijj-cheloveka.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Препарат биоспорин для профилактики и лечения желудочно кишечных заболеваний человека</a>

Похожие патенты