Набор для колориметрического определения холестерина в крови и других животных тканях

Номер патента: 3255

Автор: Крастелевская

Скачать ZIP архив.

Текст

М 3255 Класс 42 е, 3 ПАТЕНТ НА ИЗОБРЕТЕНИЕ ОПИСАНИЕ набора для колориметрического определения холестерина в крови и других животных тканях.О выдаче патента опубликовано ЗО ию,1 1927 года. Действие патента распространяется нв 15 пет от 15 сентября 1924 года.Предлагаемое изобретение предн.,значается для количественного колориметрического определения холестеринв крови и тканях больных с нарушением обмена веществ.Нд чертеже фиг. 1 пзооражаег ви,набора спереди, фиг. 2 - вид сверху,фиг. 3 вертикальн 1 й поперечныйразрез и фиг. 4 - ;1 ве проекции редкг 11 вного цилиндра.Определение с помощью пре;1 лгаемого набора производится непосредственно путем сравнения цветового тона хлороформенного слоя реакции и:хо:1 естерин с цветными тонами п 1 та 1;дартных растворов, различных кон11 ентраций красителя Бензобраун,О(нпества красочных з 11 волов, о. Фр.Байер и К. Резу.1 ьтаты сравнения, омеченные по 1 икле прибора. показывают количество холестерина в 1 сдгданного веи 1 ества, выраженное в миллиграм мах,Определение холестер 11 на производится по .методу, основанному ндвидоизмененной автором реакции Зал-,ковского. Основнь 1 м тоном 1 ит; ндарт-,ного раствора является желто-оранже вый, который колебле гся со 1 тветственно разным количествам холестерин в упомянутой реакции от светло-желг 11 х оттенков в слдбых рдзведениях до оранжево-красных в более сильнь 1 х. Кджд 11 Я гг 1 д 1 п 1 и 51 1 итдн;1 дртного раствг 1- ра крас 11 теля стро 1 о соответствует 1 гвету х.н;роформенного слоя реакции Здлковског 11, проведенной безводно с известны яп количествмп чистого холестерин.Приоор состоит из:) Зап 11 янн 1 х стек.1 янньх цпл 11 н" , ров п с плоским лном, пмею 1 цих одинаковые размер 1 и содержгппих цветнук 1 жидкость;2) редктпв 11 ого цп.и 1 ндрд 6, тех же размеров;3) окр 11 п 1 енного белой крск 1 й пиатива с тремя полкдм 11, которых пролелань 1 ОтВЕРстия 1 ЛлЯ вСтВЛЕния нилин,.1 ров. прп чем ц 11 линлры с штан,1 ртными растворми рдсп лагдются через одно отверстие, чтобы между ними могли вставляться редктивные цилиндры для сравнения;4) футляр с крыппой для преаохр.1- нения дм 1 тл от действия света.Осноии, раствор красители и каииих иа 100,0 кто, сок 70% спирта 6,1 О 1620 26 30 3640 Цветная жидкость, заключдющ;,яся в цилиндрах, представляет собою разведения красителя Вепхо-Ьдгп 1 1) 3 1 л Вауега в 70% спирту. Указанный кра ситель спосооен давать все цветовые оттенки, ссютветсгвуюшие тонам реакции Залковского на холестерин. от О, мг до 10 мг.Приготовление разведений этого красителя распадается на три моменгд: а) приготовление основного раствора; о) приготовление спиртовых ( разведений красителя, соответственнореакции Залковского нд чистьи холе - стерни; с) установка этих разведений. Точно отвешивается определенное количество красителя, с расчетом полу-, чения/,о раствора в 70"о спирту. т.-е. ( 1,25 г красителя на 100,0 г 704 чистого спирта, Полученный рдсп вор оставляется, для лучшего растворения красителя, на несколько часов 6 8), при постоянном взбалтывании, затем,0,1 0,3 0,5 0,8, 1,0 1,3 1,5 Приво говленные растворы, во избежание возможного испарения спирта тотчас же разливаются в: цилиндры и запаиваются.Установка разведений красителя слагается, в свою очередь, из двух моментовс 1) постановки реакции Залковского на чистый холестерин в количествах от 0,1 до 10 яг и, 2) проверки полученных разведений цветовых растворов красителя с тонами соответствующих реакций нд холестерин.Цветовая шкала растворов набора. начиная от слабо-желтых оттенков, соответствующих содержанию холестерина в лецимиллиграммах, переходит в желтые тона, при содержании холестерина до 2-х мг, желто-оранжевые до 4 7 мг и оранжево-красные выше 7 ми мг. У каждой ампулы имеются цыфровые обозначения, указывающие непосредственно соответствуюгцее количество холестеринд, выфильтруется и хранится в теплом месте.Приготовленный таким образом раствор красителя имеет вид прозрачной жидкости интенсивного орднжевокрасного цвета, При приготовлении разведений цветовой раствор отмеривается каплями, при помощи пипетки с диаметром отверстия 2 л 1 л с резиновым шариком; один куб. см основного раствора красителя содержит 56 капель, отсчитанных этой пипеткой.Приготовление растворов различных концентраций красителя. соответственно тонам реакции на чистый холестерин, производится путем дальнейшего разведения основного раствора в 70" о спирту. Расчет для кажлого о гтенка произьодится в каплях красителя 100,0 куб. см 70,4 спирта. Такич образом, таблица приготовления разве. дений краски Выражается следующим ооразом: 2,3 2,5 2,8 3,0 3,5 4,0 5 О 6,0 7,0 10,0 46 50 56 , 60 80 ,100,200 300 400 800 раженное в чиллиграммах (рго шИ 1 е - 1 ОО). Например, если по указанному методу оерется для исследования 1 куо. ся сыворотки и при сравнении получается сходство оттенка хлорофорченного слоя реакции с д:чпулой, имеющей обозначение 1,5%то содержание чистого холестерина в 1 куб. см данной сыворотки равно 0,0015 мг или 1,5 г на литр сыворотки.Определение холестерина в кровян: й сыворотке и тканях, с помощью предлагаемого прибора, слагается из: а) приготовления исследуемого материала, о) обработки его, в) реакции, г) колориметрического определения количества холестерина в исследуемом материапе. Успех этих определений зависит от тпгательности выполнения указанных деталей и условий постановки опыта, а также от чистоты и качества реактивов. Для получения сыворотки берется кровь в количестве 5 - 10 куб. см излоктевой вены у человека, цз г. 1 цр 11 а 11 В у собак и кошек и из уха или сердца у кроликов. Кровь необходимоорать натощак. Во избежание гемолизд крови, пробирки и шприц должны быт или совершенно сухими, или промыты физиологическим раствором. Сыворо 1 ку желательно исследовать повозможности в свежем виде (не позже 1 2 3 дней после взятия крови). Ге- ( молцзцрованные и содержащие эритро- , цить. сыворотки рекомендуется неупотреолять для опыта.Полученная обычным способом (стояние крови на холоду, центрофугирование прозрачная сыворотка сливается в чистую пробирку и подвер-1 дется 11 дльнейц 1 ей Ооработке. Для зто 1 о отмеривается, с помощью сухой градуированной пипетк 11, 1 куб. с 1 прозрачной сыворотки иприоавляется каплями в широкогорлую склянку с притертой пробкой, емкостью в 30 25 уб. С 11, в которую прелварительно ндлиьдется 5 куб. см аосолютного ал ОГО.151. Сывороткй, соприкасаясь с алкоголем. превращается в мелкий х:юпьевидный осадок. Последний слегка размесшивдется в спирту осторожным 1 юкдчцванием банки или же продуванием воззухд через пипетку. Затем, склянка тотчас же стдвцтся в сушильный шкаф с температрой не менее 55 60 С, зо полной отгонкц спирта ц полного высыхания остатка. Только црц гакоц температуре сухой остаток превращается В цельную, легко Отстающую от;1 на склянки корочку, слегка желтоватого цвета ц почти прозрачную. Более низкая температура ,1 ает цл 11 аморфную белую 11 ссу, которая может заключать в себе остатки влаги, или прилипдние корочк . ко;1 ну склянки. Первое влияет на изменение цвета реакции в сторону розоватых тонов, вгорое может влиять на точность исследования. Точно тдкле. более высокая температура слишком ускоряет Отгонку спирта и уменыпдет, таки:ч образом. его обрабатываюнее действие, Отгонка обычно прололжается от б ЛО 12 часов.П 1 ученный сухой остаток сь 1 воротки измельчается в банке при помо 1 ци зетдллического ц 1 пателя, высыпается в хорошо высушенную ступку, тщательно растирается и снова высыпается обратно в банку. Плотно приставшие к бокам бднки частицы во время реакции смываются растворяются хлороформом ц серной кислотой.Сыворотку, в вц,1 е сухого остатки и непре:менно в тех же склянках, можно сохранять неопределенное время в эксикдторе или при обычных условиях в лаборатории. но в последнем случае ев неооходимо повторно просушить перез реакцией, которая производится с с- хим остдтком сыворотки, обрдботанной только алкоголем. Другие составные части плазмы (лецитин. глобулин, соли и проч.) особого значения зля реакции не и.меют, так как зтц вешс- стВЯ, если даже 11 ИЗВле 1 дк 1 тся, О х 1- рактерного тона этой реакции не дают.Реакция производится следуюппгм образом. В банку. созерж;пцую превр:- п 1 енную в порошок сыворотку, точно отмеривается 5 куб. сл 1 чистого хло 1 - форма ц равный обем- химически чистой концентрированной серной кислоты. Смесь осторожно взбалть 1 вается пока п 1 вднием ганки В течение 1 мин. Ло появления жела.п 1 но-подобного вцзд мдссы и ставится в темное помещение, прцблцз 1 ггеььц, ндчаса. до отстаивания хлсроформенного слоя. После того, хлороформенный слой сливается в хоропо высушенную пробирку одинакового размера с здпдяннь 1 ц цилиндрами прибора, закрывается пробкой ц сравнивается с оттенками растворов красителя.Правильность получения результатов реакции находится в зависимости от ячествя редктивОВ, температуры 11 безводного протекания реакццц.Качество серной кцс:юты 1 о 1 еет ОсоОЕННО ВЯЖНОЕ ЗНДЧЕНИЕ. НЕООХОДЦМО пользоваться серной кислотой химически чистой. концентрцговднной, с узельным весом 1,846. Кислота с низшимлельн 1,С Весо 11, созержгппая больший процент возы, влияет нд цзменеш е цветового тона реакции. перевозя нормальные желтые тона в розоватые и лаже фиолетовь 1 е оттенки. Обычно в реакции тон слоя хорошей серной кислоты бывает почти олинаковой интенсивности с тоно хлтрофОРМЕННОО СЛО 5 ИЛИ НЕСКОЛЬКО Ей- нее. О качестве серной кислоты можно также судить по тону хлороформенного слоя реакции, которьй в соо веп-, ствующих дозировках холестерина не должен уклоняться от оттенков проверенных тонов.Перед началом работы желательно проверить качество хлороформа. Проверка производится тем же способом, как и проверка серной кислоты. Ставится реакция Залковского с чистым холестерином, и при соблюдении указанных условий она должна дать определенное соотношение оттенков хлороформенного слоя и слоя серной ки-слоты. Хорошего качества хлороформ не должен давать быстрого обесцвечивания розовых оттенков; кроме того, он должен соответствовать тем или другим оттенкам цветовой шкалы набора.Для обработки сыворотк 5 по предлагаемому методу необходим безводный, по возможности, алкоголь. При приготовлении абсолютного алкоголя путем обезвоживания прокаленным порошком медного купороса, необходимо, следить за тем, чтобы он совершенно не содержал частиц такового, гак как последние могут влиять на изменение цветового тона реакции в сторону розоватых оттенков. Это может быть оояснено тем, что попавшие в сыворотку частицы медного купороса приобработке алкоголя забирают воду из нее и удерживают ее при тейпертур 55 - 60 в термостате, в реакции же они, повидимому, отдают частицу кристаллизационной воды серной кислоте.Температура итмеет значение, гл 5 вным образом, для реакции с чистым холестерином, При этом максимум тонанаступает: при температуре 10 о через 20 минут, при темпердтуре 1 2 1 5 - через 1 5 минут, при температуре 20 - через 10 минут.При более дпительной реакции, независимо от температуры, наступает изменение цветовых тонов реакции.Реакция на холестерин с сывороткой обычно достигает максимума через ,4 - 1 ч. при температуре 10 - 14 о С и должна проводитьсяввозможно сухом виде, вследствие чего реактивы должны быть, по возможности. безводны, кроме того, необходимо изсегать попадания влаги из воздуха, плохо высушенной сыворотки и посуды.Определение количества холестернна, содержащегося в исследуемой сыворотке, производится сравнением тона хлороформенного слоя реакции с тонами растворов красителя. Для этого, по прошествии определенного вреленкч хлороформенный слой слиьчется в маленькую пробирку, одинаковой толщины стекла и емкости с таковыми в приборе, закрывается пробкой и вставляется в штатив, для сравнения с теми или иными тонами красителя, кс 5 торое должно производиться быстро, так как при продолжительном стоянии может последовать изменение оттенка.Сравнение лучше производить пр 1 дневном свете, падающем перпендикулярно к п.поскости прибора, и на уровне глаз исследователя.Для определения количества холесерна в кровяной сыворотке достаточно брать на реакцию 1 уб. сл сы,воротки; но в некоторых случаях. где почему-либо взятие крови в больном количестве сопряжено с большими трудностями, можно обходиться с 0,5 уб. ся сыворотки, соответственно уменьшая количество реактивов в два раза. предмет пйт:нтй,Набор для колориметрического определения холестерина в крови и других животных тканях при помощи проьеденной безводно реакции Залковского, отличающийся тем, что он состоит из ряда запаянньх стеклянных цилиндров, имеющих одинаковые размеры, содержащих растворы различных концентр.- ций красителя Бензобраун, Обвества красочных заводов, б. Фр. Байер и Ко, а равно из одного или нескольких таких же размеров открытых стеклянных реактивных цилиндров д.пя сравнения оттенка испьпуемого холестеринового раствора с оттенками растворов указанного красителя.тино.нитогра 4 ия Бра ный Пннатнина, Тонпнт ран, Чон 1 нународный. 75.

Смотреть

Заявка

78525, 26.06.1924

Крастелевская С. А

МПК / Метки

МПК: G01N 33/52

Метки: набор, холестерина, крови, животных, тканях, других, колориметрического

Опубликовано: 15.09.1924

Код ссылки

<a href="http://patents.su/5-3255-nabor-dlya-kolorimetricheskogo-opredeleniya-kholesterina-v-krovi-i-drugikh-zhivotnykh-tkanyakh.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Набор для колориметрического определения холестерина в крови и других животных тканях</a>

Похожие патенты