Способ получения фракции иридоидов, обладающей способностью повышать физическую работоспособность

Номер патента: 1028335

Авторы: Арутюнян, Ширинян, Ерибекян, Авакян, Мнацаканян

Скачать ZIP архив.

Текст

,102833 СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНРЕСПУБЛИН А ОА 61 ОБРЕТ тюнян,О.М.АваГОСУДафбтВЕННЦЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ ИОТНРЦТИИ ОПИСАНИЕ ИЗН АВТОРСКОЬВУСВИДЕ(71) Ордена Трудового Красного Знамени институт тонкой органической.химии им, А.Л.Мнджояна(56) 1, Тг 1 щ Н. апй Н 1 И Н, ТЬеРгеоага 1 оп апй Ргойегг 1 оп оХ АцсцЬ 1АврегцРав 1 йе апй Яоще ВеРагей СЯусав 1 йев,- "ТЬе В 1 осЬещ 1 са 0", 1952,ч.50, Р 3, р.310-319.2. В 1 апсо А., Сц 1 во М.,ачагопе С,Раввасапг 1 РР 1 Р., Тгоуо 0 о С(54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФРАКЦИИИРИДОИДОВ, ОБЛАДАЮЩИХ СПОСОБНОСТЬЮ ПОВЫШАТЬ ФИЗИЧЕСКУЮ РАБОТОСПОСОБ -НОСТЬ, путем экстракции надземнойчасти растения рода ЧегЬавсцщ низшимспиртом с последующим упариванием,промывкой бензолом и очисткой наколонке с сорбентом, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью,расширения сырьевой базы, в качестверастворительного сырья используюткоровяк джунгарский (ЧегЬавсцщвоп 9 аг 1 сцщ ЯсЪгеп 1), который экстрагируют метаноллом при соотношениисырье:экстрагент - 1:(18-21), упаренный экстракт растворяют в воде,промывают последовательно бензолом,эфиром, хлороФормом, далее экстрагируют этилацетатом при соотношенииводная фаза;экстрагент 3:20, упаривают, растворяют в воде, Фильтруютчерез слой окиси алюминия и упаривают.Глюкоза, М 0,28Сахароза, Вг. 0,25 14,0+0,5 8,3+0,4 Изобретение относится к получениюбиологически активных природных сое-.динений, конкретно к выделению израстения коровяк джунгарский (ЧегЬазсцщ зопуаг 1 сцв БсЬгеп)с семействаноричниковых) фракции иридоидов 5(смеси аукубина, б-п-кумароилаукуби-.на, глюкозы и сахарозы), обладающейсвойством повышать, выносливость организма при стрессе. Укаэанная фракция и способ ее выделения могут найти 10применение в медицине для получениястимуляторов физической деятельности в условиях стресса.Известен способ получения Фракциииридоидов посредством экстракциирастительного сырья водой или спиртами в присутствии углекислого кальция (или без него) с последующейочисткой экстрактов от балластныхвеществ ацетатом свинцаили промыванием органическими растворителями ихроматографированием на колонках с,различными адсорбентами (1),Наиболее близким к предлагаемомупо технической сущности являетсяспособ получения фракции иридоидов,заключающийся в том, что растениеЧегЬазсцт з 1 пиашп экстрагируютспиртом, экстракт упаривают, промывают бензолом и очищают на колонке с активированным углем (2 1. ЗООднако известный способ не обеспечивает получение фракции иридоидовпроявляющей свойство повышать выносливость к стрессу, коровяк джунгарский в качестве сырья для получения иридоидов не используется,Целью изобретения является расширение сырьевой базы.Поставленная цель достигается тем,что согласно способу получения Фракции иридоидов, обладающей способностью повышать физическую работоспособность, путем экстракции подземной части растения рода ЧегЬазсигпнизшим спиртом с последующим упариванием, промывкой бензолом и очисткой .на колонке с сорбентом в качестве растительного сырья используют коровякджунгарский (ЧегЬазсщп зощаг 1 сигаБсЬгепК), который экстрагируют металлом при соотношении сырье:экстрагент 1:(18-21), упаренный экстрактрастворяют в воде, промывают последовательно. бензолом, эфиром, хлороформом, далее экстрагируют этилацетатом при соотношении родная фаэа:экстрагент 3:20, упаривают, растворяют в воде, фильтруют через слойокиси алюминия и упаривают. П р и м е р 1. Воздушно-сухую надземную часть коровяка джунгарского 60 (5 кг) исчерпывающе экстрагируют метанолом. Экстракт упаривают досуха при пониженном давлении. Остаток (600 г густой смолы) растворяют в 600 мл воды, промывают йоследовательно (порциями по 2 л) бензолом,эфиром и хлороформом, затем зкстрагируют этилацетатом (10 раз по 0,5 лЬИз объединенного этилацетатного раствора отгоняют при пониженном давлениирастворитель, остаток (15 г) растворяют в 100 мл воды, профильтровываютчерез слой окиси алюминия (10 см;200 г), предварительно промываютводой. Затем окись алюминия промывают150 .мл дистиллированной воды водныефильтраты объединяют и упаривают припониженном давлении. Остаток (12,5 гсветло-коричневой смолы) при хроматографировании на бумаге (системарастворителей н-бутанол - уксуснаякислота - вода 4:1;5, обнаружительбензидиновый реагент) проявляется ввиде четырех пятен с ВГ 0,80; 0,51;0,28 и 0,.25,П р и м е р 2, Определение содержания компонентов фракции иридоидов.Три навески по 0,2 г иридоидных фракций, полученных из трех образцов коровяка джунгарского, растворяют каж дую в 0,5 мл воды и растворы наносят на стартовые линии трех листов хро,матографической бумаги марки М, предварительно промытых метанолом и высушенных. Листыхроматографируют нисходящим способом в вышеприведенной системе растворителей до 50 см пробе" га подвижной фазы, затем хроматограммы высушивают в токе воздуха от краев отрезают продольные полоски (по 0,5 см шириной), которые про" являют бензидиновым реагентом. Зоны хроматограмм, соответствующие проявившимся на полосках пятнам, отрезают и отдельно экстрагируют метанолом, Получают 12 экстрактов (по 4 с каждого листа), Метанольние экстракты упаривают досуха и остатки взвешивают.Содержание компонентов фракции иридоидов коровяка джунгарского, Ъ: б-пара-Кумароилаукубин, Вй 0,80 51,512,7 Аукубин, ВГ 0,51 25,6+2,5 П р и м е р 3. Идентификация ком" понентов Фракции иридоидов,Вещество с М 0,25 имеет состав С 2 Н 2 О, т.пл, 184-186 С, 01 == +ббпр+10. Оно идентифицировано с сахаровой хроматографически и плавлением пробы смешения.Вещество с М 028, состав С Н 20 т.пл. 147 С, идентично по хроматографическому поведению глюкозе. Вещество с ВГ 0,51, состав 6 НС 5 Н ОЗ, т. пл. 180 С (из водного 15 22спирта), Гс(32"= -170+3 (с,1, вода), (ацетильное производное, т.пл. 1260ИС - СН=СН/ОК 1О 127 С) идентифицировано хроматографически и сравнением ПМР-спектров (ацетатов) с аукубином.Вещество с М 0,80 (1) имеет состав С +Н О т.пл, 114-115 С (изэтанола), Ыф=-125+2,50 (с,48,.метанол). Гексаацетильное производное состава С НО ,с т.пл. 61-б 2 Сполучили выцерживанйем 41 мг (1) всмеси 1 мл пиридина с 2 мл уксусногоангидрида в течении 24 ч, последующим разбавлением 100 мл воды, экстракцией хлороформом, промыванием хлороформного раствора водой, высушиванием безводным сульфатом натрия, отгонкой растворителя и перекристаллизацией остатка (49 мг) из смесихлороформ - эфир 1:2,Щелочной гидролиз (1), Раствор70 мг (1) в 2,5 .мл 0,05 н. раствораедкого кали оставляют при комнатнойтемпературе на ночь, затем помещаютна колонку с сефадексом 1 Н. Колонку промывают водой. Водные элюатыобъединяют, упаривают досуха, остатокперекристаллизовывают и получают 28 мг 25аукубина.В УФ-спектре (1) наблюдаются максимумы поглощения при 206, 219 и310 нм, подтверждающие иридоидныйха 1)актер (1) с незамещенной енолэфирной связью. В ПМР-спектре (1)имеются сигналы четырех протоновпара-замещенной бензольной системы,сигналы двух винильных протонов, характерных остатку транс-коричной кислоты, сигналы двух протонов незамещенной енол-эфирной системы при С3и С 4 аукубинового скелета, а такжесигнал олефинового протона при5,60 м.д. В ПМР-спектре гексаацетата. наряду с сигналами пяти ацетоксигрупп, 40при 2,00 м,д. имеется трехпротонныйсинглет одной ацетоксигруппы (при2,26 м.д,), находящийся при ароматическом кольце. В масс-спектрах (1).фрагментов с щ/е 1,64, 147, 119 и,соответственно, 206, 189, 161, отвечающие иону п-оксикоричной кислоты (и и-ацетоксикоричной кислоты)и ионам, образовавшимся в результате последовательного выброса изнее гидроксила и окиси углерода.Таким образом, (1) является аукубиновым эфиром и-оксикоричной кислоты. В масс-спектре гексаацетата(1) имеется интенсивный пик с т/е 331соответствующий фрагменту тетрацетилглюкозы. Это показывает, что остаток параоксикоричной кислоты находится не при глюкозильной части.молекулы, Ацетилирование (1) сопровождается парамагнитным сдвигом сигналов протонов двух оксиметильныхгрупп на 0,42 м.д, Это означает,что в (1) Остаток оксикоричной кислоты этирифицирует С -гидроксильную 65 группу аукубина.и, таким образом,строение (1) соответствует структуре б-п-кумароилаукубина Снг 0 - Р - Ис0 НДействие фракции иридиодов изуча" лось в сравнении с известными синтетическими стимуляторами психической и Физической деятельности организма - фенамином и пиридролом и адапто генея растительного происхождения- экстрактом элеутерококка.О .действии препаратов на выносливость к комбинированному стрессу (сочетание мышечной работы, антиортостатической нагрузки и гипотерми) судили по разнице в максимальной длительности физической деятельности фиксированных (вниз головой) за хвост над поверхностью воды (с температурой 18 С) интактных и опытных крыс, вынужденных совершать беспрерывные плавательныее движения. Длительноать Физической деятельности определяли в минутах от начала опыта до наступления полного мышечного утомления животных, в результате чего они гибли, захлебйваясь водой.Фракцию ирщоидов коровяка джунгарского и сравниваемые а ним фенамин, ниридрол:и экстракт элеутерококка (упаренный досуха спиртовый экстракт) растворяли отдельно в 0,5 мл дистиллированной воды и вводили внутрибрюшинно или подкожно )однократно (за 1 ч до опыта) или ,двукратно (за 24 ч и за 30 мин до начала опыта) крысам весом 130- 150 г в диапазоне доз от 0,5 до 100 мг сухого препарата, на 1 кг живого веса. Контрольным крысам вводили 0,5 мл дистиллированной воды.Стимулирующее действие Фракции ирндоидов.проявляется лишь при двукратном введении. Максимальная эффективная доза 30 мг/кг, двукратное введение такой дозы приводило к увеличению выносливости к стрессу при внутрибрюшинном применении на 34, а при подкожном - в среднем на 40.Эффективная доза элеутерококка при подкожном двукратном введении 50 мг/кг, выносливость увеличивалась на 40, фенамин и пиридрол положительно действовали (+42 и +47) только в дозах 2:,0 и 1,25 мг/кг соответственно. При снижении илиувеличении доз статистически значимые положительные сдвиги исчезали ипоявлялись их отрицательные эффекты.Как однократное введение фракциииридоидов и экстракта элеутерококка,так и двукратное введение фенаминаи пиридрила не приводило к увеличению работоспособности крыс,В отдельной серии опытов былаопределена выносливость крыс к комбинированному стрессу при введении им 10смеси глюкозы и сахарозы в количестве, соответствующем их содержанию во фракции иридоидов, при дозе 30 мг/кг, Смесь глюкозы и сахарозы вводили два раза в сутки внутрибрюшинно или подкожно иэ расчета4,2 кг/кг глюкозы и 2,49 мг/кг сахарозы. При подобной постановке опыта не выявлено повышение выносливос.ти как при внутрибрюшинном, так и 20при подкожном введении.Эти данные указывают, что иэкомпонентов фракции иридоидов существенную роль в повышении физической выносливости в условиях стрессаиграет смесь 6-пара-кумароилаукубинаи аукубина.Острую токсичность фракции иридоидов, экстракта элаутерококка, пиридрола и фенамина изучали в опытахна белых мышах весом 20-22 г, Препараты растворяли в 0,2 мл воды и вводили внутрибрюшинно мышам. Каждуюдозу следовали на шести животных,которых помещали в клети размером22-35 см при температуре 22 дС. По 35Литчфильду-Уилксону подсчитывалиЬРО препаратов, которая для фракциииридоидов составила 12200 (1184412566) мг/кг, для экстракта элеутерококка - 5600(4409-7112) мг/кг, для 40фенамина 137(126-149) мг/кг и дляпиридрола - 117(96-143) мг/кгПодсчеты показали, что,различиев токсичности фракции иридоидов и остальных контрольных препаратов значимо при РС 0,001, т,е, фракция иридоидов в.два раза менее токсична,чем экстракт элеутерококка, и почтив 100 менее, чем фенамин и пиридрол.Отношение ЬРО препаратов к ихмаксимально эффективным дозам следующее: фракция иридоидов 488,экстракт элеутерококка 112, пиридрол 93, фенамин 68.В опытах на наркотизированныхнембуталом крысах весом 180-200 гизучали действие фракции иридоидови контрольных препаратов на артериальное давление и частоту дыхания.Артериальное давление регистрировали в бедренной артерии (предвари- бОтельно вводили 500 ед/кг гепарина)с помощью ртутного манометра, о частоте дыхания судили по количествувходов в минуту. Испытуемые вещества растворяли в дистиллированной во" де и вводили в бедренную вену. Фракция иридоидов как в дозе 10 мг/кг,так и в дозах, превышающих максимально эффективную дозу, не вызываету крыс статистически достоверных изменений артериального давления, Упиридрола и фенамина сдвиги в артериальном давлении и дыхании обнаруживаются уже в меньших дозах, чемих эффективная доза, вызывающая повышение выносливости к комбинированному стрессу,,В указанных дозах фракция иридоидов и экстракт элеутерококка недействуют на частоту дыхания, в товремя как фенамин и пиридрол уже вдозах 0,5 и 2,0 мг/кг соответственноувеличивает частоту дыхания.В опытах на семявыносящем протоке крысы исследовали действие фракции иридоидов и контрольных препаратов на,адренорецепторы и на проведение возбуждения через симпатические нервы. Это действие определяли по изменению (в Ъ к контролю) сокращений семявыносящего протока, вызванных адреналином в концентрации 1 10 6 г/мл и трансмуральным электрическим раздражением, Фракция иридоидов и экстракт элеутерококка испытывались в конечной концентрации 1 10 5 г/мл, а фенамин и пиридрол в концентрации 0,05 мкмоль/мл.Полученные данные свидетельствуют о том, что Фракция иридоидов и экстракт элеутерококка не действуют на симпатические нервы и .адренорецепторы семявыносящего протока крысы. Пиридрол обладает значительным, но кратковременным симпатолитическим и длительным адреномиметическим действием, а фенамин блокирует адренорецепторы.Полученная по предлагаемому способу фракция иридоидов, состоящая из смеси аукубина (25,6+2,5), 6-и-кумароилаукубина (51,5+2,7), глюкозы (14,0 ф 0,5) и сахарозы (8,3+0,4 О), обладает выраженным свойством повышать выносливость к комбинированному стрессу и в отличие от прототипов по действию (фенамина,пиридрола и экстракта элеутерококка) проявляет активность в более широком диапазоне доз, значительно менее токсична, а стимулирующее действие не сопровожда- ется изменением артериального давления и другими симпатомиметическими эффектами.Фракция иридоидов может быть использована для повышения Физической ра.ботоспособности здоровых людей в нормальных и специальных условиях (например, в условиях невесомости или сурового климата, вызывающих,1028335 ФСоставитель Т.Журавкина Редактор Л.Веселовская Техред Т,фанта Корректор А, Ильин Заказ 4839/5 Тираж 713 ВИИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открыткой 113035, Москвау Ж, Раушская наб., д. 4/5Оодписное филиал НПП ффПатент, г. Ужгород, ул. Проектная,4 Ф соответственно, повышенный приливкрови в верхнюю половину тела илигепотермию), а также при эаболеваниях, сопровождакщихся пониженнойработоспособностью, вялостью, адинамией.

Смотреть

Заявка

3307204, 25.06.1981

ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ИНСТИТУТ ТОНКОЙ ОРГАНИЧЕСКОЙ ХИМИИ ИМ. А. Л. МНДЖОЯНА

МНАЦАКАНЯН ВИЛЕН АКОПОВИЧ, АРУТЮНЯН ЛАРИСА СУРЕНОВНА, ЕРИБЕКЯН МАРИЯ ИВАНОВНА, ШИРИНЯН ЭДГАР АРАМОВИЧ, АВАКЯН ОВАНЕС МНАЦАКАНОВИЧ

МПК / Метки

МПК: A61K 35/78

Метки: работоспособность, иридоидов, фракции, повышать, физическую, обладающей, способностью

Опубликовано: 15.07.1983

Код ссылки

<a href="http://patents.su/5-1028335-sposob-polucheniya-frakcii-iridoidov-obladayushhejj-sposobnostyu-povyshat-fizicheskuyu-rabotosposobnost.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ получения фракции иридоидов, обладающей способностью повышать физическую работоспособность</a>

Похожие патенты