Индикаторное тест-устройство для определения концентраций субстратов ферментативных реакций

Номер патента: 1768642

Автор: Александровский

Скачать ZIP архив.

Текст

(21) 4397829 (22) 28.03.88 (46) 15.10.92 (71) Институт (72) Я. А. Але (56) Авторско И. 1155944,Выложе М 3510992,13 СССР области анбыть исполдованиях,ой промыш нанесения образца лен от реагентов, и агентов, как и слой выполнены на осноУстройство инд показано на фиг. 1 и 2 - крышки, испол ции реагентов внут осится к и может их иссллогичес произв - упро снижен одстве.щение техноие себестоитранспортировк показана капсул ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМРИ ГКНТ СССР ИСАНИЕ ИЗ Бюл. М 38химической физики Аксандровскийе свидетельство СССРл. С 12 0 1/26, 1985,ная заявка ФРГл. С 12 М 1/40, 1985.(54) ИНДИКАТОРНОЕ ТЕСТ-УСТРОЙСТВОДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИЙСУБ СТРАТО В Ф Е РМ Е НТАТИ ВН ЫХ РЕА КЦИЙ(57) Изобретение относится к аналитической биохимии и может быть использовано в клинических исследованиях, в пищевой и микробиологической промышленности, бродильном производстве. Цель изобретения-снижение себестоимости и упрощение технологии изготовления индикаторного тест-устройства, Индикаторное тест-устройство для определения концентраций субстратов ферментативных реакций представляет собой капсулу, выполненную из прозрачного термостойкого материала, составные части которой содержат слой истинного студня для нанесения образца и Изобретение отн литической биохимии зовано в клиническ пищевой и микробио ленности, бродильном Цель изобретени логии изготовления и мости.Индикаторное тест-устройство выполнено в, виде капсулы, в которой слой для реагенты, которые также могут быть включены в студень. Причем слой для нанесения образца и слой студня, содержащий реагенты, пространственно отдалены друг от друга и находятся в разных частях капсулы, После контакта с исследуемым образцом в течение нескольких минут части капсулы, содержащей слой для нанесения образца, капсулу герметизируют и опускают в теплую воду, температура которой не превышает 60 С. За несколько минут пребывания в таких условиях студни, находящиеся в капсуле, расплавляются, смешиваются, что инициирует протекание реакции, сопровождающейся изменением цветности, Визуальная оценка интенсивности окраски позволяет судить о концентрации анализируемого соединения в исследуемой пробе с ошибкой не более 25%. В случае применения фотометрз с помощью индикаторной тест-капсулы можно проводить количественный анализ, Для формирования студней используют желатину, агар-агар и некоторые другие соединения. Конструкция индикаторных тест-капсул фактически позволяет реализовать любой спектрофотометрический способ анализа субстратов ферментативных реакций, 3 ил. пространственно отдеричем некоторые из редля нанесения образца, ве истинных студней, икаторной тест-капсулы 2, где 1 - части капсулы, зуемые для герметизари частей капсулы при и хранении. На фиг, 3 сборе, где 1 - манжеталюбой конструкции, используемая для герметизации реагентов внугри капсулы в процессе проведения анализа,Капсула может быть изготовлена из лю.бого термостойкого прозрачного материала, например, стекла или пластмассы. Размеры капсулы, зэ исключением ее внутреннего диаметра, не имеют принципиального значения. Внутренний диаметр определяет количество субстрата, поступившего из образца в капсулу. Каждую часть капсулы используют для формирования в ней слоя для нанесения образца либо реакционного слоя, либо для хранения реагентов, не вошедших в реакционный слой. Выбор хранения реагентов в сухом виде или помещение их в реакционный слой, равно кэк и количество реакционных слоев, зависящее от числа реагентов, определяется условиями, необходимыми для длительной сохранности реагентов, и условиями проведения реакции. Формирование указанных слоев проводят на.основе соединений, образующих при температуре до 30 С истинные студни, способных изменять свое агрегатное состояние. в зависимости от температуры /гель-раствор/, К таким соединениям относятся желатина, агар-агар, поливиниловый спирт, метилцеллюлоза и некоторые другие, Так, например, при температуре до 30 С 10 раствор желатины представляет собой студень. а с повышением температуры легко расплавляется с образованием раствора, в котором коэффициент диффузии низкомолекулярных соединений практически не отличается от коэффициента диффузии в воде.Определение концентраций субстратов ферментативных реакций с помощью индикаторных тест-капсул проводят следующим образом: на слой для нанесения образца помещают на определенное время несколько капель исследуемого раствора. В течение этого времени в слой студня происходит диффузия ниэкомолекулярных соединений и, в частности, анализируемого соединения.Количество продиффундировавшего субстрата будет прямо пропорционально его концентрации в образце /и диаметру части капсулы, содержащей слой для нанесения образца/, который удаляют смыванием мягкой струей воды или встряхиванием. Капсулу герметизируют, соединяя с другими ее частями. содержащими реакционные слоя и реагенты, и помещают в теплую воду /с температурой не ниже 37 С и не выше 60 С/ В результате чего студень расплавляется, слой для нанесения образца и реакционные слои смешиваются, растворяя сухие реагенты, что инициирует ферментативную50 55 П р и м е р 2. Индикаторные тест-капсулы для определения концентрации зтилового спирта,Приготовление реакционного слоя; 1 г желэтины, 20 мг алкогольоксидээы, 10 мг фенола, 20 мг пероксидазы, 20 мг 4-аминоэнтипирина,.10 мг аэида натрия и 10 мг семикарбаэида растворяют при 40-45 С е 10мл фосфэтного буферного раствора /0,2 М рН 7,8/, содержащего 1 мМ ЭДТА, 100 мкл реакцию. Через 5-15 мин после начала реакции производят сравнение окраски индикаторной тест-капсулы со стандартнойшкалой,5 П р и м е р 1. Индикаторные тест-капсулы для определения концентрации глюкозы,Приготовление реакционного слоя: 1 гкелатины, 20 мг глюкозооксидаэы, 10 мгфенола, 20 мг пероксидазы, 20 мг 4-амино 10 антипирина и 10 мг азида натрия растворяют при 40-45 ОС в 10 мл фосфатногобуферного раствора /0,05 М рН 7,2/, 100мкл приготовленного раствора помещают водну из половин индикаторной тест-капсу 15 лы /высота 15 мм, внутренний диаметр 4мм/.Приготовление слоя для нанесения образца: 1 г желатины, 10 мг фенола и 10 мгэзида натрия растворяют при 40-45 ОС в 1020 мл фосфатного буферного раствора /0,5 МрН 7,2/. 100 мкл приготовленного растворапомещают. в другую половину /высота 10мм, внутренний диаметр 4 мм/ индикаторной тест-капсулы.25 Определение концентраций глюкозы спомощью индикаторных тест-капсул проводят следующим образом: в анализируемыйраствор помещают на 2 мин половину капсулы, содержащую слой для нанесения об-.30 раза. Через указанный интервал временизту часть капсулы извлекают, промывают водой, соединяют с другой половиной,содержащей реакционный слой, и помещаютв термостат /50"С/ на 10 мин, после чего35 сравнивают окраску капсулы со стандартной шкалой, изготовленной при использовании калибровочных растворов. Диапазонанализируемых визуально /по интенсивности окраски/ концентраций глюкозы с по 40 мощью приготовленных таким образоминдикаторных тест-капсул составляет 5-26мМ,Материал, из которого изготовленытест-капсулы - стекло, Герметизацию капсулы осуществляют с помощью небольших45 трубочек /длиной не более 4 мм/, полученных разрезанием силиконового шланга, которые плотно одевают на обе половинкикапсулы при соединении их торцами.Составитель А. СеменовТехред М.Моргентал Корректор И, шмакова Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 Редактор В, Трубченко м Заказ 3622 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/Б

Смотреть

Заявка

4397829, 28.03.1988

ИНСТИТУТ ХИМИЧЕСКОЙ ФИЗИКИ АН СССР

АЛЕКСАНДРОВСКИЙ ЯКОВ АЛЕКСАНДРОВИЧ

МПК / Метки

МПК: C12Q 1/26

Метки: ферментативных, реакций, тест-устройство, субстратов, индикаторное, концентраций

Опубликовано: 15.10.1992

Код ссылки

<a href="http://patents.su/4-1768642-indikatornoe-test-ustrojjstvo-dlya-opredeleniya-koncentracijj-substratov-fermentativnykh-reakcijj.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Индикаторное тест-устройство для определения концентраций субстратов ферментативных реакций</a>

Похожие патенты