Способ определения лизосомального катионного белка лейкоцитов

Номер патента: 709062

Авторы: Аладатов, Вишнякова

Скачать ZIP архив.

Текст

Совэ Советских Социалистицеских Республик(51)м. Кл," А 61 В 10/00С 01 И 1/28 с присоединением заявки ИоГосударственный комитет СССР по делам изобретений и открытийДата опубликования описания 15,01.80(71) Заявитель Кубанский государственный медицинский институт им.Красной Армии(54) СПОСОБ ОПРЕЦЕЛЕНИЯ ЛИЗОСОМАЛЬНОГО КАТИОННОГО БЕЛКА ЛЕЙКОЦИТОВ Изобретение относится к области медицины и может найти применение в лабораторной практике для оценки функционального состояния лейкоцитов.Известен способ определения лизосомального катионного белка лейкоци.тов путем приготовления мазка крови,его фиксации, окрашивания, высушивания, микроскопирования и определенияколичества белка по степени интенсивности окраски 11 . Однако известныйспособ не обеспечивает высокой точности определения, так как возможнопобочное диффузное окрашивание другихклеточных элементов. 15Целью Изобретения является повышение точности путем устранения диффузного окрашивания других клеточныхэлементов.эта цель достигается тем, что Фик сацию проводят в парах Формалина концентрации 8-10 при рН 8,1-8,2, окрашивание осуществляют прочным зеленымРЯР при концентрации красителя 0,010,05 мг в 1 М трис-буфере и непосред"ственно по окончании его проводят ок-рашивание сафранином при концентрации0,01-0,02,Способ осуществляют следующимобразом. 30 Приготавливают равномерно тонкий мазок из небольшой капли свежевзятой капиллярной крови после прокола пальца у человека или других частей тела у животных, Высушенные на воздухе при комнатной температуре мазки помещают на подставке вертикально в эксикатор и ФиксиРуют впарах. 8-10-но-. го Формалина при рН 8,1-8,2, который приготавливают из нейтрального 10- ного формалина путем добавления 0,1 Н, раствора КОН в количестве позволяющем довести рН до 8,1-8,2, Фиксированные мазки выветривают путем высушивания на воздухе не менее 5-10 мин, после чего проводят окрашивание в течение 3-4 мин анионным красителем - прочным зеленым РЯР, в 1 М трисбуфере.при концентрации в пределах .0,01-0,05 (10-50 мг сухого вещества в 100 мл 1 М трис-бефере) строго при рН 8,1-8,15, что поддерживают добавлением в раствор, минимальных количеств (в каплях) 0,1 Н. раствора КОН, после чего, минуя операцию промывания, проводят операцию докрашивания в течение 15 с последовательно по 5 с в трех порциях водного раствора сафронина при концентрации 001- 0,02, Фиксацию, окрашивание и докрашивание проводят при 20-24 С, Окрашенные мазки высушивают и микроскопируют под иммерсией светового микроскопа, При этом высушенные мазки хорошо сохраняют свою первоначальную окраску в течение 6 и более месяцев, что позволяет проводить повторные исследования для сравнения и контроля.П р и м е рВ условиях клиники, родильного отделения, амбулаторно поликлинического обслуживания, в школьно"дошкольных учреждениях при предварительном врачебном осмотре и одновременном общеклиническом исследовании крови выборочно проводились ,исследования предлагаемым способом у 125 здоровых и 117 больных различными заболеваниями в возрасте от 1 дня жизни цо 40 лет, Взятие крови проводилось путем прокола пальца, а 30 у 7 больных с диагностической целью брался пунктат костного мозга путем стериальной пункции, Из крови и костного мозга готовили мазки. Высушенные мазки на подставке помещали в эк сикатор, насыщенный парами 10-ного Формалина, который добавлением 0,1 н. КОН доводили до рН - 8,1-82, Фикса" цию мазков проводили в течение 5 мин, после чего Фиксированные мазки выветривали на воздухе в течение 5-10 мин, " .Фиксацию и последующие операции окрашивания проводили при комнатной температуре 20-24"С, Краситель прочный зеленый ГБР в количестве 50 мг сухого вещества растворяли и 100 мл 1 М трис- "35 буфере с добавлением по каплям, минимальных количеств 0,1 н, КОН строго до рН 8,1, Окрашивание фиксированных и просушенных мазков проводили погру-. жением в красящий раствор на 3 мин, 40 после чего мазки без промывания погружали последовательно в три сменных раствора сайранина 0,01-ного,приготовленного путем растворения 10 мг сухого вещества в 100 мг дистиллиро ванной воды, докрашивание з каждой смене раствора сафранина проводили по 5 с. Окрашенные мазки высушивали и микроскопировали под иммерсией.50В полЕ зрения обычного световогомикроскопа под масляной иммерсиейполученные предлагаемым способоммазки крови и костного мозга выглядятследующим образом:55 эритроциты тусклого светло-розового цвета обычной йормы;лимйоциты и моноциты -характерной присущей им формы с хорошо выражен ной клеточной структурой с блеДно- розовой цитоплазмой и ярко-розовым ядром, лишенные катионного белка;эозинофилы обычной Формы, с характерным типичным ядром ярко-розового 65 цвета с большим количеством крупных гранул от темно-зеленого, преимущесгвенно фиолетового, и темно-фиолетового цвета в цитоплазме;баэофилы обычной йормы с типичным ядром розового и ярко-розового цвета со значительным количеством гранулзеленого цвета в цитоплазме;нейтрофильные лейкоциты выделяются на общем Фоне клеток по содержанию большого количества мелких и более крупных гранул от светлого до темно- зеленого цвета,с хорошо выраженной структурой ядра, окрашенного в бледнорозовый цвет, в незрелых юных клетках в более насыщенные розовые тона до ярко-красного по мере их созревания.Получение четких контрастных гранул от светло-зеленого до темно-зеленого и Фиолетового цвета на Лоне хорошо выраженной морйологической структуры ядра и клетки в целом, позволяет дать количественную характеристику содержания катионного белка. В зависимости от степени зрелости и Функционального состояния лейкоцитов меняется и цветовая окраска лизосомальных гранул,определяемых количественным содержанием в них катионного белка,что позволяет группировать окрашенные. лейкоциты по различным степеням,.0,1,11,111,1 ЧЧ) при подсчете в 100 лейкоцитах и оценивать принципом Кар 1 оы с выведением среднеарифметического показателя, процентным отношением клеток с различной степенью, также графически ги сто гр аммой .РПредлагаемый способ обеспечивает высокую точность определения, техни- . ческую простоту и быстрое исполнение в лабораторных условиях, не требующих сложного оборудования.Предлагаемый способ позволит улучшить диагностику, своевременно назначить правильное лечение, что значительно сократит, в среднем до 10 дней, пребывание больного в больнице,Формула изобретенияСпособ определения лизосомального катионного белка лейкоцитов путем приготовления мазка крови, его Фиксации, окрашивания, высушивания, микроскопирования и определения количества белка по степени интенсивности окраски, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности путем устранения диффузного окрашивания других клеточных элементов, фиксацию проводят в парах формалина концентрации 8-10 при рН 8,1-8,2, окрашивание осуществляют прочным зеленым ГЯГ при концентрации красителя 0,01-0,05 мг в Х М трис-буфера и непосредственно709062 Составитель С.МалютинаТехред Н.Ковалева Корректор Е,Папп Редактор Л.Новожилова Тираж 673 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Рауюская наб., д. 4/5 тЗаказ 10041/5 фнлиал ППП Патент, г,ужгород, ул.Проектная,4 по окончании его проводят окрашивание сафранином при концентрации 0,01 О, 02. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1, Архив патологии, 38, 5, с,55-59.

Смотреть

Заявка

2567653, 19.01.1978

КУБАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ ИМ. КРАСНОЙ АРМИИ

АЛАДАТОВ АЛЕКСАНДР ГЕОРГИЕВИЧ, ВИШНЯКОВА АЛЬБИНА ПАВЛОВНА

МПК / Метки

МПК: A61B 10/00, G01N 33/49

Метки: лизосомального, белка, лейкоцитов, катионного

Опубликовано: 15.01.1980

Код ссылки

<a href="http://patents.su/3-709062-sposob-opredeleniya-lizosomalnogo-kationnogo-belka-lejjkocitov.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ определения лизосомального катионного белка лейкоцитов</a>

Похожие патенты