Среда для окрашивания глутатион-редуктазы на срезах тканей

Номер патента: 1721468

Авторы: Семенюк, Свиридов, Глазырин, Колесников

Скачать ZIP архив.

Текст

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК 172146 9) ыЫ 01 М 1 Е научВ.С- М.: УТА ЕЙ к медицине и клинической хия локализации, а глутатион-рееловека и живох воздействиях ение специфичпределения фердующим обр ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБР АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) Сибирский филиал Всесоюзногного центра хирургии АМН СССР(54) СРЕДА ДЛЯ ОКРАШИВАНИЯ ГЛТИОН-РЕДУКТАЗЫ НА СРЕЗАХ ТКА Изобретение относитсможет быть использовано вмии, а также для выявленираспределения и количестдуктазы в органах и тканях чтных в норме, при различньи в целях диагностики.Целью является повышности реактива и полного омента.Способ осуществляют с зом.Для получения предлагаемого реактивав 80 мл бидистиллированной воды растворяют 0,3-20,0 мг четыреххлористоводородной соли золота (раствор А), затем в 20 мл бидистиллированной воды растворяют 50-200,0 мг цитрата натрия (раствор Б), после чего растворы А и Б сливают и нагревают смесь до 100 С. Раствор приобретает стабильную рубиновую окраску, его охлаждают. Сывороточный альбумин в концентрации конечного раствора 0,5-5,0 мг/мл и окисленный глутатион (0,5-5,0 мг/мл конечной концент(57) Изобре именно к б вания. Цел ное выявл достигаетс да дополн глутатион следующих хлористово цитрат нат он и сывор и вода - д выявить фе тение относится к медицине, а иохимическим методам исследоью изобретения является поление фермента в ткани, Цель я тем, что инкубационная среительно содержит окисленный и сывороточный альбумин при соотношениях, мас.;: четырех- дородная соль золота 0,003-0,2; рия 0,5-2,0; окисленный глутатиоточный альбумин по 0,005-0,05 о 100. Среда позволяет полно рмент во всех структурах ткани. рации) растворяют в дистиллированнои воде. Затем эту смесь приливают к раствору коллоидного золота в соотношении 1:(6-9). Полученную смесь центрифугируют при 10000 9 в течение 1 ч. Супернатант удаляют и реактив, находящийся в виде неплотного осадка на дне центрифужной пробирки, ресуспендируют в минимально возможном объеме супернатанта. Хранится реактив в замороженном состоянии.П р и м е р 1. Для определения глутатион-редуктазы использовали реактив, приготовленный при следующем соотношении компонентов, мас.0,: четыреххлористоводородная соль золота 0,003; цитрат натрия 0,5; окисл ен ный глутатион 0,005; сывороточн ы й альбумин 0,005; вода - до 100 мл.Для гистологического исследования брали ткани желчного мешка и печени крыс, фиксировали в 40-ном растворе параформальдегида и после обычной гистологической проводки заливали в парафин-воск. Изготавливали полутонкие срезы, монтировали на стеклах, депарафинИровали и регид1721468 Для контроля специфичности окрашивания реактивом на срезе ткани ставили следующие реакции контроля: наслоение на срез ткани раствора альбумина, меченного коллоидным золотом; блокирование активных центров глутатион-редуктазы в срезе ткани нанесением раствора окисленного глутатиона, а затем воздействие реактивом; неспецифическая ингибиция редуктаз при помощи перикиси водорода. 40 50 Составитель Л, СтебаеваТехред М.Моргентал Корректор М. Пожо Редактор Н. Рогулич Заказ 947 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 ратировали обычными способами, затем наслаивали полученный реактив и оставляли на ночь во влажной камере при комнатной температуре.Результаты исследования.Отчетливо видна локализация расположения глутатион-редуктазы по дольке. Центролобулярные районы имеют более интенсивное красное окрашивание, Окрашивание локализуется на границе материнских и плодовых тканей.Для электронно-микроскопического исследования аналогичные ткани фиксировали в 4/-ном растворе параформальдегида и после обычной электронно-микроскопической проводки заливали в эпонаралдит, изготавливали ультратонкие срезы, монтировали их на медных сетках и оставляли плавать в капле реагента на ночь. Материал исследовался в электронном микроскопе. В результате в желчном мешке крысы фермент расположен на границе материнских и плодовых тканей, в печени крыс - во вторичных лизосомах. В первичных лизосомах фермент отсутствует. В первом случае на срез ткани на ночьнаслаивали концентрированный раствор альбумин-коллоидное золото. Во втором случае на срез ткани наслаивали окислен ный глутатион в дистиллированной воде вколичестве 10-20 мг/мл и выдерживали в течение 12 ч, Затем наслаивали полученный реактив и выдерживали в течение 10 ч, В третьем случае на срез ткани наслаивали 10 5;-ный раствор перекиси водорода в метиловом спирте на 1 ч, а затем наслаивали реактив на 12 ч. Окраска не всегда подавлялась полностью. В контроле окрашивание полностью отсутствовало.15 Предлагаемая среда находит широкоеприменение при диагностике различных заболеваний, связанных с нарушением процессов перекисного окисления (опухолевых, воспалительных, склеротических), при 20 оценке экспериментального материала,особенно при сопоставлении биохимических и морфологических данных.Ф ор мул а из обре те н и я Среда для окрашивания глутатион-ре дуктазы на срезах тканей, содержащая четыреххлористоводородную соль золота и цитрат натрия и воду, о т л и ч а ю щ а я с я тем, что, с целью полного выявления фермента в ткани, среда дополнительно содер жит окисленный глутатион и сывороточныйальбумин при следующих соотношениях компонентов, мас, ,: четыреххлористоводородная соль золота 0,003-0,2; цитрат натрия 0,5-2,0; окисленный глутатион 0,005-0,05;35 сывороточный альбумин 0,005-0,05; вода -остальное.

Смотреть

Заявка

4721201, 19.07.1989

СИБИРСКИЙ ФИЛИАЛ ВСЕСОЮЗНОГО НАУЧНОГО ЦЕНТРА ХИРУРГИИ АМН СССР

ГЛАЗЫРИН АЛЕКСЕЙ ЛЕОНИДОВИЧ, КОЛЕСНИКОВ СЕРГЕЙ ИВАНОВИЧ, СЕМЕНЮК АЛЕКСАНДР ВАСИЛЬЕВИЧ, СВИРИДОВ АЛЕКСЕЙ ВАСИЛЬЕВИЧ

МПК / Метки

МПК: G01N 1/28

Метки: глутатион-редуктазы, срезах, окрашивания, тканей, среда

Опубликовано: 23.03.1992

Код ссылки

<a href="http://patents.su/2-1721468-sreda-dlya-okrashivaniya-glutation-reduktazy-na-srezakh-tkanejj.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Среда для окрашивания глутатион-редуктазы на срезах тканей</a>

Похожие патенты